抗病毒顆粒藥理作用研究

武晉孝，侯麗麗，劉春龍，張 麗，晏永新

(1.山西省飼料獸藥監(jiān)察所，山西太原030027 ； 2.江西出入境檢驗(yàn)檢疫局綜合技術(shù)中心，江西南昌330002 ； 3.江西新世紀(jì)民星動(dòng)物保健品有限公司，江西南昌330096)

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展和人民生活水平的提高，人們對(duì)食品安全問(wèn)題越來(lái)越重視。因此，開(kāi)發(fā)安全有效的中獸藥顯得非常有必要。中獸藥在我國(guó)有幾千年的應(yīng)用歷史，具有價(jià)格低廉、不易產(chǎn)生耐藥性，藥物殘留少等特點(diǎn)，將中獸藥特別是復(fù)方制劑應(yīng)用于畜禽的疾病防治已經(jīng)成為一種趨勢(shì)[1-2]。抗病毒顆粒處方出自張仲景的《傷寒論》，由板藍(lán)根、連翹等9味中藥組成，具有清熱祛濕，涼血解毒之功效，用于感冒風(fēng)熱，溫病發(fā)熱，肺衛(wèi)熱盛證，癥見(jiàn)發(fā)熱頭痛，咳嗽，咽干，咽喉腫痛?？共《绢w粒作為中藥制劑，主要用于防止畜禽感染性疾病。本試驗(yàn)研究了抗病毒顆粒的抗菌、抗病毒、解熱及抗炎作用，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 KM小鼠，SPF級(jí)，60只，雄性，體重16～18 g；SD大鼠，SPF級(jí)，65只，雄性，體重160～180 g，湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCXK(湘)2013-0004。

1.2 菌株和病毒株 金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌和溶血性鏈球菌均來(lái)源于江西省臨床檢檢中心試劑站；甲型流感病毒FMI株，由中國(guó)藥品生物檢定所提供，經(jīng)小鼠增強(qiáng)毒力后，于雞胚尿囊腔傳代2次，并測(cè)定其半數(shù)致死量LD50=4.2。

1.3 藥品、試劑與儀器 抗病毒顆粒，亳州市乾元?jiǎng)游锼帢I(yè)有限責(zé)任公司提供，批號(hào)：20150304；利巴韋林顆粒，四川百利藥業(yè)有限公司，批號(hào)：140367；復(fù)方乙酰水楊酸片，遠(yuǎn)大醫(yī)藥(中國(guó))有限公司，批號(hào)：140409；吲哚美辛腸溶片，山西云鵬制藥有限公司，批號(hào)：A140402；牛肉膏，北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào)：20140202；蛋白胨，北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào)：20141208；瓊脂(Agar Powder)，Sigma公司，Cat# A8190；無(wú)菌脫纖維羊血，上海永輝羊業(yè)有限公司，批號(hào)：20150214；二甲苯，天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)：201312；高活性干酵母，13 g/袋，安琪酵母股份有限公司，批號(hào)：20140818。DT-1TB型電子體溫計(jì)(上海華辰醫(yī)用儀表有限公司)；電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；MIR-162型多功能培養(yǎng)箱(日本SANYO公司)；MCO-17AIC型CO2培養(yǎng)箱(日本SANYO公司)。

1.4 抗病毒顆粒體外抑菌試驗(yàn)[3-5]取滅菌試管10支，分別制備藥物的10個(gè)梯度濃度(2倍稀釋法)分別為：100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.781，0.391、0.195 mg生藥/mL，將金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌和溶血性鏈球菌接種于對(duì)應(yīng)平皿中，培養(yǎng)24 h 取出，觀察不同細(xì)菌在不同濃度的藥物平皿上生長(zhǎng)情況，確定最低抑菌濃度(MIC)。

1.5 抗病毒顆粒對(duì)甲型流感病毒FMI株引起小鼠死亡的保護(hù)作用[3-5]取KM小鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為：空白組、模型組、陽(yáng)性藥利巴韋林組、抗病毒顆粒高、中、低劑量組。動(dòng)物乙醚麻醉后，除空白組外，其他各組分別滴鼻接種已滴定的病毒液50 μL/只,空白組滴鼻等容量的生理鹽水。在接種2 h后，各組動(dòng)物灌胃給予相應(yīng)藥物，給藥容量20 mL/kg·bw，共給藥5 d，每日觀察動(dòng)物存活情況，共觀察14 d，記錄動(dòng)物的死亡數(shù)量和死亡率。

1.6 抗病毒顆粒對(duì)干酵母所致大鼠發(fā)熱模型的影響[3-5]大鼠適應(yīng)環(huán)境后，于試驗(yàn)前1天用電子體溫計(jì)對(duì)各試驗(yàn)動(dòng)物正常體溫進(jìn)行測(cè)量，測(cè)量肛溫時(shí)，宜先將其直腸內(nèi)糞便擠出，再將蘸有少量液體石蠟的電子體溫計(jì)從肛門輕輕插入，進(jìn)行體溫測(cè)量，選擇56只體溫正常及范圍波動(dòng)小的動(dòng)物供試驗(yàn)使用。將56只SD大鼠隨機(jī)分為6組，即空白組、模型組、陽(yáng)性藥復(fù)方乙酰水楊酸組、抗病毒顆粒高、中、低劑量組，除空白組6只外，其他每組10只，并按10 mL/kg·bw的容積灌胃相應(yīng)藥物，連續(xù)3 d。于第3天試驗(yàn)前禁食10 h，末次給藥前測(cè)量各組動(dòng)物體溫作為造模前的體溫，于給藥后1 h，每只大鼠背部皮下注射20%干酵母懸液10 mL/kg·bw復(fù)制大鼠發(fā)熱模型，分別測(cè)量造模后第3、5、7 小時(shí)動(dòng)物體溫。以每只動(dòng)物造模后體溫值減去造模前體溫值，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)體溫變化值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.7 抗病毒顆粒對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響[3-5]取KM小鼠50只隨機(jī)分5組，即對(duì)照組，陽(yáng)性藥吲哚美辛組、抗病毒顆粒高、中、低劑量組，每組10只，除對(duì)照組外，其他各給藥組按劑量灌胃給藥，給藥容量為20 mL/kg·bw，對(duì)照組給予等容量蒸餾水，每天給藥1次，連續(xù)給藥3 d，末次給藥后1 h，將50 μL二甲苯涂于小鼠左耳前后兩面造成耳腫脹模型，右耳不作處理，造模后1 h將小鼠頸椎脫臼處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用8 mm打孔器分別在同一部位打下圓耳片，用電子天平精確稱重，以左耳重減右耳重為小鼠的耳腫脹度，并求出抑制率。

抑制率(%)=(模型組耳腫脹平均值-給藥組耳腫脹平均值)/模型組耳腫脹平均值×100%

1.8 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)方差齊性檢驗(yàn)后，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間差異比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和卡方檢驗(yàn)。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 抗病毒顆粒體外抑菌試驗(yàn) 抗病毒顆粒對(duì)金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌的最低抑菌濃度(MIC)均為3.125 mg/mL，對(duì)溶血性鏈球菌的最低抑菌濃度(MIC)為6.25 mg/mL，以上結(jié)果表明，本品對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、溶血性鏈球菌均有一定的抑制作用，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 抗病毒顆粒體外抑菌(平皿法)結(jié)果

2.2 抗病毒顆粒對(duì)甲型流感病毒FMI株引起小鼠死亡的保護(hù)作用 與空白組比較，接種病毒組動(dòng)物表現(xiàn)聳毛、活動(dòng)減少等現(xiàn)象。模型對(duì)照組動(dòng)物死亡率最高，其次為抗病毒顆粒低劑量和中劑量組，然后為抗病毒顆粒高劑量組，死亡率最低的為利巴韋林組，與模型組比較，各組均能顯著降低小鼠的死亡率(P<0.01或P<0.05)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 抗病毒顆粒對(duì)接種流感病毒小鼠死亡保護(hù)的影響

注：與模型組比較，*：P<0.05，**：P<0.01

2.3 抗病毒顆粒對(duì)干酵母所致大鼠發(fā)熱模型的影響 模型組在造模后的3個(gè)時(shí)間點(diǎn)，動(dòng)物體溫均明顯上升，與空白組比較有顯著性差異，而空白組各時(shí)間點(diǎn)體溫?zé)o明顯變化；陽(yáng)性藥復(fù)方乙酰水楊酸在造模后各時(shí)間點(diǎn)體溫明顯降低；高劑量組動(dòng)物在造模后第7 小時(shí)體溫明顯降低，與模型組比較有顯著性差異，以上結(jié)果表明，抗病毒顆粒具有一定的解熱作用，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 抗病毒顆粒對(duì)干酵母致發(fā)熱大鼠模型體溫的影響 (Mean±SD)

注：與模型組比較，*：P<0.05，**：P<0.01

2.4 抗病毒顆粒對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響 與對(duì)照組比較，抗病毒顆粒各劑量組及陽(yáng)性藥吲哚美辛組，均可明顯減輕小鼠的耳腫脹度，抑制率分別達(dá)38.08%、26.14%、25.23%、42.52%。以上結(jié)果表明，抗病毒顆粒具有較強(qiáng)的抗炎作用，呈現(xiàn)一定的劑量依賴關(guān)系，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 抗病毒顆粒對(duì)小鼠耳腫脹度的影響 (Mean ± SD)

注：與對(duì)照組比較，*：P<0.05，**：P<0.01

3 討論

抗病毒顆粒處方出自張仲景的《傷寒論》，其中處方中板藍(lán)根為君藥，板藍(lán)根具有清熱解毒、涼血消斑、潤(rùn)肺利咽之功效，研究表明，板藍(lán)根的水提液或板藍(lán)根制劑具有較強(qiáng)的抗流感病毒作用，對(duì)流感病毒、甲型流感病毒、乙型腦炎病毒、腮腺炎病毒、肝炎病毒、人巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒和腎出血熱病毒均有良好的抑制作用[1,6]；連翹具有清熱解毒、疏風(fēng)散熱、消腫散結(jié)等功效，具有抗菌、抗病毒、抗炎等作用，其對(duì)流感病毒、腮腺炎病毒、呼吸道病毒及畜禽感染的主要病毒具有很強(qiáng)的干擾和抑制作用；蘆根清熱生津；石膏外解肌熱，內(nèi)清肺火，地黃滋陰涼血，廣藿香則消暑濕寒熱?？共《绢w粒具有清熱祛濕，涼血解毒之功效，具有解熱、抗病毒、抗炎等藥理作用，常用于病毒和細(xì)菌感染引起的流感、手足口病、上呼吸道感染、病毒性感冒及紅眼病等[7]。

現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，抗病毒各種制劑均表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗病毒、抗炎、解熱等藥理作用。盧華等[8]研究發(fā)現(xiàn)，抗病毒顆粒對(duì)流感病毒性肺炎小鼠有明顯的保護(hù)作用，可對(duì)2,4-二硝基苯酚所致大鼠體溫升高有明顯的抑制作用，能明顯對(duì)抗二甲苯所致的小鼠耳腫脹，對(duì)小鼠皮下棉球肉芽組織的增生有一定的抑制作用。張誠(chéng)光[9]等研究發(fā)現(xiàn)，抗病毒顆粒能明顯延長(zhǎng)甲型流感病毒FM1株感染小鼠的平均存活時(shí)間和存活率，對(duì)甲型流感病毒FM1株感染小鼠的肺指數(shù)也有顯著抑制作用，同時(shí)它對(duì)2,4一二硝基苯酚所致大鼠發(fā)熱有顯著抑制作用，它還能使蛋清所致大鼠足腫脹明顯縮小。苗明三[10]采用2,4-二硝基苯酚大鼠發(fā)熱模型和內(nèi)毒素家兔發(fā)熱模型研究發(fā)現(xiàn)，抗病毒口服液對(duì)兩種模型都具有較好的解熱作用。劉曉帆等[11]報(bào)道，抗病毒口服液對(duì)3種病毒株在雞胚體外有明顯的抑制作用或殺滅作用，在雞胚內(nèi)對(duì)雞胚尿囊液 HA 效價(jià)有明顯抑制趨勢(shì)，但統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無(wú)差異顯著性。

本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，抗病毒顆粒對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、溶血性鏈球菌均有一定的抑制作用，其最低抑菌濃度(MIC)分別為：3.125、3.125、6.25 mg/mL生藥；對(duì)甲型流感病毒FM1引起的小鼠死亡有較好的保護(hù)作用；能明顯降低酵母所

致大鼠發(fā)熱模型動(dòng)物體溫；能明顯抑制二甲苯所致小鼠耳腫脹的程度。本試驗(yàn)研究結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致，這說(shuō)明抗病毒顆粒具有較好的抑菌、抗病毒、解熱、抗炎作用，可為臨床應(yīng)用提供較好的理論依據(jù)?？共《绢w粒作為畜禽用中藥，屬于綠色天然藥物，不僅能預(yù)防治療由于病毒和細(xì)菌感染引起的各類畜禽疾病，還能防止由于抗生素、激素濫用引起的各種藥物殘留問(wèn)題，這為畜禽的疾病防治提供了一種新的模式。