高效液相色譜法測定磷酸左奧硝唑酯二鈉的含量

楊成 陸華龍（通訊作者）（陜西合成藥業(yè)股份有限公司 陜西 西安 715100）

磷酸左奧硝唑酯二鈉為化學藥物1.1類新藥。該新藥為奧硝唑的左旋異構體磷酸酯衍生物的鈉鹽，作為左旋奧硝唑的前體藥物，磷酸左奧硝唑酯二鈉在體內(nèi)可以迅速分解為有效成分左旋奧硝唑而起到抗厭氧菌的作用。主要用于：用于治療由脆弱擬桿菌、狄氏擬桿菌、多形擬桿菌、普通擬桿菌、梭狀芽胞桿菌、真桿菌、消化球菌和消化鏈球菌、幽門螺桿菌、黑色素擬桿菌、梭桿菌、牙齦類桿菌等敏感厭氧菌所引起的多種感染性疾病。迄今為止，尚未見磷酸左奧硝唑酯二鈉的含量方法的相關報道，鑒于此，我們研究開發(fā)了磷酸左奧硝唑酯二鈉的含量測定方法采用高效液相色譜法測定，旨在尋找一種更加科學合理的檢測方法。

1.儀器與試藥

儀器：美國 Thermo U3000高效液相色譜儀，包括 U3000四元泵，U3000可變檢測波長, U3000柱溫箱，U3000自動進樣器。

試藥：磷酸左奧硝唑酯二鈉由陜西合成藥業(yè)股份有限公司提供。

對照品：磷酸左奧硝唑酯二鈉由陜西合成藥業(yè)股份有限公司提供。

甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2.方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Welch，XtimateTM-C18，（4.6×250mm Column 5-Micron）檢測波長：321nm；柱溫：30℃；流速：1.0ml/min；流動相：以含0.01%庚烷磺酸鈉的0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（用三乙胺調(diào)pH至6.5）-甲醇（85：15）。理論板數(shù)按磷酸左奧硝唑酯二鈉峰計算應不低于2500。

2.2 對照品溶液的制備

取磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋制成每 1ml約含磷酸左奧硝唑酯二鈉0.04mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取磷酸左奧硝唑酯二鈉適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋制成每 1ml約含磷酸左奧硝唑酯二鈉0.04mg的溶液， 即得。

2.4 專屬性試驗

取流動相溶液按上述色譜條件測試。結果在磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品出峰位置未見其它雜質(zhì)的干擾峰(見圖1～3)，說明按本文的試驗條件測定， 空白溶劑無干擾。

圖1 空白溶劑圖譜

圖2 供試品溶液圖譜

圖3 對照品溶液圖譜

2.5 線性關系考察

精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品適量，用流動相溶解并稀釋成每1ml含磷酸左奧硝唑酯二鈉91.8、81.6、71.4、61.2、51.0、40.8、30.6、20.4ug的溶液，精密量取各溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積Y為縱坐標，以濃度X為橫坐標，繪制標準曲線，見表1。

表1 含量測定標準曲線

結論：線性回歸方程Y=0.5341X+0.7177 R2=0.9994 n=8磷酸左奧硝唑酯二鈉在91.8～20.4μg/ml的濃度范圍內(nèi)線性關系較好。

2.6 重復性試驗

精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉供試品適量，共六份，分別用流動相溶解并稀釋制成含磷酸左奧硝唑酯二鈉40ug/ml的溶液，作為供試品溶液，精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品適量，用流動相溶解并稀釋制成含磷酸左奧硝唑酯二鈉40ug/ml的溶液，作為對照品溶液。取供試品和對照品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算含量，試驗結果見表2。

表2 磷酸左奧硝唑酯二鈉含量測定重復性結果

2.7 溶液穩(wěn)定性試驗

精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品適量，用流動相溶解并稀釋制成含磷酸左奧硝唑酯二鈉40ug/ml的溶液，室溫下放置0、2、4、6、8、10、12小時后測定，結果見表3。

表3 含量測定溶液放置穩(wěn)定性

2.8 回收率試驗

供試品溶液的制備：精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉32mg、40mg、48mg各三份，分別置9個10ml量瓶中，分別用流動相溶解，搖勻，精密量取1ml，置100ml量瓶中，用上述溶劑稀釋制成每1ml中約含磷酸左奧硝唑酯二鈉32ug、40ug、48ug的溶液，即得80%、100%、120%的樣品溶液各三份；另精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品適量，同法制成每1ml約含磷酸左奧硝唑酯二鈉40ug的溶液，作為對照品溶液，照上述色譜條件測定，計算出本品含量測定的回收率，結果見表4。

表4 含量測定回收率試驗結果

2.9 含量測定

取磷酸左奧硝唑酯二鈉適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋制成每1ml約含磷酸左奧硝唑酯二鈉0.5mg的溶液，作為供試品溶液，精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品適量，精密稱定，同上操作，作為對照品溶液，同法測定。按外標法以峰面積計算，結果見表5。

表5 含量測定結果

3.討論

我們選用高效液相色譜法測定磷酸左奧硝唑酯二鈉的含量，使其和制劑測定方法相統(tǒng)一，減少各方法間的誤差，準確的控制制劑生產(chǎn)各環(huán)節(jié)的含量，避免因原料含量中磷酸左奧硝唑酯二鈉測定過高，導致投料量小，給中間體和成品帶來含量過低重新加料的麻煩。