高速逆流色譜分離純化技術(shù)研究進(jìn)展

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(重慶市畜牧科學(xué)院,重慶 402460)

0 引言

高速逆流色譜法 (High-speed Counter Current Chromatography，簡(jiǎn)稱HSCCC)是一種可連續(xù)有效液液分離的色譜技術(shù)，該分離技術(shù)避免了固體吸附使用中存在的不可逆吸附問(wèn)題，具有樣品污染小、活性影響小、回收率高，在生物制藥、活性成分分離等方面具有較大應(yīng)用價(jià)值[1-2]。本文從高速逆流色譜溶劑體系選擇、應(yīng)用方面介紹了高速逆流色譜技術(shù)研究情況，為其進(jìn)一步利用提供參考。

1 HSCCC溶劑體系

HSCCC的基礎(chǔ)是單向性動(dòng)力學(xué)平衡原理，在螺旋管中包含著兩個(gè)互不相溶的溶劑，當(dāng)螺旋管高速旋轉(zhuǎn)時(shí)，兩相將分開(kāi)呈單向分布，其中一相作固定相，恒流泵將載有樣品的流動(dòng)相輸送經(jīng)過(guò)固定相，因樣品在兩相中分配系數(shù)不同而實(shí)現(xiàn)分離。

1.1 兩個(gè)溶劑系統(tǒng)選擇基本要求[3]

兩個(gè)溶劑系統(tǒng)選擇基本要求：①兩相溶劑體系應(yīng)穩(wěn)定，溶劑系統(tǒng)分層時(shí)間小于30s；②溶劑不會(huì)引起樣品的分解與變性；③樣品溶解度較高；④目標(biāo)化合物在兩相溶劑系統(tǒng)中分配系數(shù)在0.5～2；⑤溶劑易揮發(fā)；⑥固定相保留值盡量不低于50%。

1.2 不同極性溶劑體系

根據(jù)極性不同分為強(qiáng)極性溶劑體系、中等極性溶劑體系、弱極性溶劑體系。HSCCC常用的基本溶劑系統(tǒng)見(jiàn)表1。

表1 HSCCC常用的基本溶劑系統(tǒng)[4]

2 HSCCC應(yīng)用研究進(jìn)展

2.1 在天然產(chǎn)物中的應(yīng)用

大量文獻(xiàn)報(bào)道，HSCCC技術(shù)可對(duì)黃酮、生物堿、多酚類和蒽醌類衍生物等天然產(chǎn)物的提取分離方面具有較好的效果。李晨[5]等以乙酸乙酯-正丁醇-水(5∶2∶5，v∶v)為兩相溶劑系分離制備金銀木葉中的蘆丁。朱曉娜[6]等以正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水-冰醋酸(1∶1∶1∶1∶0.05，v/v)為兩相溶劑，從槐花中分離出蘆丁和槲皮素，其純度均在97%以上。陳田[7]以正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水、冰乙酸的體積比15∶15∶20∶20∶7.5為溶劑系統(tǒng)，從干辣椒中提取生物堿，二氫辣椒素和辣椒素，純度分別為98.2%和98.0%。

2.2 在食品領(lǐng)域中的應(yīng)用

王凱[8]應(yīng)用正己烷-乙腈-甲醇(4∶1∶2,v/v/v)和正己烷-甲醇(2∶1，v/v)兩種溶劑體系，利用HSCCC技術(shù)從雨生紅球藻粗提物中分離純化得到角黃素、蝦青素十六碳二烯酸單酯、蝦青素亞麻酸單酯、蝦青素亞油酸單酯、β-胡蘿卜素、蝦青素棕櫚酸-二十二碳二烯酸雙酯。阮寶玉[9]應(yīng)用HSCCC技術(shù)從紅色西瓜瓤粗提取物中分離番茄紅素，純度為98.3%。林仙江[10]采用正己烷-乙醇-水(4∶3∶1，v/v)溶劑體系，從小球藻皂化提取物中一步制備分離葉黃素，純度達(dá)94.1%。

3 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，HSCCC作為一種集分析及制備的技術(shù)，具有性能可靠、易于操作、可以避免樣品損失、失活、變性等優(yōu)點(diǎn)。 但是，HSCCC仍存在一定缺點(diǎn)需要改進(jìn)與完善，如溶劑體系的選擇還需要進(jìn)一步完善、制備分離量還不能達(dá)到公斤級(jí)的分離純化。高速逆流色譜在天然產(chǎn)物、食品分離、藥物提取等方面的研究和開(kāi)發(fā)呈現(xiàn)強(qiáng)大優(yōu)勢(shì)。