蒙醫(yī)蒜變劑瀉藥對阿霉素致大鼠腎病綜合征模型局灶性病變的影響△

張 全 薩如拉 王青春

(內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010056)

原發(fā)性腎病綜合征(NS)由多種疾病組成，主要包括：微小病變腎病(MCD)、局灶節(jié)段性腎小球硬化(FSGS)、膜性腎病、IgA腎病、膜增生性腎小球腎炎等[1]。在臨床實踐中，慢性腎小球腎炎腎病綜合征是一種常見疾病，也是導(dǎo)致終未期腎病(ESRD)最常見的病因，兒童多見。診斷標(biāo)準(zhǔn)為大量尿蛋白、低蛋白血癥、水腫、高血脂等特點。

局灶階段性腎小球硬化 (FSGS) 在兒童腎病綜合征中約占5%，臨床常表現(xiàn)為激素耐藥或激素依賴，很快進展為終末期腎病 (ESRD) 并需行腎臟替代治療。兒童ESRD中20%由FSGS引起，一般認(rèn)為10～15 年內(nèi)2/3的病例已進展至ESRD[2]。目前尚缺乏治療FSGS的有效藥物。臨床研究表明，蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”治療腎病綜合征局灶性病變臨床療效確切，但其作用機制尚未明確。為了進一步開發(fā)和利用蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”，筆者觀察了蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”對阿霉素致腎病大鼠局灶性病變的治療作用，探討了相關(guān)機制。

1 材料

1.1 實驗動物 清潔級SD大鼠60只，體重(200 20g)，雄性，由北京維通利華實驗技術(shù)有限公司提供[動物合格證號：SCXK(京)2014—0003]大鼠飼養(yǎng)和實驗均在內(nèi)蒙古自治區(qū)國際蒙醫(yī)醫(yī)院創(chuàng)新蒙醫(yī)藥工程研究中心進行。

1.2 藥物及試劑 蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”是以大蒜、金柯子、肉蔻、紅花、巴豆、冰片、牛奶等組成。制作方法，水煎、過濾、濃縮至2.5g/ mL，裝入瓶中待用。注射用鹽酸多柔比克(ADR 阿霉素批號031106)；戊巴比妥鈉由佛山市化工實驗廠提供。IL-8、IL-13試劑盒由美國R&D公司生產(chǎn)(96T，貨號201308)。

1.3 主要儀器 全自動血液生化分析儀(美國實驗儀器公司生產(chǎn))，721 紫外分光光度儀(美國PACKA．Rn 公司生產(chǎn))，透射電鏡(JEM-1200EX)，ST16R臺式高速冷凍離心機(由美國Thermo公司生產(chǎn))。

2 方法

2.1 分組及造模 參照Bertani[3]氏方法，將60只小鼠隨機分為6組，每組10只，對照組，模型組，陽性對照組，蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”高劑量、中劑量、低劑量組，除對照組之外，其余各組大鼠尾靜脈注射ADR 4mg/kg，1W 后，第二次注射3.5mg/kg，對照組用相同的方法注射相同體積的生理鹽水，復(fù)制多柔比星微小病變型腎病大鼠模型。

2.2 給藥 自第二次注射ADR 后次日起給藥，蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”高、中、低劑量組(5.5gkg-1d-1、2.25gkg-1d-1、0.63gkg-1d-1)、陽性對照藥(腎炎四味片，1.296gkg-1d-1)，對照組、模型組給予等體積生理鹽水作為對照，灌胃量3mL(kgd-1)。各組均連續(xù)給藥21d。

2.3 指標(biāo)檢測

2.3.1 一般情況 一般情況觀察大鼠的精神狀態(tài)、體重、體毛、進食量、飲水量、二便及活動情況等。

2.3.2 24h尿蛋白檢查 將大鼠單獨喂養(yǎng)在代謝籠中，收集24h尿液，記錄尿量，分別于第7 d和第14 d、第21 d用比色法測定大鼠24h 尿蛋白定量。尿蛋白定量(mg/dL)=比色結(jié)果×100×6.43。

2.3.3 IL-8、IL-13的檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附測定法測定血清IL-8、IL-13，具體步驟按照試劑說明書。

2.3.4 腎組織形態(tài)學(xué)觀察 腎臟形態(tài)學(xué)檢查實驗第6周末殺檢。取少量腎皮質(zhì)組織，用2%戊二醛固定30min，再用1%鋨酸固定1h，脫水，常規(guī)包埋，制作超薄切片，鈾-鉛雙染色，用電鏡觀察。

3 結(jié)果

3.1 一般情況 一般情況除對照組外，尾靜脈注射ADR的各組大鼠均有不同程度的腹瀉，攝食減少，精神萎靡，活動減少，體毛干枯不齊，尾部蒼白粗糙，甚至爛尾等現(xiàn)象，治療組大鼠一般情況較好。

3.2 各組24h 尿蛋白的比較 給藥后7、14、21 d，模型組大鼠尿蛋白量進行性升高，明顯高于對照組(P<0.01)；給藥后第7d，蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”各組尿蛋白定量均較同期模型組降低，但無顯著性差異：給藥后14 d，蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”各組明顯低于模型組，有顯著性差異(P<0.05)，21d 后蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”各組治療作用最為顯著(P<0.01)，表1。

表1 各組24h 尿蛋白的比較

注：與同期對照組比較 ，#P<0.05，##P<0.01，與同期模型組比較 *P<0.05，**P<0.01。

3.3 各組血清IL-8、IL-13的比較 造模后，模型組大鼠血清IL-8升高，IL-13降低，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；給藥后，與模型組比較，蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”各組IL-8降低，IL-13 升高(P<0.05)，其中蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”高劑量組尤為顯著，但各組間無量效關(guān)系。提示，蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”能顯著改炎癥因子的失調(diào)，表2。

表2 各組血清IL-8、IL-13的比較

注：與同期對照組比較#P<0.05，##P<0.01，與同期模型對照組比較*P<0.05，**P<0.01。

3.4 腎組織形態(tài)學(xué)觀察 電鏡顯示，對照組鼠腎小球上皮的足突清楚可見，內(nèi)皮窗孔清晰，基底膜均勻完整。模型組鼠腎小球上皮的足突廣泛融合。蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”高劑量組鼠腎小球上皮的足突融合較模型組明顯減輕，僅局部融合，圖1。

4 討論

腎病綜合征發(fā)病主要與免疫機制有關(guān)，體液免疫在腎小球腎炎中的作用已被證實，抗體與腎小球的結(jié)構(gòu)成分結(jié)合或循環(huán)免疫復(fù)合物沉積于腎小球內(nèi)，通過補體活化和炎癥細胞反應(yīng)導(dǎo)致組織損傷。細胞免疫在介導(dǎo)腎小球損傷中也起重要作用，T細胞在增值和非增值性腎小球病變中起作用。同時，原發(fā)性腎小球腎炎多種病灶伴間質(zhì)大量T細胞及巨噬細胞浸潤，與腎小球功能失常，腎小球硬化等有關(guān)[4]。

腎小球損傷起動后，通過浸潤細胞和腎小球固有細胞產(chǎn)生多種細胞因子和其他炎癥介質(zhì)，這些炎癥介質(zhì)又作用于腎臟固有細胞及局部浸潤炎癥細胞，造成炎癥反應(yīng)的瀑布效應(yīng)。致炎性細胞因子(proinflammatory factors)與抗炎性細胞因子(anti-inflammatory factors)的相互作用可能決定腎小球炎癥的發(fā)展與轉(zhuǎn)歸。腎小球腎炎發(fā)病機制還與血流動力學(xué)改變和遺傳因素等有關(guān)。

IL-8是一種重要的趨化因子，對炎癥部位炎性細胞的浸潤積聚和組織損傷起重要作用。IL-13主要作用為抑制炎癥反應(yīng)。兩者均參與細胞因子網(wǎng)絡(luò)，調(diào)節(jié)體內(nèi)免疫平衡[5]。

蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”是著名老蒙醫(yī)阿日木扎用來治療腎病綜合征的良方，是以大蒜、金柯子、肉蔻、紅花、巴豆、冰片、牛奶等組成的制劑，主治3種水腫病，虛、寒型浮腫，對從下肢開始浮腫到胸腔的疾病具有很好的作用。它以蒙醫(yī)基礎(chǔ)理論為指導(dǎo)，通過腸道、尿道將病變組織的毒物、代謝物排出人體，調(diào)節(jié)體素，從而治療該疾病，多年的臨床實踐表明，蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”治療局灶階段性腎小球硬化具有獨特效果[6]。

本研究結(jié)果表明，蒙醫(yī)“蒜變劑瀉藥”能顯著改善24h尿蛋白排泄量，減輕腎臟損害，緩解腎組織局灶性病變，而其可能與調(diào)節(jié)趨化因子IL-8和抗炎性因子IL-13網(wǎng)絡(luò)機制，減少體液免疫反應(yīng)有關(guān)。