王詩瑤 楊平 徐昕 張婉悅 湯震宇 劉影

【摘 要】 本實驗以研究促鈣吸收肽的可控制備為主要內容，用超聲波輔助提取出魚鱗中的酸溶性膠原蛋白，酶解法將膠原蛋白水解成小分子肽，測定與鈣的結合量找到制備促鈣吸收肽的最佳工藝，采用鯉魚鱗為原料，減少可利用營養(yǎng)物質的浪費。

【關鍵詞】 鯉魚鱗；促鈣吸收肽；超聲波輔助提取

[Abstract] In order to study the controllable preparation of calcium promoting peptide， the acid-soluble collagen from fish scales was extracted by ultrasonic assisted extraction， and the collagen was hydrolyzed into small peptide by enzymatic hydrolysis. The optimum technology for preparing calcium-promoting peptide was found by determining the binding amount of calcium and the waste of available nutrients was reduced by using carp scale as raw material.

[Keywords] carp scale； calcium stimulating peptide； ultrasonic assisted extraction

我國水產品產量一直處于領先地位，每年產生250萬噸的下腳料，大部分被浪費[1]。超聲波提取技術作為一種新技術，具有傳統(tǒng)提取方法達不到的優(yōu)點[2]。鈣是一種必需微量營養(yǎng)元素，美國農業(yè)部國家營養(yǎng)數(shù)據庫的數(shù)據表明[3]， 通常食用的谷物中鈣含量均無法達到3.3%推薦鈣攝入量。本研究以鯉魚鱗為原料，利用超聲波輔助提取出ASC，并用酶解技術將ASC分解成小分子肽促進鈣的吸收。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

鯉魚鱗 水產品市場取得；堿性蛋白酶，中性蛋白酶，復合蛋白酶 丹麥Novozymes公司；其余試劑均為國產分析純。

1.2 主要儀器設備

SB25-12DTD超聲波清洗機 寧波新芝生物科技股份有限公司；SHA-B/C數(shù)顯恒溫水浴振蕩器 天津市賽得利斯實驗分析儀器制造廠；721G可見分光光度計 上海儀電分析儀器有限公司；LGJ-12冷凍干燥機 北京松源華興科技發(fā)展有限公司；TGL-15GE離心機 湖南科學儀器有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 膠原蛋白提取 將除雜后的魚鱗于0.5M乙酸溶液（1：10（w/v））浸泡48h（以上過程均在4℃下進行），并在30℃于500W的超聲波下輔助分離30min，過濾后濾液中加入NaCl至最終濃度為0.9M，靜置12h，懸浮液用8000r/min離心20min，沉淀重新溶于0.5M乙酸，轉入透析袋內，用0.5M乙酸和蒸餾水分別透析12h，每隔3h換一次溶液，冷凍干燥后即為ASC[4-5]。

1.3.2 促鈣吸收肽制備 將膠原蛋白用水配成10%的懸濁液。（1）底物濃度不同：調整溫度40℃，pH5.5，酶解時間50min，底物濃度分別為1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL。（2）溫度不同：調整底物濃度20mg/mL，pH5.5，酶解時間50min，溫度分別為40℃、45℃、50℃、55℃、60℃。（3）pH不同：其余條件同上，pH分別為5.5、6.0、6.5、7.0、7.5。（4）酶解時間不同：調整底物濃度20mg/mL。

復合蛋白酶：溫度55℃，pH7.0。

中性蛋白酶：溫度50℃，pH6.5。

堿性蛋白酶：溫度55℃，pH7.5。

酶解時間分別為50min、108min、165min、223min、280min。恒溫2h，100℃下滅酶10min，測定不同底物濃度下所得樣品的鈣結合率[6]。

鈣結合率的測定：參照文獻[7-8]的方法，測定并計算鈣結合率。

2 結果分析

2.1 pH不同

由圖1可知，復合蛋白酶在pH 7、中性蛋白酶在pH 6.5、堿性蛋白酶在pH 7.5達到最大值，且三種蛋白酶中中性酶的鈣濃度最高。

2.2 酶解溫度不同

由圖2可知，復合蛋白酶在55℃、中性蛋白酶在50℃、堿性蛋白酶在60℃達到最大值，且三種蛋白酶中中性酶的值最高。

2.3 酶解時間不同

由圖3可知，復合蛋白酶在165min、中性蛋白酶在223min、堿性蛋白酶在280min達到最大值，且三種蛋白酶中中性酶的值最高。

3 結論

由上圖可知，中性蛋白酶效果最佳。本試驗采用單因素試驗的方法獲得制備促鈣吸收肽的最佳工藝，中性蛋白酶酶解、pH 6.5、酶解溫度50℃、酶解時223min的條件下是制備促鈣吸收肽的最佳工藝。

參考文獻：

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[3] Hou T， Wang C， Ma Z， et al. Desalted duck egg white eptides： promotion of calcium uptake and structure characterization[J]. J Agric Food Chem， 2015， 63（27）： 8170-8176.

[4] 梁建華.超聲波輔助提取羅非魚皮膠原蛋白及其功能結構 性質的研究[D].廣州：華南理工大學，2015.

[5] 肖楓.黃河鯉魚鱗膠原蛋白的性質及膠原肽活性研究[D]. 鎮(zhèn)江：江蘇大學，2014.

[6] 何莉萍，劉良忠.中性蛋白酶和堿性蛋白酶對玉米蛋白水 解作用的研究[J].食品科學，2007，29（3）：152-157.

[7] 傅啟高，雒秋江.用鄰-甲酚酞比色法測定飼料中鈣含量的 研究[N].動物營養(yǎng)學報，1996-8（3）.

[8] 戚邦華.鄰—甲酚酞新光度法快速測定飼料中鈣[J].中國飼 料，1998（07）：22-23.