蔣艷茹 王金平

摘要：獸用生物制品的實(shí)際生產(chǎn)中對(duì)于細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)的過程中，如果有被支原體污染，則會(huì)對(duì)制品的質(zhì)量和安全性帶來較大的負(fù)面影響，同時(shí)對(duì)經(jīng)濟(jì)方面造成比較嚴(yán)重的損失。所以，在實(shí)際生產(chǎn)過程中應(yīng)該掌握相應(yīng)的支原體污染檢測(cè)的方法。該文對(duì)其相關(guān)的衍生技術(shù)及預(yù)防控制展開綜述，目的是為獸用生物制品工作中檢測(cè)和預(yù)防支原體的污染提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：獸用疫苗；生產(chǎn)；支原體；檢測(cè)

中圖分類號(hào)：S8 51.4

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：2095-9737（2018）07-0127-01

1 支原體的特點(diǎn)

支原體屬于原核微生物，不具有細(xì)胞壁，呈高度多形性，個(gè)體微小，能通過濾菌器，其毒株主要通過特殊的結(jié)構(gòu)黏附于宿主細(xì)胞膜上，并與相應(yīng)的受體結(jié)合，引起宿主細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的改變及誘導(dǎo)宿主細(xì)胞產(chǎn)生某些細(xì)胞因子，從而導(dǎo)致宿主細(xì)胞的免疫反應(yīng)異常，最終可以引起各種疾病的發(fā)生。根據(jù)相關(guān)的試驗(yàn)結(jié)果可知：國內(nèi)采用的普通疫苗和細(xì)胞生產(chǎn)活毒疫苗如果被支原體污染嚴(yán)重，這樣會(huì)給生物制藥企業(yè)帶來非常大的經(jīng)濟(jì)壓力，同時(shí)也不利于畜禽疾病防控丁作的順利開展。所以就要求相關(guān)的技術(shù)人員掌握支原體的檢測(cè)技術(shù)，以保證生物制品生產(chǎn)工作順利開展。

2 支原體的檢測(cè)

2.1 傳統(tǒng)檢測(cè)法

直接培養(yǎng)法：直接培養(yǎng)法是支原體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)方法，具體主要是將待檢樣品接種到支原體培養(yǎng)基上，對(duì)液體培養(yǎng)基的顏色和固體培養(yǎng)基上支原體菌落的變化進(jìn)行觀察，然后通過正確的判斷給出試驗(yàn)結(jié)果。這種方法的準(zhǔn)確率比較高，但是培養(yǎng)的時(shí)間卻比較長，同一個(gè)培養(yǎng)基中所有的支原體類型并不能全部的檢測(cè)出來，所以這種檢測(cè)方法一般應(yīng)用于種毒和成品的檢測(cè)方面。

DNA熒光染色法：此種方法也被稱為指示細(xì)胞法，該檢測(cè)方法的耗時(shí)比較短，且能夠同時(shí)對(duì)多個(gè)樣品進(jìn)行檢測(cè)，并且對(duì)于采用直接培養(yǎng)法不能檢測(cè)出的支原體給予正確的檢測(cè)。如果有條件在配制疫苗之前就進(jìn)行初步的檢測(cè)，將其中不合格的樣品去除掉，這樣能夠避免相應(yīng)的損失，并且疫苗的質(zhì)量可以有效的保證。

2.2 血清學(xué)法

被動(dòng)顆粒凝集試驗(yàn)（PPA）：可應(yīng)用于細(xì)菌、支原體的鑒定和抗體的定性檢測(cè)。我國相關(guān)的專家用此方式對(duì)肺炎支原體進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果可知被動(dòng)凝集法的操作比較簡單，卻具有比較高的精確性和敏感度，在實(shí)際的臨床生產(chǎn)中可以更有效的應(yīng)用。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ ELISA）：用此種方法是診斷人和動(dòng)物肺炎支原體實(shí)用和可靠的方法之一。本檢測(cè)方法操作簡單且特異性和敏感性較佳，目前已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于臨床獸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，并且成為檢測(cè)肺炎支原體臨床中的常規(guī)方法。

2.3 分子生物學(xué)技術(shù)

PCR檢測(cè)技術(shù)：支原體通常生長都比較緩慢，對(duì)于營養(yǎng)要求比較高，在種間存在交叉抗原等生物學(xué)特性。隨著相關(guān)領(lǐng)域研究人員逐漸深入對(duì)支原體的核酸結(jié)構(gòu)、分子組成及其特異性的了解，國際上已經(jīng)在支原體的檢測(cè)中融入了PCR技術(shù)，在特異性和靈敏性方面有更佳的表現(xiàn)，并且在獸用生物制品的生產(chǎn)中進(jìn)行了廣泛的推廣和應(yīng)用。但是，此種方法對(duì)于試驗(yàn)環(huán)境和儀器的要求標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)比較高。

巢式PCR檢測(cè)法：基于PCR檢測(cè)方法加以優(yōu)化改進(jìn)，主要是通過設(shè)計(jì)巢式PCR引物的方式，根據(jù)擴(kuò)增后是否存在目的片段的情況對(duì)具體的污染狀況加以比較合理且正確的判斷，然后還要根據(jù)存在片段的大小情況，對(duì)于污染的支原體類型進(jìn)行正確的判斷分析，從而將污染源進(jìn)行準(zhǔn)確的判斷。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)：最初是在1996年的美國某家公司第一次推出了實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)?，F(xiàn)在，在動(dòng)物營養(yǎng)與繁殖、動(dòng)物遺傳育種及動(dòng)物疾病檢測(cè)和預(yù)防等領(lǐng)域已經(jīng)都有了實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的應(yīng)用，但是在實(shí)際的應(yīng)用中沒有達(dá)到特別廣泛的范圍，從而受到了一定的限制，應(yīng)用時(shí)應(yīng)該給予一定的重視。

DNA分子雜交檢查法：原核生物的rRNA是高度保守的。采用這種檢測(cè)方法具有特異性高的特點(diǎn)，可大致的鑒別出污染支原體的種類。

3 相關(guān)的防治

在生物制品的生產(chǎn)過程中，感染支原體的組織細(xì)胞中會(huì)在不同程度上改變細(xì)胞形態(tài)和遺傳物質(zhì)，從而對(duì)病毒的復(fù)制過程產(chǎn)生一定的影響，同時(shí)會(huì)在不同程度上改變宿主細(xì)胞的免疫能力，從而誘導(dǎo)干擾素的產(chǎn)生。所以在獸用疫苗生產(chǎn)過程中，尤其是將培養(yǎng)細(xì)胞作為材料的疫苗生產(chǎn)情況，應(yīng)該對(duì)于支原體的防治加以重視，決不能忽視。對(duì)于支原體的污染進(jìn)行糾正的時(shí)候應(yīng)該保持細(xì)胞營養(yǎng)液呈酸性，這樣對(duì)于抑制支原體的生長是比較有效的條件。目前，我國獸用疫苗的技術(shù)人員在參與生產(chǎn)生物制品的過程當(dāng)中，檢測(cè)支原體的存在，以及鑒定支原體的種類是實(shí)施的主要目的，也就是生產(chǎn)中檢測(cè)細(xì)胞的污染源，力爭將污染源切斷，從而可以對(duì)此采取比較有效的防治手段進(jìn)行干涉。