黎偉強(qiáng)

摘 要 膠體金免疫層析技術(shù)是在膠體金標(biāo)記技術(shù)、免疫檢測(cè)技術(shù)和層析分析技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新型免疫學(xué)診斷技術(shù)。因其具有簡(jiǎn)便、快速、無(wú)污染、不需特殊儀器、特異性強(qiáng)、敏感性高、結(jié)果判斷直觀等優(yōu)點(diǎn)，成為當(dāng)前廣泛采用的動(dòng)物疫病免疫學(xué)診斷技術(shù)?；诖?，本文主要對(duì)我國(guó)膠體金試紙條研究現(xiàn)狀及在畜禽屠宰檢疫中應(yīng)用展望進(jìn)行分析探討。

關(guān)鍵詞 膠體金試紙條；研究現(xiàn)狀；畜禽屠宰檢疫；應(yīng)用展望

1 前言

膠體金免疫層析試紙條（ImmunochromatographicStrip，ICS/ ColloidGoldStrip，CGS），通常簡(jiǎn)稱為膠體金試紙條，是通過(guò)膠體金免疫層析技術(shù)制備的，可以準(zhǔn)確、快速、低成本檢測(cè)抗原或抗體的試紙。在禽病檢測(cè)方面，膠體金試紙條作為一種檢測(cè)工具，應(yīng)用于疾病的診斷、流行病學(xué)調(diào)查、免疫方案制定、檢驗(yàn)檢疫等方面。與其他免疫學(xué)和分子生物學(xué)檢測(cè)方法相比，膠體金試紙條具有無(wú)需專業(yè)儀器，檢測(cè)耗時(shí)短，通過(guò)肉眼觀察即可判定結(jié)果，較好的特異性和敏感性，易于運(yùn)輸和保存，適用于基層和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。

2 膠體金試紙條研究現(xiàn)狀與應(yīng)用

2.1 禽流感

禽流感由禽流感病毒（Avianinfluenzavirus，AIV）感染所致，對(duì)禽養(yǎng)殖業(yè)及人類健康構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。根據(jù)AIV囊膜上血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）不同，可分為16個(gè)HA亞型和10個(gè)NA亞型。

2.2 新城疫

新城疫是由新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV）引起的，長(zhǎng)期以來(lái)對(duì)禽養(yǎng)殖業(yè)造成重大危害。在NDV抗體檢測(cè)方面，研究者用膠體金標(biāo)記新城疫病毒，制作了檢測(cè)NDV抗體的免疫膠體金試紙條，使用IDEXX公司標(biāo)準(zhǔn)NDV陰性和陽(yáng)性血清測(cè)定，該試紙條檢測(cè)血凝抑制抗體最低滴度為41og2；使用該試紙條和血凝抑制方法同時(shí)檢測(cè)60份樣品，試紙條檢測(cè)結(jié)果與血凝抑制試驗(yàn)法檢測(cè)結(jié)果符合率為93.8%。

2.3 傳染性法氏囊病

傳染性法氏囊病是由傳染性法氏囊病毒（Infectiousbursaldiseasevirus，IBDV）引起的，主要感染幼雞的急性高度接觸性傳染病。在IBDV抗體檢測(cè)方面，2011年IsaNurulfiza等[1]以雞抗IBDV血清和滅活I(lǐng)BDV作為待標(biāo)記物和檢測(cè)線，研制出檢測(cè)IBDV抗體的膠體金試紙條，使用該試紙條和BioCheck公司ELISA試劑盒檢測(cè)已知陽(yáng)性樣品時(shí)，該試紙條檢測(cè)準(zhǔn)確度與商品化ELISA試劑盒相同，靈敏度高于商品化ELISA試劑盒，最短僅2分鐘即出結(jié)果。

2.4 雞傳染性支氣管炎

雞傳染性支氣管炎是由雞傳染性支氣管炎病毒（Infectiousbronchitisvirus，IBV）引起的雞的一種呼吸道傳染性疾病，在我國(guó)雞群中廣泛存在。研究者用鼠抗雞IgG單克隆抗體和大腸桿菌表達(dá)IBV核衣殼蛋白分別制備了膠體金標(biāo)記物和檢測(cè)線，研發(fā)出檢測(cè)IBV抗體的膠體金試紙條。同時(shí)使用該試紙條、血凝抑制實(shí)驗(yàn)和IDEXX公司商品化ELISA試劑盒檢測(cè)120份血清樣品。結(jié)果顯示，與血凝抑制實(shí)驗(yàn)相比該試紙條檢測(cè)敏感性為92.11%，陽(yáng)性符合率為85%；與商品化ELISA試劑盒相比該試紙條檢測(cè)敏感性為92.31%，陽(yáng)性符合率為95%。

3 展望

3.1 提升檢測(cè)靈敏度

與分子檢測(cè)技術(shù)相比，部分膠體金免疫層析試紙條存在著檢測(cè)靈敏度低、假陰性結(jié)果等缺陷。膠體金銀擴(kuò)增免疫層析技術(shù)是基于攝影技術(shù)的免疫層析方法，結(jié)合有抗體的膠體金顆粒會(huì)使銀離子濃縮還原形成銀原子，并在膠體金金微粒周圍形成直徑為5～10μm的銀簇，使標(biāo)記物的體積增加到膠體金微粒直徑的100倍，從而使檢測(cè)能力大大提高。研究者運(yùn)用膠體金銀擴(kuò)增免疫層析技術(shù)制備了檢測(cè)H5N1亞型禽流感病毒的試紙條，與普通的膠體金試紙條相比，其檢測(cè)靈敏度提高了500倍。

3.2 區(qū)分野生型毒（菌）株與疫苗毒（菌）株

疫苗作為動(dòng)物疫病防控的重要手段得到了廣泛的應(yīng)用，但疫苗的使用往往會(huì)干擾動(dòng)物疫病診斷和監(jiān)測(cè)。研制膠體金免疫層析試紙條時(shí)，可選用能區(qū)分野生型毒（菌）株與疫苗毒（菌）株的單克隆抗體或蛋白，從而獲得能區(qū)分野毒（菌）株與疫苗毒（菌）株的膠體金試紙條。研究者選用一株能特異性識(shí)別偽狂犬病野生型毒株的單克隆抗體，制備了檢測(cè)野生型偽狂犬病病毒抗體的試紙條，使用該試紙條和IDEXX公司ELISA試劑盒平行檢測(cè)樣品，統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)該試紙條與商品化ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果相符。

3.3 同一試紙條進(jìn)行多疾病檢測(cè)

疾病種類繁雜，并且許多疾病臨床癥狀相似，出現(xiàn)混合感染。將易發(fā)生混合感染或常見(jiàn)的多種抗體或病原膠體金檢測(cè)方法整合到同一膠體金試紙條中，可有效擴(kuò)大試紙條檢測(cè)范圍，提高檢測(cè)效率。

3.4 實(shí)現(xiàn)抗原或抗體定量檢測(cè)

目前，大部分膠體金僅能做定性判斷。而定量膠體金檢測(cè)多根據(jù)膠體金試紙條檢測(cè)已知不同濃度標(biāo)準(zhǔn)物時(shí)檢測(cè)線存在的色差，來(lái)繪制標(biāo)準(zhǔn)物濃度與檢測(cè)線顏色關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線。當(dāng)檢測(cè)樣品時(shí)，反應(yīng)完成后將試紙條檢測(cè)線顏色與標(biāo)準(zhǔn)曲線做比較，以確定待檢樣品中目的檢測(cè)物含量。

4 結(jié)語(yǔ)

隨著新的標(biāo)記物和制備方法的發(fā)展、標(biāo)記技術(shù)的日趨成熟、單克隆抗體技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)的廣泛應(yīng)用，膠體金免疫層析技術(shù)將會(huì)有更為廣闊的應(yīng)用前景，實(shí)現(xiàn)更加理想的價(jià)值，從而促進(jìn)我國(guó)畜牧獸醫(yī)事業(yè)的健康、快速和持續(xù)發(fā)展。

參考文獻(xiàn)：

[1]徐一鳴。金寧一，楊振國(guó)，等.膠體金方法檢測(cè)H3和H7亞型禽流感病毒[刀.中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2009，29（5）；580—583.

[2]彭伏虎，王政，張進(jìn)良.等.膠體金試紙條檢測(cè)H9亞型禽流感病毒的研究[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2008。39（8）：1081—1086.