抗M抗體對(duì)新生兒溶血病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的影響：附1例病例分析

王麗娜 張勤 閆燁 呂毅

作者單位：450047 河南鄭州，河南大學(xué)附屬鄭州頤和醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心

MNS血型系統(tǒng)是一個(gè)復(fù)雜的血型系統(tǒng)，目前已確定的抗原有46個(gè)。人體血清中抗M抗體較為常見(jiàn)，屬于天然不規(guī)則抗體，此類(lèi)抗體的最適反應(yīng)溫度為4 ℃，有時(shí)也可在37 ℃的溫度下凝集紅細(xì)胞。抗M抗體?？梢餉BO血型正反定型不符或交叉配血困難。我院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心發(fā)現(xiàn)1例抗M抗體影響新生兒溶血?。╤emolytic disease of newborn，HDN）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)（游離抗體試驗(yàn)）結(jié)果的病例，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 病例介紹

患兒女性，系第1胎第1產(chǎn)，于河南大學(xué)附屬鄭州頤和醫(yī)院經(jīng)自然分娩娩出。出生時(shí)嬰兒哭聲弱，羊水清，無(wú)臍帶繞頸，無(wú)出生窒息史，胎盤(pán)正常；Apgar評(píng)分1 min評(píng)9分，5 min評(píng)10分；出生體質(zhì)量2 600 g，母女平安出院。15 d后嬰兒因全身皮膚黃染不消退而收入我院兒科。入院時(shí)嬰兒紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（red blood cell count，RBC）3.57×1012/L，經(jīng)皮測(cè)膽紅素值 280.4 μmol/L，總膽紅素（total bilirubin，TBil）109.8 μmol/L，間接膽紅素（indirect bilirubin，IBil）97.1 μmol/L，直接膽紅素（direct bilirubin，DBil）12.7 μmol/L?；純耗赣H血型為 O 型 Rh（D）陽(yáng)性；患兒父親血型為AB型Rh（D）陽(yáng)性。患兒血型為B型Rh（D）陽(yáng)性，不規(guī)則抗體陽(yáng)性，無(wú)輸血史。

表1 1例HDN患兒不規(guī)則抗體鑒定試驗(yàn)結(jié)果

2 血型血清學(xué)檢查

2.1 試劑及檢測(cè)方法 單克隆抗A血清、抗B血清、抗D 〔免疫球蛋白M（IgM）〕血清、抗球蛋白試劑、抗M細(xì)胞、抗N細(xì)胞、ABO細(xì)胞、酶處理ABO細(xì)胞均由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供；抗人球蛋白卡由瑞士DiaMed公司提供；進(jìn)口譜細(xì)胞由荷蘭Sanquin試劑公司提供。血型鑒定、抗球蛋白試驗(yàn)、游離試驗(yàn)和放散試驗(yàn)均按文獻(xiàn)［1-2］方法操作。

2.2 紅細(xì)胞血型鑒定 患兒為B型Rh（D）陽(yáng)性，NN型。

2.3 新生兒溶血3項(xiàng)試驗(yàn)

2.3.1 直接抗人球蛋白試驗(yàn) 直接抗人球蛋白試驗(yàn)結(jié)果呈陰性。

2.3.2 游離試驗(yàn)反應(yīng)結(jié)果 游離試驗(yàn)結(jié)果呈陽(yáng)性，并提示有ABO血型系統(tǒng)以外的抗體。A細(xì)胞為2+S，B細(xì)胞為2+S，O細(xì)胞為±。

2.3.3 放散試驗(yàn)反應(yīng)結(jié)果 放散試驗(yàn)結(jié)果呈陽(yáng)性。A細(xì)胞為陰性，B細(xì)胞為2+，O細(xì)胞為陰性。

2.4 不規(guī)則抗體鑒定 患兒血清與譜細(xì)胞反應(yīng)符合抗M抗體情況，見(jiàn)表1。

2.5 抗M抗體效價(jià)測(cè)定 標(biāo)本鹽水介質(zhì)IgM抗體效價(jià)2，IgG抗體效價(jià)小于1。

2.6 制備反定細(xì)胞重新進(jìn)行游離試驗(yàn) 從獻(xiàn)血者標(biāo)本中篩選MN分型為NN型的多人份A1細(xì)胞和B細(xì)胞，制備成2%～5%的反定紅細(xì)胞重新進(jìn)行游離試驗(yàn)。結(jié)果A1細(xì)胞為2+，B細(xì)胞為2+。

3 討論

HDN是由于母嬰血型不合導(dǎo)致的胎兒或新生兒免疫性溶血性疾病。臨床主要分為ABO血型不合和Rh血型不合，造成ABO血型不合HDN的抗體主要是免疫球蛋白G（IgG）抗A抗體、IgG抗B抗體和IgG抗AB抗體。由于A/B物質(zhì)廣泛存在于自然界中，多數(shù)母親在妊娠前體內(nèi)就已經(jīng)存在IgG性質(zhì)的抗A、抗B抗體，因此ABO血型系統(tǒng)的HDN可以發(fā)生在第一胎。

MNS血型系統(tǒng)是繼ABO血型之后第2個(gè)被發(fā)現(xiàn)的血型系統(tǒng)，其復(fù)雜性僅次于Rh系統(tǒng)［3］。MNS血型系統(tǒng)的大多數(shù)抗原在出生時(shí)就已發(fā)育完全，目前已經(jīng)確定的抗原有46個(gè)?？筂抗體是一種與人類(lèi)MNS血型系統(tǒng)相關(guān)的不規(guī)則抗體，4 ℃為其最適反應(yīng)溫度［4］，低溫麻醉狀態(tài)下手術(shù)患者需注意此類(lèi)抗體可激活補(bǔ)體，在冷抗體最適反應(yīng)溫度范圍內(nèi)（4～20 ℃），可發(fā)生溶血反應(yīng)［5］。有研究顯示，抗 M抗體常常會(huì)引起血型鑒定困難［6-7］。很多抗M抗體都有劑量效應(yīng)，與純合子M+N-細(xì)胞的反應(yīng)比雜合子M+N+細(xì)胞強(qiáng)，因此用雜合子M+N+細(xì)胞往往不能檢測(cè)出弱的抗M抗體［8］。在鹽水介質(zhì)的凝集試驗(yàn)中，凝集M+紅細(xì)胞的抗M抗體不一定是IgM型，IgG的抗M抗體也可造成凝血反應(yīng)［9］，這可能與抗原的數(shù)量、空間結(jié)構(gòu)等因素有關(guān)，通常通過(guò)比較不同溫度下的強(qiáng)弱變化可間接區(qū)分抗體類(lèi)型。MNS血型系統(tǒng)同種異體抗體一般很少引起輸血反應(yīng)或HDN，國(guó)內(nèi)時(shí)有抗M抗體、抗N抗體引起交叉配血困難和母嬰血型不合引起HDN的報(bào)道［10］。

本案例游離試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體，用微柱凝膠抗人球蛋白法抗體鑒定，結(jié)果進(jìn)一步證明患兒血清中含有不規(guī)則抗M抗體，抗體性質(zhì)為IgM型或含有IgM型，因此游離試驗(yàn)檢測(cè)出抗A、抗B抗體的可靠性值得分析?；純簽镹N型時(shí)，將NN型獻(xiàn)血人員細(xì)胞制備成反定細(xì)胞A1細(xì)胞、B細(xì)胞重新檢測(cè)游離試驗(yàn)，凝集強(qiáng)度結(jié)果比第1次游離試驗(yàn)減弱，從而確定游離試驗(yàn)受抗M抗體干擾。另外，通過(guò)不同介質(zhì)對(duì)抗M抗體的效價(jià)進(jìn)行區(qū)分，患兒MN分型為NN型，表明該患兒抗M抗體未引起HDN，而是ABO系統(tǒng)引起了HDN。

綜上所述，在臨床工作中發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體時(shí)，應(yīng)增加抗體篩查或抗體鑒定試驗(yàn)，若懷疑不規(guī)則抗體干擾了游離抗體試驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)該對(duì)反定細(xì)胞進(jìn)行相應(yīng)抗原鑒定或篩選相應(yīng)抗原缺乏的反定細(xì)胞重新進(jìn)行游離抗體試驗(yàn)，以獲得更為可靠的結(jié)果。本案例中，因患兒體內(nèi)存在抗A抗體、抗B抗體和抗M抗體，如需輸血應(yīng)選擇O型、M抗原陰性洗滌紅細(xì)胞，以提高輸血的安全性。