2017年浙江省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對結(jié)果分析

吳贇竑，張紅麗，吳雪軍，劉 霞，馮肖肖，趙靈燕

(浙江省動物疫病預(yù)防控制中心，浙江杭州311199)

獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室是指隸屬于各級獸醫(yī)主管部門，承擔動物疫病檢測、診斷和監(jiān)測等工作的獸醫(yī)實驗室，作為動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)的組成部分，對動物疫病防控發(fā)揮著重要支撐工作[1]。其中動物疫病檢測是獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室職責范圍內(nèi)的一項重要工作，而實驗室檢測能力和水平則是實驗室的核心，是動物疫病防控提供技術(shù)支撐的固基之本、源之所在[2]。提升獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力和水平，是做好動物疫病防控工作的關(guān)鍵。

通過參加實驗室間的比對試驗，可以證明實驗室具備持續(xù)提供可靠檢測結(jié)果的技術(shù)能力。比對試驗的結(jié)果是一個實驗室技術(shù)管理水準和操作水平能力的綜合體現(xiàn)，對于實驗室管理者來說，也是一個有效的質(zhì)量控制手段[3]。目前，浙江省已有17個獸醫(yī)實驗室通過了計量認證，實驗室認證資格的取得和維持，離不開實驗室檢測能力比對[4]。自2011年以來，浙江省連續(xù)7年舉辦全省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對，所選比對項目緊密結(jié)合當前動物疫病防控形勢，切實提高了全省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力。2017年，依據(jù)農(nóng)業(yè)部辦公廳和浙江省畜牧獸醫(yī)局有關(guān)2017年獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對工作的文件要求[5-6]，浙江省動物疫病預(yù)防控制中心組織實施了2017年度全省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對工作。共有55個市、縣(市、區(qū))參加了此次比對，在規(guī)定時間內(nèi)完成樣品的制備，分發(fā)，檢測和結(jié)果報告。

1 比對材料與方法

1.1 比對項目 依據(jù)浙江省畜牧獸醫(yī)局有關(guān)2017年獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對工作的文件[6]要求，此次比對共設(shè)置5個項目，分別是高致病性禽流感H5亞型Re-8株抗體檢測、O型口蹄疫抗體檢測、豬繁殖與呼吸綜合征病毒型別鑒定檢測、非洲豬瘟病毒檢測和布魯菌病抗體檢測(采用試管凝集試驗方法)。市本級獸醫(yī)實驗室參加全部五個項目，縣(市、區(qū))獸醫(yī)實驗室根據(jù)實驗室檢測能力選擇參加三個及以上項目。其中，參加全部5個項目的實驗室有13個，參加4個項目的有2個，參加3個項目的有40個。

1.2 比對方法及試劑 比對各項目所采用方法，依據(jù)標準及所用試劑見表1。

1.3 比對樣品 由浙江省疫控中心完成所有比對項目樣品的制備、標定、分裝和編號，并根據(jù)實驗室參加的不同比對項目進行分發(fā)。

表1 比對試驗的標準、方法和試劑

*：根據(jù)實驗室檢測能力選擇采用熒光RT-PCR或RT-PCR方法進行檢測，其中豬繁殖與呼吸綜合征病毒型別鑒定檢測項目9個實驗室采用熒光RT-PCR方法，9個實驗室采用普通RT-PCR方法；非洲豬瘟病毒檢測10個實驗室采用熒光RT-PCR方法，5個實驗室采用普通RT-PCR方法

1.3.1 高致病性禽流感H5亞型Re-8株抗體樣品 在參考值為<1、5、7、9的雞血清中隨機抽取5份組成1組樣品。

1.3.2 O型口蹄疫病毒抗體樣品 在參考值為<1∶8、1∶90、1∶360的牛血清中隨機抽取5份組成1組樣品。

1.3.3 豬繁殖與呼吸綜合征病毒型別鑒定檢測 在參考值為高致病性豬藍耳病陽性、經(jīng)典株豬藍耳病陽性與陰性的病毒樣品中隨機抽取6份組成1組樣品。

1.3.4 布魯菌病抗體樣品 在參考值為<1∶25、1∶50、>1∶200的病毒樣品中隨機抽取6份組成1組樣品。

1.4 評判標準

1.4.1 高致病性禽流感H5亞型Re-8株抗體檢測評判標準 全部比對樣品檢測值效價在參考值效價±1(包括±1)范圍內(nèi)，判為結(jié)果正確；有一個及以上樣品檢測值偏離參考值±2及以上，判為比對結(jié)果存在較大偏差。

1.4.2 O型口蹄疫病毒抗體檢測評判標準 全部比對樣品檢測值效價在參考值效價±1(包括±1)范圍內(nèi)，判為結(jié)果正確；有一個及以上樣品檢測值偏離參考值±1以上，判為比對結(jié)果存在較大偏差。

1.4.3 豬繁殖與呼吸綜合征病毒型別鑒定檢測評判標準 全部比對樣品檢測結(jié)果與參考值完全一致，判為結(jié)果正確；與參考值不一致，判為比對結(jié)果存在較大偏差。

1.4.4 非洲豬瘟病毒檢測評判標準 全部比對樣品檢測結(jié)果與參考值完全一致，判為結(jié)果正確；與參考值不一致，判為比對結(jié)果存在較大偏差。

1.4.5 布魯菌病抗體檢測評判標準 全部比對樣品檢測值效價在參考值效價±1(包括±1)范圍內(nèi)并定性結(jié)果正確，判為結(jié)果正確；有一個及以上樣品檢測值偏離參考值±2以上或定性結(jié)果錯誤的，判為比對結(jié)果存在較大偏差。

2 結(jié)果與分析

2.1 總體結(jié)果 根據(jù)檢測結(jié)果評判，參加比對的55個獸醫(yī)實驗室中有31個實驗室參加的所有比對項目檢測結(jié)果全部正確。有16個實驗室有1個比對項目存在較大偏差，有6個實驗室有2個比對項目部分比對檢測值存在較大偏差，有2個實驗室有3個比對項目存在較大偏差(見表2)。

表2 55個實驗室比對結(jié)果統(tǒng)計

2.2 高致病性禽流感H5亞型Re-8株抗體比對結(jié)果 本項目共有53個實驗室參加，有51個實驗室對5份樣品檢測結(jié)果全部正確，實驗室比對正確率為96.23%。有2個實驗室的部分樣品檢測值與參考值存在較大偏差(見表3)。

表3 高致病性禽流感H5亞型Re-8株抗體比對試驗結(jié)果

2.3 O型口蹄疫病毒抗體比對結(jié)果 本項目共有55個實驗室參加，有51個實驗室對5份樣品檢測結(jié)果全部正確，實驗室比對正確率為92.73%。有4個實驗室的部分樣品檢測值與參考值存在較大偏差(見表4)。

2.4 豬繁殖與呼吸綜合征病毒型別鑒定比對結(jié)果 本項目共有18個實驗室參加，有12個實驗室對6份樣品檢測結(jié)果全部正確，實驗室比對正確率為66.67%。有6個實驗室的部分樣品檢測值與參考值存在較大偏差(見表5)。

表4 O型口蹄疫病毒抗體比對試驗結(jié)果

表5 豬繁殖與呼吸綜合征病毒型別鑒定比對試驗結(jié)果

2.5 布魯菌病抗體比對結(jié)果 本項目共有52個實驗室參加，有35個實驗室對6份樣品檢測結(jié)果全部正確，實驗室比對正確率為67.31%。有17個實驗室的部分樣品檢測值與參考值存在較大偏差(見表6)。

表6 布魯菌病抗體比對試驗結(jié)果

3 討論

參加此次獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對的各個實驗室均在規(guī)定時間內(nèi)完成了比對試驗，總體情況看，參加檢測能力比對的實驗室數(shù)量較往年有所減少，常規(guī)的禽流感抗體檢測和口蹄疫抗體檢測兩個項目的正確率較高，超過90%，這也與市縣日常主要的檢測工作相符合。

3.1 本次比對試驗設(shè)置了參考值一致的平行樣品，部分實驗室對于該類樣品檢測結(jié)果不一致，存在不同程度的偏差；部分實驗室出現(xiàn)檢測報告樣品號填寫錯誤、所填檢測結(jié)果未按照結(jié)果上報單要求進行表述等現(xiàn)象，需加強實驗室規(guī)范化建設(shè)，建立和完善質(zhì)量管理體系。

3.2 本次比對針對當前國內(nèi)外面臨的疫情新形勢，設(shè)置了非洲豬瘟病毒檢測，縣(市、區(qū))實驗室可選擇參加，充分體現(xiàn)了貼合實際和自主性，但選擇參加該項比對的實驗室數(shù)量偏少，正確率也僅有66.67%。市縣級實驗室在日常檢測中，接觸到較多的為RNA病毒檢測項目，當遇到非洲豬瘟檢測項目為DNA病毒時，部分實驗室對于核酸提取的試驗方案的設(shè)計發(fā)生錯誤，導(dǎo)致最終結(jié)果發(fā)生偏差。而豬繁殖與呼吸綜合征病毒型別鑒定檢測項目中，有實驗室對陰性樣品檢測結(jié)果發(fā)生定性錯誤，可能與實驗室發(fā)生污染有關(guān)，還有部分實驗室對于陽性樣品未檢出，可能與樣品提取效率及試驗方案設(shè)計有關(guān)。

3.3 本次布魯菌病抗體檢測項目采用試管凝集方法，且增加了抗體效價的判定，部分實驗室的試驗定性準確，但是在具體效價的判定時卻發(fā)生了錯誤。布魯菌病試管凝集方法檢測步驟并不復(fù)雜，但是在判定結(jié)果時需要憑借檢測人員的主觀經(jīng)驗，這也暴露出部分實驗室在該項目檢測中的能力不足。

3.4 從比對結(jié)果來看，各獸醫(yī)實驗室檢測準確性仍有較大差異。11個市級實驗室參加項目多，有8個實驗室均有比對項目結(jié)果發(fā)生較大偏差的情況。這與當前疫病防控形勢對于市一級實驗室提出的要求不符，相關(guān)市級實驗室需針對本次比對試驗中發(fā)生偏差的項目，從人員配置、試驗方案、儀器設(shè)備等多方面分析查找原因，切實提高實驗室檢測能力和水平。