林園園 熊義濤

[摘要]目的 探究陳皮、杜仲以及山楂3種中草藥混合湯劑對高脂高糖誘導(dǎo)的肥胖大鼠的減肥降脂作用。方法 選取高脂飼料飼養(yǎng)的50只Wistar雄性大鼠作為研究對象，制備肥胖大鼠模型。將造模后的大鼠隨機(jī)分為模型組、陽性對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組，每組各10只。另外選取給予基礎(chǔ)飼料飼養(yǎng)的10只大鼠作為對照組。低劑量組、中劑量組、高劑量組每天分別灌胃1 ml/100 g、2 ml/100 g、4 ml/100 g的中草藥混合湯劑，陽性對照組大鼠灌胃奧利司他懸浮液60 mg/（kg·d）。均連續(xù)灌胃8周。模型組和對照組以相同方法灌胃生理鹽水。用酶聯(lián)免疫法檢測各組血清中三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固（LDL-C）的含量及肝臟中脂肪酸合成酶（FAS）、提高?；o酶A氧化酶（ACO）的含量，比較各組大鼠的各類腸道菌群數(shù)量。結(jié)果 模型組大鼠的體重、Lee′s指數(shù)、TG、TC、LDL-C、FAS含量均顯著高于對照組，HDL-C、ACO低于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。高劑量組大鼠的體重和Lee′s指數(shù)、TG、TC、LDL-C、FAS含量顯著低于模型組，HDL-C、ACO水平顯著高于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。高劑量組大鼠腸道內(nèi)的雙歧桿菌、乳酸菌、腸球菌數(shù)量多于模型組，大腸埃希菌數(shù)量少于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。高劑量組大鼠的Lee′s指數(shù)、TG、TC、LDL-C、FAS、ACO含量與陽性對照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 陳皮、杜仲和山楂3種草藥混合湯劑可以抑制FAS活性、促進(jìn)ACO活性、提高益生菌數(shù)量，對高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠具有顯著的減肥降脂作用。

[關(guān)鍵詞]肥胖；杜仲；山楂；三酰甘油；?；o酶A氧化酶

[中圖分類號(hào)] R258.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2018）6（b）-0020-05

Effects of Hawthorn，Eucommia and Tangerine Peel mixture decoction on reducing fat in obese rats induced by high fat diet

LIN Yuan-yuan XIONG Yi-tao

Department of Pharmaceutical Affairs，Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Hubei Province，Wuhan 430074，China

[Abstract]Objective To investigate the effect of Tangerine Peel，Eucommia and Hawthorn mixture decoction on reducing fat in obese rats induced by high fat diet.Methods A total of 50 Wistar male rats who fed with high fat diet to establish the rat model of obesity were selected as subjects，which were divided into model group，positive group，low-dose group，middle-dose group and high-dose group randomly，10 rats in each groups.In addition，10 normal feeding rats were selected as the control group.The low-dose group，the middle-dose group and the high-dose group were treated with 1 ml/100 g，2 ml/100 g，4 ml/100 g herbal mixture decoction respectively each day.The rats in the positive group were intragastric Orlistat Suspension 60 mg/kg by gavage.All were treated continuously for 8 weeks.The model group and the control group were given normal saline by gavage with the same method.The content of serum triglyceride （TG），total cholesterol （TC），high density lipoprotein cholesterol （HDL-C），low density lipoprotein cholesterol （LDL-C） in serum and the contend of fatty acid synthase （FAS），acyl coenzyme A oxidase （ACO） in liver were detected by enzyme-linked immunosorbent assay.The number of intestinal flora of rats in each group were compared.Results The weight，Lee′s index，TG，TC，LDL-C and FAS contents of the rats in the model group were significantly higher than those in the control group，and HDL-C and ACO of the rats in the model group were lower than those in the control group，the differences were statistically significant （P<0.05）.The weight and Lee′s index，TG，TC，LDL-C and FAS contents of the rats in the high-dose group were significantly lower than those in the model group，and the levels of HDL-C and ACO of the rats in the high-dose group were significantly higher than those in the model group，the differences were statistically significant （P<0.05）.The number of bifidobacterium，lactobacillus and enterococcus in the intestinal tract of rats in high-dose group were higher than those in the model group，and the number of escherichia coli was less than that of the model group，the differences were statistically significant （P<0.05）.There were no statistically significant differences in Lee′s index，TG，TC，LDL-C，F(xiàn)AS and ACO of rats in high-dose group compared with the positive group （P>0.05）.Conclusion The three herbs mixed decoction of Tangerine Peel，Eucommia and Hawthorn can inhibit the activity of FAS，promote the activity of ACO and increase the number of probiotics.It had a significant effect on reducing weight and blood lipids in obese rats induced by high fat diet.

[Key words]Obesity；Eucommia；Hawthorn；Triglyceride；Acyl coenzyme A oxidase

肥胖癥是一種常見的代謝癥群，它與糖尿病、高血壓、血脂異常、癌癥等慢性病密切相關(guān)[1]。20世紀(jì)80年代以來，隨著人們生活水平的逐漸提高以及生活方式的改變，肥胖癥的發(fā)病率也逐漸上升[2]，肥胖癥可能會(huì)對健康和壽命產(chǎn)生明顯影響[3]。因此如何有效地預(yù)防及治療肥胖癥已成為現(xiàn)今較為熱門的研究問題。奧利司他（Orlistat）為目前少數(shù)被批準(zhǔn)用于治療肥胖癥的藥物，據(jù)研究，其對肥胖癥有顯著療效[4-5]，但是有較多報(bào)道提及奧利司他的副作用，提示奧利司他可能影響胃腸道健康和肝臟功能，而且當(dāng)停藥時(shí)，則產(chǎn)生體重反彈。目前對奧利司他的安全性存在爭議[5-9]。因此，對于治療肥胖癥并且副作用小的藥物的探索十分迫切[10]。山楂、杜仲和陳皮是日常生活中常見的中草藥，杜仲和山楂有影響膽固醇的代謝，抑制脂肪肝形成的功效[11-12]，陳皮對動(dòng)物腸道菌群的分布有一定的調(diào)節(jié)作用，能干擾脂肪和膽固醇的吸收，抑制胰脂酶活動(dòng)，促使甘油三酯從糞便中排出[13]。但是其對肥胖癥的預(yù)防及治療報(bào)道較少，本研究通過建立高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠模型，以3種中藥物混合治療肥胖大鼠，取得了較顯著的療效，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1試劑與動(dòng)物

三酰甘油（TG）試劑盒（南京建成生物工程研究所，貨號(hào)：A110-1）；總膽固醇（TC）試劑盒（南京建成生物工程研究所，貨號(hào)：A111-1）；低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）試劑盒（江萊生物科技有限公司，貨號(hào)：JL12049）；高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）試劑盒（南京建成生物工程研究所，貨號(hào)：A112-1）；脂肪酸合成酶（FAS）試劑盒（南京建成生物工程研究所，貨號(hào)：H231）；高?；o酶A氧化酶（ACO）試劑盒（南京建成生物工程研究所，貨號(hào)：M020）；MRS瓊脂培養(yǎng)基（青島海博生物科技有限公司）；BBL瓊脂培養(yǎng)基（青島海博生物科技有限公司）；伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（青島海博生物科技有限公司）；腸球菌培養(yǎng)基（青島海博生物科技有限公司）；奧利司他（國藥準(zhǔn)字H20030586，上海羅氏有限公司）。

Wistar雄性大鼠，SPF級，體重（151.12±25.64）g，購于常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCXK（蘇）2011-0003。

1.2分組與給藥

60只Wistar雄性大鼠經(jīng)過5 d的適應(yīng)性飼養(yǎng)后，隨機(jī)抽取50只大鼠進(jìn)行高脂肥胖造模，給予高脂飼料（主要成分包含：自制豬油11.0%，蛋黃8.0%，膽固醇1.5%及基礎(chǔ)飼料80.5%），連續(xù)4周。將造模成功的大鼠隨機(jī)分為5組，分別為：高脂組、低劑量組、中劑量組、高劑量組和陽性對照組，每組各10只。

另外選取給予基礎(chǔ)飼料飼養(yǎng)的10只大鼠作為對照組。中藥低、中、高劑量組在給予高脂飼料的同時(shí)，按照大鼠體重比，每天分別灌胃1.0 ml/100 g、2.0 ml/100 g、4.0 ml/100 g的中草藥混合湯劑，陽性對照組大鼠灌胃奧利司他懸浮液60 mg/（kg·d）?；旌蠝珓┑闹饕煞譃椋憾胖?0 g、山楂20 g、陳皮15 g、苦蕎5 g、澤瀉5 g，加入清水煎煮并濃縮至1000 ml。

在后續(xù)的治療過程中，模型組、陽性對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組均仍給予高脂飼料，空白組給予基礎(chǔ)飼料，模型組和對照組以相同方法灌胃2.0 ml生理鹽水。所有大鼠連續(xù)治療8周。

1.3觀察指標(biāo)及檢測方法

1.3.1 Lee′s指數(shù)的測定

分別于治療前后測量大鼠的體重以及鼻尖至肛門的長度，計(jì)算Lee′s指數(shù)。Lee′s指數(shù)反映大鼠的肥胖程度，Lee′s指數(shù)=/體長。

1.3.2血液指標(biāo)及肝臟指標(biāo)的測定

給藥結(jié)束后，所有大鼠禁食不禁水過夜，10%水合氯醛腹腔注射（100 μl/10 g）麻醉，采集大鼠血液，室溫放置30 min后，3000 r/min離心10 min，收集血清于-80℃保存；取肝臟組織樣本保存在生理鹽水中，于-80℃保存；用Elisa試劑盒檢測血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C含量及肝臟中FAS、ACO的含量。

1.3.3腸道菌群的培養(yǎng)和計(jì)數(shù)

取1 g新鮮糞便于無菌離心管中，按照1：9（質(zhì)量：體積）加入無菌PBS緩沖液稀釋，渦旋混勻儀混勻，獲得10-1稀釋液。再將10-1稀釋液進(jìn)行梯度稀釋，直至獲得10-4、10-5及10-6稀釋液。分別取100 μl的10-4、10-5及10-6三種梯度稀釋液涂布于伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（大腸埃希菌）、MRS 瓊脂培養(yǎng)基（乳酸菌）、腸球菌瓊脂培養(yǎng)基（腸球菌）、BBL瓊脂培養(yǎng)基（雙歧桿菌）上，每個(gè)稀釋度做3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，整個(gè)過程30 min中內(nèi)完成。37℃孵育48 h，之后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，結(jié)果表示為CFU/ml（菌落計(jì)數(shù)前，首先挑取特征菌落，進(jìn)行生態(tài)生化試驗(yàn)，鑒定該菌屬）。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組大鼠治療前后體重及Lee′s指數(shù)的比較

治療前后，模型組大鼠的體重和Lee′s指數(shù)均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。治療后，高劑量組大鼠的體重和Lee′s指數(shù)顯著低于模型組，中劑量組大鼠的體重低于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），低劑量組大鼠的體重、Lee′s指數(shù)及中劑量組的Lee′s指數(shù)與模型組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。低劑量組大鼠的體重高于陽性對照組（P<0.05），但中、高劑量組大鼠的體重和Lee′s指數(shù)與陽性對照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

2.2各組大鼠血清血脂各指標(biāo)水平的比較

治療結(jié)束后，模型組大鼠的TG、TC、LDL-C均顯著高于對照組，HDL-C低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。治療后，高劑量組大鼠的TG、TC、LDL-C水平顯著低于模型組，HDL-C水平顯著高于模型組，中劑量組的TG顯著低于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），低劑量組大鼠的TG、TC、LDL-C、HDL-C水平及中劑量組大鼠的TC、LDL-C、HDL-C與模型組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。低劑量組大鼠的TG高于陽性對照組，HDL-C水平顯著低于陽性對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但中、高劑量組大鼠的TG、TC、LDL-C、HDL-C與陽性對照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表2）。

2.3各組大鼠肝臟FAS及ACO含量的比較

模型組大鼠的FAS含量顯著高于對照組，ACO含量顯著低于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。高劑量組大鼠的FAS含量顯著低于模型組，ACO含量均顯著高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。中劑量組大鼠的ACO含量顯著高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。低劑量組大鼠的ACO及低、中劑量組大鼠的FAS含量與模型組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表3）。

2.4各組大鼠各類腸道菌群數(shù)量的比較

模型組大鼠腸道內(nèi)的雙歧桿菌、乳酸菌、腸球菌數(shù)量少于對照組，大腸埃希菌數(shù)量多于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。高劑量組大鼠腸道內(nèi)的雙歧桿菌、乳酸菌、腸球菌數(shù)量多于模型組，大腸埃希菌數(shù)量少于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。中劑量組大鼠腸道內(nèi)的雙歧桿菌、腸球菌數(shù)量多于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。中劑量組大鼠腸道內(nèi)的乳酸菌、大腸埃希菌數(shù)量及低劑量組大鼠腸道內(nèi)的雙歧桿菌、乳酸菌、腸球菌、大腸埃希菌數(shù)量與模型組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表4）。

3討論

目前最常用來研究的肥胖模型是營養(yǎng)性肥胖大鼠，因?yàn)榕c人類飲食引起的肥胖癥有很多相似的特征，所以目前被廣泛應(yīng)用于肥胖癥治療的試驗(yàn)研究中[14]，一般將模型組與空白組體重比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義視為造模成功[15]。本研究采用雄性Wistar大鼠，飼以高脂營養(yǎng)性飼料8周后，模型組大鼠的體重顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），成功得到營養(yǎng)性肥胖大鼠模型。實(shí)驗(yàn)開始前和結(jié)束時(shí)分別測定大鼠的TG、TC、LDL-C水平，本研究結(jié)果提示，治療后，模型組大鼠的Lee′s指數(shù)、TG、TC、LDL-C含量均顯著高于對照組，HDL-C低于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示出現(xiàn)血脂代謝紊亂。Mansuri等[15]研究了油麻藤種子提取物對營養(yǎng)性肥胖的大鼠的作用，結(jié)果表明油麻藤種子提取物能顯著降低大鼠的血脂水平。在本實(shí)驗(yàn)中，高劑量組大鼠的Lee′s指數(shù)、TG、TC、LDL-C、FAS、ACO含量與陽性對照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說明杜仲、山楂和陳皮在一定程度上抑制了血脂代謝紊亂。

動(dòng)物脂肪代謝與脂肪酸的合成、分解等過程息息相關(guān)，其中FAS是肝臟脂肪酸合成的關(guān)鍵因子[16-18]。ACO是在過氧化物酶體中對中、長鏈脂肪酸進(jìn)行氧化的限速酶[19]。Barb等[20]研究發(fā)現(xiàn)，通過12周的高脂喂養(yǎng)大鼠后，大鼠肝臟內(nèi)的成分含量顯著升高。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，治療后，模型組大鼠的FAS含量顯著高于對照組，ACO低于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明在3種混合中藥的調(diào)控下，F(xiàn)AS顯著降低，ACO含量顯著升高，減緩了脂肪的累積。

腸道菌群的種類和數(shù)量水平微妙地影響著肥胖和心腦血管健康[21]，Turnbaugh等[22]將肥胖小鼠的菌群轉(zhuǎn)移給無菌小鼠后，無菌小鼠脂肪量顯著增加，并認(rèn)為腸道內(nèi)的菌群的差異可能是導(dǎo)致肥胖的因素之一。攝入適當(dāng)益生菌能促進(jìn)宿主的健康，令腸道內(nèi)形成有益優(yōu)勢菌群，如乳酸菌能控制血清膽固醇水平，調(diào)節(jié)脂質(zhì)的平衡[23]。本研究結(jié)果提示，模型組大鼠腸道內(nèi)的雙歧桿菌、乳酸菌、腸球菌數(shù)量少于對照組，大腸埃希菌數(shù)量多于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。高劑量組大鼠腸道內(nèi)的雙歧桿菌、乳酸菌、腸球菌數(shù)量多于模型組，大腸埃希菌數(shù)量少于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。說明杜仲、山楂、陳皮混合藥劑具有調(diào)節(jié)腸道菌群的功能，從而一定程度抑制血脂的紊亂。

綜上所述，杜仲、山楂、陳皮混合使用與治療營養(yǎng)性肥胖的大鼠有較顯著療效，降低大鼠血清中的血脂水平，調(diào)節(jié)肝臟中酶活性，并調(diào)節(jié)腸道中的菌群分布，有效降低機(jī)體的脂肪含量，達(dá)到降脂減肥的作用。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Kopelman PG.Obesity as a medical problem[J].Nature，2000，404（6778）：635-643.

[2]Lobstein T，Jackson-Leach R，Moodie ML，et al.Child and adolescent obesity：part of a bigger picture[J].Lancet，2015， 385（9986）：2510-2520.

[3]Organization WH.WHO Obesity and overweight[M].Springer New York，2015.

[4]劉井如，季宇彬，陳明蒼.奧利司他對營養(yǎng)性肥胖大鼠的減肥作用[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（7）：186-188.

[5]Halpern B，Halpern A.Safety assessment of FDA-approved （orlistat and lorcaserin） anti-obesity medications[J].Expert Opin Drug Saf，2015，14（2）：305-315.

[6]訾梅，李祥霞.奧利司他的不良反應(yīng)及安全應(yīng)用[J].藥物不良反應(yīng)雜志，2007，9（3）：182-185.

[7]陳曦，梁冰，王一歌，等.奧利司他對肥胖伴非酒精性脂肪性肝病的作用及危險(xiǎn)因素的影響[J].臨床肝膽病雜志，2006， 22（2）：123-124.

[8]馬凌悅，周穎，崔一民.奧利司他的不良反應(yīng)與藥物間相互作用研究[J].中國藥房，2012，23（22）：2090-2092.

[9]Cahill A，Lean ME.Review article：malnutrition and maltreatment——a comment on Orlistat for the treatment of obesity[J].Aliment Pharmacol Ther，2015，13（8）：997-1002.

[10]Yanovski SZ，Yanovski JA.Long-term drug treatment for obesity：a systematic and clinical review[J].JAMA，2014，311（1）：74-86.

[11]Hao S，Xiao Y，Lin Y，et al.Chlorogenic acid-enriched extract from Eucommia ulmoides leaves inhibits hepatic lipid accumulation through regulation of cholesterol metabolism in HepG2 cells[J].Pharm Biol，2015，54（2）：1-9.

[12]Kausar S，Zaheer Z，Saqib M，et al.Role of crataegus （hawthorn） extract on obesity in hyperlipidemic albino rats[J].Pak J Med Sci，2012，6（1）：100-103.

[13]陳琛，江振友，宋克玉，等.中草藥對小鼠腸道菌群影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2011，23（1）：15-17.

[14]Samout N，Ettaya A，Bouzenna H，et al.Beneficial effects of Plantago albicans on high-fat diet-induced obesity in rats[J].Biomed Pharmacother，2016，84（2）：1768-1775.

[15]Mansuri J，Paranjape A.Evaluation of anti-obesity effect of aqueous extract of mucuna pruriens seeds on rats[J].Int J Pharm Pharm Sci，2017，9（3）：111-115.

[16]陳光亮，李莉，嚴(yán)尚學(xué)，等.鹽酸西布曲明對營養(yǎng)性肥胖大鼠的減肥作用[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2003，8（1）：55-58.

[17]Peng I C，Chen Z，Sun W，et al.Glucagon regulates ACC activity in adipocytes through the CAMKKβ/AMPK pathway[J].Am J Physiol Endocrinol Metab，2012，302（12）：1560-1568.

[18]Qiu W，Kohen-Avramoglu R，Mhapsekar S，et al.Glucosamine-induced endoplasmic reticulum stress promotes ApoB100 degradation：evidence for Grp78-mediated targeting to proteasomal degradation[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol，2005， 25（3）：571-577.

[19]Karbowska J，Kochan Z.Effect of DHEA on endocrine functions of adipose tissue，the involvement of PPAR gamma[J].Biomed Pharmacother，2005，70（2）：249-257.

[20]Barb D，Portillo-Sanchez P，Cusi K.Pharmacological management of nonalcoholic fatty liver disease[J].Metabolism，2016，65（8）：1183-1195.

[21]Henaomejia J，Elinav E，Jin C，et al.Inflammasome-mediated dysbiosis regulates progression of NAFLD and obesity[J].Nature，2012，482（7384）：179-185.

[22]Turnbaugh PJ，Ley RE，Mahowald MA，et al.An obesity-associated gut microbiome with increased capacity for energy harvest[J].Nature，2006，444（7122）：1027-1031.

[23]黃小瓊，劉盛來，鄭佳林，等.合生元益生菌沖劑對小鼠腸道菌群調(diào)節(jié)作用的研究[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2011，21（10）：127-130.

（收稿日期：2018-03-12 本文編輯：孟慶卿）