許 勇 馬培玉

1.濮陽(yáng)市公安局刑偵支隊(duì)刑事科學(xué)技術(shù)研究所，河南 濮陽(yáng) 457000；2.焦作市公安局刑偵支隊(duì)刑事科學(xué)技術(shù)研究所，河南 焦作 454002

近年來(lái)，隨著生化技術(shù)的高速發(fā)展，DNA檢驗(yàn)技術(shù)已經(jīng)相當(dāng)靈敏，最低檢出線可以達(dá)到pg級(jí)水平，在案件偵破中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，可以檢驗(yàn)的檢材種類(lèi)也越來(lái)越多，特別是接觸性的微量DNA檢材。在某些重點(diǎn)案件特別是命案兇器等重要檢材的處理過(guò)程中，我們經(jīng)常會(huì)遇到這樣的問(wèn)題：物證表面的指紋印跡(屬于接觸性微量檢材)，若是直接擦拭提取DNA則對(duì)指紋造成了破壞，而使用502膠熏顯法對(duì)指紋進(jìn)行顯現(xiàn)又擔(dān)心會(huì)對(duì)DNA的檢驗(yàn)造成影響。那么502膠熏顯到底會(huì)對(duì)DNA提取造成怎樣的影響？這種問(wèn)題如何解決?本文通過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)這一問(wèn)題進(jìn)行深入分析探討。

一、材料和方法

(一)樣本

選10個(gè)隨機(jī)個(gè)體，年齡段在20-50歲之間(犯罪高危年齡段)，將手洗凈擦干，十分鐘后在載玻片上摁壓兩個(gè)右手拇指指紋，分別標(biāo)記為A、B、C、D、E、F、G、H、I、J。

(二)儀器試劑

使用儀器：德國(guó)eppendorp公司Centrifuge5424高速離心機(jī)、中國(guó)黑馬公司恒溫金屬浴、美國(guó)AB公司AUTOMATE核酸提取儀、美國(guó)AB公司9700A型PCR擴(kuò)增儀、美國(guó)AB公司7500 PCR定量?jī)x、美國(guó)AB公司3500xl測(cè)序儀。

配套試劑：美國(guó)AB公司Quantifiler○RDuo試劑盒、美國(guó)AB公司ID-plus擴(kuò)增試劑盒。

(三)實(shí)驗(yàn)方法

第一步用植絨拭子擦拭載玻片上的一枚指紋，將棉簽頭剪下置于1.5ml離心管內(nèi)，加入200ul裂解液(BTA)，20ul的PK溶液。56℃震蕩保溫1小時(shí)，離心去載體，取上清液，使用美國(guó)AB公司AUTOMATE核酸提取儀提純DNA；將剩下的另一枚指紋送至痕跡檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行502熏顯。用植絨拭子擦拭熏顯后的指紋，之后步驟同第一步。兩組溶液標(biāo)記為熏顯前及熏顯后，分別進(jìn)行PCR實(shí)時(shí)定量操作與PCR擴(kuò)增、熒光測(cè)序。

二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

(一)電泳分析結(jié)果

熏顯前及熏顯后兩組樣本的DNA溶液經(jīng)在美國(guó)AB公司3500xl測(cè)序儀電泳分析均獲得ID-plus體系的15個(gè)STR基因分型，峰高、域值在熏顯前后無(wú)明顯差異。

(二)PCR定量結(jié)果

項(xiàng)目編號(hào)定量結(jié)果(ng/ml)ABCDE熏顯前0.00250.06500.00720.02450.0032熏顯后0.00400.05130.00650.04060.0022

項(xiàng)目編號(hào)定量結(jié)果(ng/ml)FGHIJ熏顯前0.00380.00260.05720.04150.0067熏顯后0.00310.00350.04650.03780.0044

三、討論

首先本實(shí)驗(yàn)通過(guò)中國(guó)實(shí)驗(yàn)室國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)(CNAL)認(rèn)證，所有實(shí)驗(yàn)操作均符合規(guī)范且具有可靠性與權(quán)威性，從本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，排除實(shí)驗(yàn)中的不可控因素(指紋分割的不均勻性)及定量操作中的誤差因素等，其他影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素均在可控范圍之內(nèi)。其次熏顯前后的檢驗(yàn)結(jié)果數(shù)值相差<0.01ng/ml，對(duì)PCR擴(kuò)增及電泳分析影響很小可忽略不計(jì)，由此得出結(jié)論：一是常用的502膠熏顯法對(duì)接觸性的微量DNA檢材不存在破壞作用；二是對(duì)法醫(yī)DNA檢驗(yàn)普遍采用的PCR擴(kuò)增試劑，電泳測(cè)序影響不大。

分析其原因：一是502膠熏顯法是一種物理顯現(xiàn)方法，通過(guò)對(duì)502膠加熱熏蒸，使502膠蒸汽對(duì)指紋紋線進(jìn)行包裹凝固從而達(dá)到顯現(xiàn)指紋的目的，其過(guò)程并沒(méi)有對(duì)指紋上的DNA進(jìn)行破壞，所以使繼續(xù)對(duì)熏顯過(guò)的指紋進(jìn)行DNA檢驗(yàn)成為可能。二是502膠的主要成分為α-氰基丙烯酸乙酯，加入增粘劑、穩(wěn)定劑增韌劑、阻聚劑等，通過(guò)一定反應(yīng)形成的單組分瞬間固化劑[1]，和空氣中微量水催化下發(fā)生加聚反應(yīng)，迅速固化而將被粘物粘牢。其化學(xué)成分為樹(shù)脂，在高溫下可以由有機(jī)溶劑溶解，從而釋放出被膠包裹的人體細(xì)胞DNA，進(jìn)行PCR反應(yīng)，最終電泳測(cè)序，檢出DNA結(jié)果。三是對(duì)PCR擴(kuò)增有顯著影響的抑制劑有重金屬離子和某些有機(jī)溶劑如：苯酚，EDTA，尿素等。而502膠不含有上述成分，所以對(duì)PCR擴(kuò)增沒(méi)有顯著影響。四是本實(shí)驗(yàn)采用的是磁珠法提取DNA，所用磁珠對(duì)DNA特異性吸附，通過(guò)配套洗脫液再?gòu)拇胖橹嗅尫懦鰜?lái)，最終得到相對(duì)純度較高的DNA樣本，避免了502膠殘留成分對(duì)電泳測(cè)序的影響。

綜上所述，502熏顯過(guò)程并不會(huì)對(duì)指紋上DNA檢驗(yàn)造成影響，只是要做好物證保管工作，另外在熏顯過(guò)程中也要避免外源污染。