張林平，戴必勝，歐陽(yáng)資章

1清遠(yuǎn)職業(yè)技術(shù)學(xué)院護(hù)理學(xué)院，廣東 清遠(yuǎn) 511520;2清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院藥劑科

慢性疲勞綜合征（chronic fatigue syndrome，CFS）患者常表現(xiàn)為難以忍受的全身乏力、慢性疲勞，患者工作生活受到很大影響。筆者采用瑤藥和傳統(tǒng)中藥組成瑤藥抗疲方治療慢性疲勞綜合征，對(duì)消除疲勞有顯著的效果［1］，但其治療機(jī)制尚未闡明。CFS的發(fā)病與患者在應(yīng)激狀態(tài)下神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)及代謝功能失調(diào)有關(guān)，相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道多以此為基礎(chǔ)來(lái)闡明CFS的發(fā)病機(jī)制

和治療機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)以Wistar大鼠建立慢性疲勞綜合征模型，并以瑤藥進(jìn)行干預(yù)，測(cè)定大鼠血清丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性以及血液流變參數(shù)變化，試圖為瑤藥抗疲方治療CFS提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并從氧自由基代謝和血液流變學(xué)角度推測(cè)CFS的發(fā)病機(jī)制和瑤藥抗疲方的治療機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 Wistar大鼠30只，雄性，平均體質(zhì)量（180±20）g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（粵）20090011。由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥物 瑤藥抗疲方，藥物組成：黃花倒水蓮20g，五指毛桃20g，黨參15g，白術(shù)10g，丹參15g，葛根15 g，淫羊藿15 g，郁金15 g。以上中草藥均購(gòu)自廣東大參林連鎖藥店有限公司，經(jīng)鑒定全部藥材均符合藥用標(biāo)準(zhǔn)。將上方水煎濃縮為含生藥1.30 g/mL的濃縮液。

1.3 分組與造模 取雄性大鼠30只，適應(yīng)性飼養(yǎng)，任其自由攝水和飲食。1周后，隨機(jī)選取10只大鼠為對(duì)照組，另外20只進(jìn)行慢性疲勞綜合征大鼠造模。造模方法采用文獻(xiàn)報(bào)道方法［2-3］：1）單日冷水（4℃）游泳30分鐘（勞力）；2）雙日讓其與發(fā)情期Wistar雌鼠合籠（每次合籠均新?lián)Q一批雌鼠，房勞）；3）每天上午9：00～12：00 將大鼠置于自制限制活動(dòng)的塑料筒內(nèi)，不能自由活動(dòng)，同時(shí)禁止飲食，每次限制活動(dòng)3小時(shí)（勞神）。造模時(shí)間連續(xù)14天，造模結(jié)束后，將造模成功的20只雄鼠隨機(jī)分為模型組及瑤藥抗疲方組，每組10只。

1.4 處理方法 1）對(duì)照組與模型組：普通飼養(yǎng)，按每100g體質(zhì)量1mL給予生理鹽水灌胃；2）瑤藥抗疲方組：普通飼養(yǎng)，按每100 g體質(zhì)量1 mL給予瑤藥抗疲方濃縮液灌胃。從造模結(jié)束次日起開(kāi)始灌胃給藥，3組均1次/d，連續(xù)14天。

1.5 取材與檢測(cè) 末次給藥次日，3組大鼠均采集頸總動(dòng)脈血。試管中靜置20分鐘，4℃，3 000 r/min離心10分鐘，按照測(cè)定試劑盒的技術(shù)要求制備血清。用HT-l型血液流變儀（上海航天局第803所）測(cè)定全血黏度（高切、低切）、血漿黏度。SOD和MDA測(cè)定分別采用硫代巴比妥酸法、黃嘌呤氧化酶法，試劑盒均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠血清M D A含量及SO D活性 模型組大鼠與對(duì)照組比較，大鼠血清SOD活性明顯下降（P＜0.01）并且MDA含量明顯上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；瑤藥抗疲方組與模型組比較，大鼠血清SOD活性及血清MDA含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 3組大鼠血清M D A含量及SO D活性比較（±s）

表1 3組大鼠血清M D A含量及SO D活性比較（±s）

注：與模型組比較，a表示P＜0.05，b表示P＜0.01

組別 只數(shù) 劑量 /（g·kg-1） M D A/（nm ol·m L-1） SO D/（U·m L-1）對(duì)照組 10 - 6.99±1.24b 245.29±12.54b模型組 10 - 9.01±0.56 224.67±12.63瑤藥抗疲方組 10 13.0 8.18±0.48a 244.10±5.21b

2.2 大鼠血液流變學(xué)指標(biāo) 模型組與對(duì)照組比較，高切和低切黏度升高明顯（P＜0.01），血漿黏度升高明顯（P＜0.01）；瑤藥抗疲方組與模型組比較，大鼠高切和低切黏度降低明顯（P＜0.01），血漿黏度有所降低（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 3組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)比較（±s）

注：與模型組比較，a表示P＜0.05，b表示P＜0.01

組別 只數(shù) 劑量/（g·kg-1） 全血黏度/（m Pa·s） 血漿黏度/（m Pa·s）高切200/s 低切1/s對(duì)照組 10 - 0.20±0.06b 4.22±0.41b 1.13±0.09b模型組 10 - 2.38±0.53 6.30±0.27 1.45±0.81瑤藥抗疲方組 10 13.0 0.44±0.08b 4.38±0.41b 1.19±0.22a

3 討論

CFS患者的物理和實(shí)驗(yàn)室檢查常無(wú)明顯的特異性表現(xiàn)，其發(fā)病機(jī)制仍然在探索之中。有研究顯示，神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)及代謝功能失調(diào)可能參與了CFS的發(fā)生?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為自由基與許多疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。有文獻(xiàn)報(bào)道，CFS的發(fā)生與自由基網(wǎng)絡(luò)中的氧自由基代謝平衡失調(diào)有關(guān)［4］。機(jī)體通過(guò)有效的抗氧化防御系統(tǒng)，維持氧自由基生成與清除的動(dòng)態(tài)平衡。在抗氧化防御系統(tǒng)中，SOD是最主要的抗氧化酶，是氧自由基的清除劑，可保護(hù)細(xì)胞免受損傷。MDA是氧自由基與不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物，對(duì)細(xì)胞有損傷作用。二者的測(cè)定常常相互印證，反映機(jī)體氧自由基的代謝狀況。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠血清SOD活性降低而MDA含量升高，反映出模型大鼠氧自由基代謝紊亂。推測(cè)可能與大鼠在勞力、勞神、房勞狀態(tài)下，機(jī)體清除氧自由基能力下降、代謝穩(wěn)態(tài)失衡，其強(qiáng)大的破壞作用引起機(jī)體組織功能的氧化損傷，導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)環(huán)境如神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)及代謝功能失調(diào)有關(guān)?，幩幙蛊７綄?duì)CFS大鼠進(jìn)行干預(yù)后，均能不同程度地提高大鼠血清SOD的活性，降低MDA的含量，提示瑤藥抗疲方能增強(qiáng)機(jī)體清除氧自由基的能力，抵抗氧自由基對(duì)機(jī)體的氧化應(yīng)激損害，維持自由基生成與清除的代謝穩(wěn)態(tài)，這可能是瑤藥抗疲方治療CFS的機(jī)制之一。

本實(shí)驗(yàn)同時(shí)觀察到模型組大鼠在不同切變力下全血黏度和血漿黏度與對(duì)照組大鼠相比明顯升高，提示在CFS狀態(tài)下，大鼠機(jī)體血液流變學(xué)特性改變可能與CFS的發(fā)生發(fā)展有關(guān)［5］。血液流變性異常引起血流動(dòng)力學(xué)變化、微循環(huán)障礙，導(dǎo)致組織缺血缺氧、代謝紊亂和功能失調(diào)，導(dǎo)致CFS發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)中瑤藥抗疲方組大鼠的血液流變學(xué)指標(biāo)明顯比模型組大鼠下降，提示瑤藥抗疲方能降低血液黏度，改善微循環(huán)，改善組織缺血缺氧狀態(tài)，改善CFS機(jī)體內(nèi)環(huán)境，促進(jìn)CFS的康復(fù)。

現(xiàn)代中醫(yī)藥研究認(rèn)為CFS可導(dǎo)致多個(gè)臟腑的氣血陰陽(yáng)失調(diào)，病機(jī)復(fù)雜。筆者在臨床中觀察到CFS患者多見(jiàn)心、脾、腎3臟氣虛，濕瘀阻滯，氣郁不利等證，瑤藥抗疲方據(jù)此而立。方中黃花倒水連、五指毛桃是廣東瑤族地區(qū)常用的民間草藥?，F(xiàn)代藥理研究顯示，黃花倒水蓮具有清除自由基作用［6］，黃花倒水蓮總苷能抑制血瘀模型和高脂血癥血液流變學(xué)指標(biāo)的改變，降低血液黏度，改善血液循環(huán)［7］。五指毛桃水提液可提高實(shí)驗(yàn)小鼠血清SOD，降低小鼠血清 MDA水平［8］。方中白術(shù)含有的白術(shù)多糖能增強(qiáng)衰老大鼠大腦皮質(zhì)SOD、GSH-Px活力，降低自由基代謝產(chǎn)物的含量［9］。丹參活血化瘀，可改善微循環(huán)。葛根素對(duì)家兔紅細(xì)胞壓積、全血比黏度、血沉等指標(biāo)也有改善作用。淫羊藿總黃酮可明顯增強(qiáng)機(jī)體神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)的調(diào)節(jié)功能，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，激發(fā)機(jī)能，延緩衰老［10］?，幩幙蛊７竭x藥結(jié)合了現(xiàn)代藥理學(xué)的研究成果，諸藥相互協(xié)同，起到了改善CFS大鼠血液流變學(xué)異常和恢復(fù)機(jī)體氧自由基代謝平衡的作用。

以中醫(yī)病因理論為依據(jù)，通過(guò)竭力運(yùn)動(dòng)、束縛應(yīng)激和過(guò)度交配模擬人類(lèi)的勞傷致病因素，建立大鼠CFS模型，與人類(lèi)因社會(huì)環(huán)境和工作壓力而產(chǎn)生CFS狀態(tài)的病因相似?，幩幙蛊７礁深A(yù)CFS大鼠，可減輕大鼠的疲勞反應(yīng)，增強(qiáng)其抗自由基氧化能力，降低血液黏度，改善微循環(huán)，從而起到治療CFS的作用。