□ 柏中波 王 晶 張國(guó)瑩 遼寧通正檢測(cè)有限公司

食品中苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸等防腐劑、非食品添加劑富馬酸二甲酯以及糖精鈉、乙?；前匪徕洝⑺拱吞鸷桶⒘μ?種甜味劑在食品中應(yīng)用非常廣泛，且在GB 2760-2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中有明確的使用限定。本文主要目的就是在更短的樣品處理和檢測(cè)時(shí)間下，更簡(jiǎn)便的操作方法下，將8種物質(zhì)聯(lián)合檢測(cè)出來。

1 材料及方法

1.1 試劑和材料

1.1.1 試劑

①亞鐵氰化鉀溶液（92 g/L）：稱取106 g三水合亞鐵氰化鉀，加入適量水溶解，用水定容至1 000 mL。②乙酸鋅溶液（183 g/L）：稱取220 g二水乙酸鋅超聲使溶于500 mL水中，量取30 mL冰乙酸加入，最后用水定容至1 000 mL。③乙酸銨溶液（0.02 mol/L）：稱取3.08 g乙酸銨，用少量水轉(zhuǎn)移至1 L容量瓶中，加水定容。過0.45 μm水相微孔濾膜后超聲脫氣備用。

1.1.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

水中乙?；前匪徕?、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸、阿斯巴甜、富馬酸二甲酯、阿力甜。

1.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

分別吸取適量體積的標(biāo)準(zhǔn)品于1 mL容量瓶，用水定容后得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2 儀器和設(shè)備

島津LC-20A，帶二極管陣列（PDA）檢測(cè)器；分析天平，感量為0.001 g和0.000 01 g；超聲波清洗儀；渦旋振蕩器；離心機(jī)，轉(zhuǎn)速＞8 000 r/min。

1.3 色譜條件

C18柱，內(nèi)徑4.6 mm，粒徑5 μm，柱長(zhǎng)150 mm。

流動(dòng)相：溶劑A，0.02 mol/L乙酸銨溶液；溶劑B，甲醇。

梯度洗脫程序：0～5 min，流速 1～ 0.8 mL/min， 甲 醇 5%；5～20 min， 流 速0.8～1mL/min， 甲 醇10%；20～40 min，流速1 mL/min，甲醇38%；40～48 min，甲醇5%。

進(jìn)樣量：20 μL，柱溫30 ℃。

檢測(cè)波長(zhǎng)：阿斯巴甜和阿力甜，200 nm；富馬酸二甲酯，220 nm；乙?；前匪徕洝⒈郊姿?、山梨酸、糖精鈉，230 nm；脫氫乙酸，293 nm。

1.4 試樣處理

分別準(zhǔn)確稱取約2.5 g（精確到0.001 g）的試樣于50 mL具塞離心管中，用10 mL移液槍準(zhǔn)確加入18 mL甲醇水（1+1）溶液，旋緊蓋子后渦旋使充分混勻，于50 ℃水浴條件下超聲震蕩30 min，取出后充分震蕩30 s，待冷卻至室溫后加入2 mL亞鐵氰化鉀溶液和2 mL乙酸鋅溶液，再次旋緊蓋子渦旋震蕩30 s，使提取液充分混勻后于9 000 r/min條件下離心1 min，取適量上清液過0.22 μm有機(jī)系濾膜，棄去前3滴，待液相色譜測(cè)定（當(dāng)樣品澄清透明且不含蛋白質(zhì)時(shí)，如碳酸飲料、果酒、果汁、蒸餾酒等，可不加沉淀劑，直接加入4 mL水，搖勻后過膜上機(jī)）。

2 結(jié)果及分析

2.1 色譜條件選擇

2.1.1 梯度洗脫程序建立

在設(shè)定初始濃度甲醇+乙酸銨=5+95和4+96時(shí)，糖精鈉和脫氫乙酸出峰時(shí)間重合，無法對(duì)兩個(gè)色譜峰進(jìn)行單獨(dú)的積分計(jì)算。調(diào)整洗脫比例為甲醇+乙酸銨=10+90，流速為1 mL/min時(shí)分離度為1.547，調(diào)整流速為0.8 mL/min時(shí)分離度為1.698。而乙酰磺胺酸鉀在洗脫比例為甲醇+乙酸銨=5+95，流速為1 mL/min時(shí)出峰時(shí)間為6.98 min，才能和樣品中其他干擾雜峰相對(duì)分離開。因此，在梯度洗脫過程中選擇初始條件為時(shí)間0～5 min，流速?gòu)? mL/min降至0.8 mL/min，甲醇比例在5 min處從5%改成10%。因?yàn)榘⑺拱吞?、阿力甜和富馬酸二甲酯三種物質(zhì)在甲醇+乙酸銨=5+95等度洗脫時(shí)，出峰時(shí)間較晚，分析效率低。在20 min后調(diào)整流動(dòng)相比例為甲醇+乙酸銨=62+38時(shí)，3種物質(zhì)保留時(shí)間在28 min后，基線平穩(wěn)，分離度達(dá)到1.5以上，峰展寬適中，所以梯度洗脫程序設(shè)定為在20 min后，調(diào)整甲醇+乙酸銨=62+38，并保持20 min，在40 min后調(diào)整回初始濃度，保持8 min使基線重新平穩(wěn)。

2.1.2 波長(zhǎng)選擇

由PDA光譜圖可知阿斯巴甜和阿力甜在200 nm處有最大吸收；富馬酸二甲酯和脫氫乙酸分別在220 nm和293 nm處有最大吸收；而乙酰磺胺酸鉀、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉4種物質(zhì)在230 nm波長(zhǎng)下吸收值較大，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好，且來自流動(dòng)相的基質(zhì)干擾小，所以選定230 nm做4種物質(zhì)的檢測(cè)波長(zhǎng)。

具體標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖如圖1-3所示。

圖1 阿斯巴甜及阿力甜色譜圖

圖2 乙?；前匪徕?、苯甲酸、山梨酸及糖精鈉色譜圖

圖3 脫氫乙酸色譜圖

表1 添加回收結(jié)果數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)表

2.2 線性范圍及相關(guān)系數(shù)

對(duì)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行方法學(xué)考察驗(yàn)證，其中乙?；前匪徕洏?biāo)準(zhǔn)線性范圍在2～20μ g/mL時(shí)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2為0.999 76；苯甲酸、山梨酸、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)線性范圍在0～100 μg/mL時(shí)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2分別為0.999 66、0.999 97、0.999 98；脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn) 線 性 范 圍 在 1μ ～ 100 μg/mL 時(shí) 線 性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2為0.999 98；阿斯巴甜和阿力甜標(biāo)準(zhǔn)線性范圍在0～100 μg/mL時(shí)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2分別為0.999 36、0.999 69；富馬酸二甲酯標(biāo)準(zhǔn)線性范圍在2～25 μg/mL時(shí)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2為 0.999 38。

分別準(zhǔn)確稱取約2.5 g純牛奶、涼拌土豆絲、雞肉、酥餅試樣各6份，添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量及回收率、變異系數(shù)見表1。

3 小結(jié)

本方法及本色譜條件對(duì)食品中的苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸3種防腐劑，非食品添加劑富馬酸二甲酯，以及糖精鈉、乙?；前匪徕?、阿斯巴甜和阿力甜4種甜味劑的檢測(cè)，不僅操作方法方便快捷，分析時(shí)間短，結(jié)果精密度及準(zhǔn)確度好，更利于提高工作效率，適用于大批量樣品的檢測(cè)。