李二虎，張 耕，張 武，吳兵兵

（天津市農(nóng)藥檢定所，天津300061）

1 前言

百草枯和敵草快均屬于聯(lián)吡啶鹽類(lèi)除草劑［1］，可迅速被綠色植物組織吸收，對(duì)惡性闊葉雜草有特效，由于百草枯對(duì)哺乳動(dòng)物的毒性

極大，且無(wú)有效解毒藥，誤服后死亡率極高，目前百草枯水劑已被全面禁用，敵草快的毒性比百草枯低，具有一定的內(nèi)吸性，速效性與百草枯匹敵甚至更甚一籌，使用方便，敵草快成為百草枯的有力替代者，但由于敵草快的成本高且殺草譜有限，近來(lái)，一些不法企業(yè)在敵草快水劑中添加隱性成分百草枯、有的甚至于將百草枯水劑標(biāo)稱(chēng)為敵草快水劑進(jìn)行銷(xiāo)售擾亂農(nóng)藥市場(chǎng)，百草枯在血漿和食品中的檢測(cè)方法已有研究報(bào)道［2-5］，但在同類(lèi)的敵草快制劑中的檢測(cè)方法未見(jiàn)報(bào)道，為了防止和打擊不法企業(yè)的這種違法行為，作者對(duì)敵草快水劑中篩查隱性成分百草枯的檢測(cè)方法進(jìn)行了研究。

2 試驗(yàn)部分

2.1 試劑和溶液 乙腈：色譜純；庚磺酸鈉、磷酸、三乙胺：分析純；水：純凈水（娃哈哈?）；百草枯標(biāo)樣（已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.4％），敵草快標(biāo)樣（已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.8％）均由農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所提供；不同品牌敵草快水劑（由農(nóng)藥經(jīng)營(yíng)點(diǎn)購(gòu)置）。

2.2 儀器 高效液相色譜儀：Agilent 1100，具有二極管陣列檢測(cè)器和自動(dòng)進(jìn)樣器；Agilent色譜工作站；色譜柱：250mm×4.6mm（id）不銹鋼柱，內(nèi)裝ZORBAX SB-C18、5μm填充物；過(guò)濾器：濾膜孔徑約0.45μm。

2.3 液相色譜操作條件 流動(dòng)相：稱(chēng)取3.64g庚磺酸鈉于900mL水中，加入16mL磷酸，再用8.0mL三乙胺調(diào)pH＝2.0，加入100mL水，用 0.45μm 濾 膜 過(guò) 濾，超 聲 10min。流 量：0.6mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)為：290nm；進(jìn)樣體積：10μL；保留時(shí)間：百草枯約為16.8min；敵草快約為18.8min。百草枯和敵草快標(biāo)樣的高效液相色譜圖（圖1、2）。

圖1 百草枯標(biāo)準(zhǔn)溶液高效液相色譜圖

圖2 敵草快標(biāo)準(zhǔn)溶液高效液相色譜色譜圖

2.4 測(cè)定步驟

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 分別稱(chēng)取百草枯和敵草快標(biāo)樣約0.02g（精確至0.000 2g），置于100mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.4.2 樣品溶液的配制 稱(chēng)取敵草快水劑約0.1g（精確至0.000 2g），置于100mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.4.3 測(cè)定 在上述操作條件下，采用保留時(shí)間進(jìn)行定性，試樣中百草枯或敵草快的保留時(shí)間與標(biāo)樣溶液中的保留時(shí)間相對(duì)差值均在1.5％以?xún)?nèi)，同時(shí)對(duì)兩者的吸收光譜圖進(jìn)行比較，如果吸收光譜圖也一致即可以確認(rèn)。根據(jù)試樣中百草枯（或敵草快）的含量情況，選擇濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行色譜分析，以峰面積外標(biāo)法進(jìn)行定量。在儀器基線(xiàn)穩(wěn)定時(shí)，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)溶液，直至相鄰2針標(biāo)準(zhǔn)溶液的響應(yīng)值變化＜1.5％后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

2.4.4 計(jì)算 將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中百草枯或敵草快峰面積分別進(jìn)行平均，試樣中百草枯或敵草快的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω（％），按照式（1）進(jìn)行計(jì)算：

式中：

A1——標(biāo)樣溶液中百草枯（或敵草快）峰面積的平均值；

A2——試樣溶液中百草枯（或敵草快）峰面積的平均值；

m1——標(biāo)樣的質(zhì)量，g

m2——試樣的質(zhì)量，g

P——標(biāo)樣中百草枯（或敵草快）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，％

3 結(jié)果與討論

3.1 分析方法的選擇 采用串聯(lián)液質(zhì)聯(lián)用進(jìn)行檢測(cè)敵草快水劑中百草枯時(shí)，由于百草枯的母離子為 m／z185，敵草快的母離子 m／z為183，兩者非常接近且結(jié)構(gòu)類(lèi)似，均屬于聯(lián)吡啶類(lèi)化合物，在水中完全溶解并電離為陽(yáng)離子，兩者子離子峰質(zhì)量數(shù)也基本相同，且在反相色譜柱上幾乎沒(méi)有保留，兩者出峰時(shí)間一致，離子對(duì)試劑由于不容易揮發(fā)無(wú)法在串聯(lián)液質(zhì)聯(lián)用上使用，所以很難采用普通低分辨串聯(lián)液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)篩查敵草快水劑中的百草枯，但可以在流動(dòng)相中添加離子對(duì)試劑采用高效液相色譜法使兩者完全分離進(jìn)行定性與定量。

3.2 液相色譜條件的優(yōu)化 由于百草枯和敵草快化學(xué)性質(zhì)相近，均屬于聯(lián)吡啶類(lèi)除草劑，在反相液相色譜上保留非常弱，保留時(shí)間非常接近，為了將兩者完全分離，作者采用添加離子對(duì)試劑、采用長(zhǎng)色譜柱、較低流速的辦法，試驗(yàn)結(jié)果表明，采用SB-C18，4.6×250mm的不銹鋼色譜柱，以庚磺酸鈉-乙腈-緩沖溶液為流動(dòng)相，0.6mL／min流量可以將兩者完全分離，由于敵草快和百草枯的最大吸收波長(zhǎng)不同，百草枯最大吸收波長(zhǎng)為260nm，敵草快最大吸收波長(zhǎng)為310nm。百草枯的吸收曲線(xiàn)（圖3），敵草快的吸收曲線(xiàn)（圖4）。為了同時(shí)測(cè)定敵草快和百草枯的含量，采用290nm的檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)無(wú)相互干擾且響應(yīng)值滿(mǎn)足檢測(cè)要求。

圖3 百草枯吸收光譜曲線(xiàn)圖

圖4 敵草快吸收光譜曲線(xiàn)圖

3.3 分析方法的實(shí)際應(yīng)用 采用上述方法對(duì)市售的敵草快水劑進(jìn)行了驗(yàn)證檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)有的敵草快水劑中添加了百草枯成分（圖5）；有的未檢出敵草快、全部成分為百草枯（圖6）；有的為合格的敵草快水劑，未添加隱性成分百草枯（圖7）。

圖6 敵草快水劑樣品實(shí)測(cè)圖 （全部為百草枯）

圖7 敵草快水劑樣品實(shí)測(cè)圖 （不含百草枯）

3.4 分析方法的線(xiàn)性相關(guān)性試驗(yàn) 配制百草枯和敵草快的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照前述的色譜方法進(jìn)樣，以百草枯（敵草快）的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，在15～400mg／L范圍內(nèi)，得到百草枯的線(xiàn)性方程為y＝21.861x-35.008，相關(guān)系數(shù)為R2＝0.999 9。敵草快的線(xiàn)性方程為y＝19.278x-60.256，相關(guān)系數(shù)為R2＝0.999 9。

3.5 分析方法的精密度試驗(yàn) 以篩查出含有百草枯的敵草快水劑進(jìn)行試驗(yàn)，準(zhǔn)確稱(chēng)取5個(gè)試樣，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，測(cè)得敵草快的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.67％，百草枯的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.44％（表1）。

表1 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.6 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn) 從已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的敵草快水劑中稱(chēng)取5個(gè)試樣，分別加入一定量的敵草快標(biāo)樣和百草枯標(biāo)樣，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，測(cè)得敵草快的平均回收率為99.64％，百草枯的平均回收率為99.70％（表2）。

表2 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

4 結(jié)論

試驗(yàn)建立了高效液相色譜法篩查敵草快水劑中隱性成分百草枯的分析方法，試驗(yàn)結(jié)果表明，篩查方法簡(jiǎn)便、快速，同時(shí)該方法在測(cè)試濃度范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，方法檢測(cè)敵草快和百草枯的準(zhǔn)確度和精密度較高，可以作為篩查敵草快水劑中隱性成分百草枯較為簡(jiǎn)便的分析方法。