• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

      骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物研究進(jìn)展

      2018-12-21 03:03:50崔國寧劉喜平曾慶濤
      關(guān)鍵詞:干細(xì)胞陰性分子

      崔國寧,劉喜平,曾慶濤

      (甘肅中醫(yī)藥大學(xué),甘肅蘭州730000)

      骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)具有多向分化潛能[1],現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)通過提高外周血中的MSCs數(shù)量,可影響體內(nèi)微環(huán)境的改變而對損傷的炎癥組織有修復(fù)和重建作用[2-4]。但是,外周血骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞由于數(shù)量極少,很難檢測到[5]?,F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),應(yīng)用某些技術(shù)可通過檢測相應(yīng)的標(biāo)記物來確認(rèn)為MSCs,現(xiàn)將研究進(jìn)展綜述如下。

      1 MSCs標(biāo)記及相應(yīng)指標(biāo)

      堿性成纖維生長因子(bFGF)具有諸多生物學(xué)效能,是形成心血管的特異性促進(jìn)因子,可以調(diào)控MSCs增殖與定向的分化[6]。目前研究與MSCs相關(guān)的指標(biāo)有bFGF、SRY基因、生物素-鏈霉親和素、5-溴脫氧尿嘧啶核苷、CM-DiL、Hoechst33342、SRY基因、Y染色體及CK20雙陽性細(xì)胞的分布等??梢詷?biāo)記MSCs的技術(shù)有慢病毒載體介導(dǎo)的GFP轉(zhuǎn)染技術(shù)、DAPI標(biāo)記法等。

      王彥生等[7]用RT-PCR和ELASE法檢測MSCs的bFGF基因陽性表達(dá)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用病毒介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染技術(shù)能將外源性bFGF轉(zhuǎn)染至MSCs,并實現(xiàn)bFGF基因的表達(dá)。bFGF對創(chuàng)傷的修復(fù)具有明顯的促進(jìn)作用,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)可將bFGF基因成功轉(zhuǎn)染兔MSCs獲得穩(wěn)定表達(dá),通過流式檢測 CD90、CD44 陽性表達(dá),CD45 陰性表達(dá)[8],說明bFGF基因表達(dá)情況可作為MSCs功能的反映。有研究示利用生物素-鏈霉親和素進(jìn)行MSCs標(biāo)記,MSCs表達(dá) CD29、CD90,不表達(dá) CD34、CD45,運用這種方法進(jìn)行標(biāo)記,操作簡單,修改率高,有望提高 MSCs的歸巢率,具有重要的價值[9]。朱峰等[10]用5-溴脫氧尿嘧啶核苷在體外標(biāo)記MSCs,其標(biāo)記最佳濃度及時間分別為 40 μmol/L,72 h;用CM-DiL標(biāo)記MSCs,其不僅能成功標(biāo)記而且具有標(biāo)記穩(wěn)定、可靠、表達(dá)率高、簡便等優(yōu)點[11]。Hoechst33342也可用于大鼠MSCs標(biāo)記,其最佳濃度為5 mg/L,細(xì)胞表型鑒定CD45陰性表達(dá),CD44、CD90陽性表達(dá)[12]。對于MSCs在體內(nèi)示蹤研究,有研究采用慢病毒載體介導(dǎo)GFP轉(zhuǎn)染技術(shù)和應(yīng)用PCR檢測SRY 基因可追蹤移植的 MSCs[13]。

      通過觀察其他細(xì)胞因子的變化,也可反映MSCs的情況,如張夏夢等[14]研究示通過觀察結(jié)腸組織Y染色體、CK20雙陽性細(xì)胞的分布,可以反映MSCs的分布情況。通過DAPI標(biāo)記也可反映MSCs在體內(nèi)的分布,朱勇等[15]通過研究SD大鼠MSCs在體外培養(yǎng)的表型鑒定及標(biāo)記發(fā)現(xiàn),貼壁培養(yǎng)法可作為SD大鼠MSCs常規(guī)培養(yǎng)法,用DAPI進(jìn)行標(biāo)記后,熒光下所有的MSCs均見藍(lán)色熒光,其敏感性好,標(biāo)記率高。趙科研等[16]研究示DAPI可良好標(biāo)記MSCs細(xì)胞核,呈現(xiàn)藍(lán)色熒光,提示DAPI可作為MSCs示蹤劑。由此可看出,應(yīng)用于MSCs標(biāo)記的物質(zhì)很多(但沒有唯一的表面標(biāo)記物),通過監(jiān)測與其相關(guān)的基因的表達(dá)及其標(biāo)記物特征可反映MSCs在體內(nèi)的分布情況。

      2 與MSCs相關(guān)的CD分子表達(dá)

      CD分子作為MSCs表面標(biāo)記物已經(jīng)被基礎(chǔ)研究廣泛應(yīng)用,目前被大多數(shù)學(xué)者認(rèn)可的陽性表面標(biāo)記物為 CD44、CD90、CD29、CD105 等。有研究取3代細(xì)胞用流式細(xì)胞術(shù)檢測MSCs表面標(biāo)記物,CD34、CD44、CD45、CD90 陽性率分別為0.78%、99.38%、0.43%、98.78%[17]。李榮富等[18]用流式細(xì)胞術(shù)檢測MSCs細(xì)胞表面抗原的表達(dá)率,發(fā)現(xiàn)CD44和CD90表達(dá)率>98%,而CD45、CD34表達(dá)率<1%,符合MSCs表面抗原表達(dá)特征。王剛等[19]用細(xì)胞免疫組化檢測,發(fā)現(xiàn)P2代細(xì)胞表面分子CD44、FN表達(dá)為陽性(CD44、FN陽性率分別為92.09%、90.55%),而CD14、CD34為陰性。對于 CD34的檢測,張夏夢等[20]研究示MSCs組在連續(xù)切片后,在結(jié)腸組織可見到Y(jié)染色體、CD34雙陽性細(xì)胞,說明CD34作為MSCs表面標(biāo)記物是陽性表達(dá)。程斌等[21]通過改良法提取MSCs,流式檢測其表面標(biāo)記CD29、CD44陽性表達(dá)、CD45陰性表達(dá)即可鑒定為MSCs。李曉峰等[22]采用全骨髓貼壁法進(jìn)行MSCs培養(yǎng)及鑒定,取第3代MSCs進(jìn)行鑒定,發(fā)現(xiàn)CD90、CD105呈陽性表達(dá),CD34、CD45呈陰性表達(dá)。采用同樣的方法,曹華等[23]研究示其可獲得穩(wěn)定生長、增殖能力強的MSCs,MSCs表面的CD34呈陰性,CD44呈陽性表達(dá)??迪嫫嫉龋?4]研究發(fā)現(xiàn)全骨髓貼壁法可培養(yǎng)獲得高純度的MSCs,培養(yǎng)第3代MSCs表面表達(dá) CD90、CD29,不表達(dá) CD34、CD45。易敏等[25]通過對兔MSCs進(jìn)行分離培養(yǎng)及鑒定,發(fā)現(xiàn)骨髓貼壁法是一種簡便經(jīng)濟的培養(yǎng)方式,通過鑒定發(fā)現(xiàn)CD44高表達(dá),CD14、CD45低表達(dá)。宋珂等[26]對大鼠MSCs進(jìn)行分離培養(yǎng)與鑒定后檢測其內(nèi)源性因子的表達(dá),發(fā)現(xiàn)從P1代至P5代均有內(nèi)源性 bFGF、Shh、Cbfa1、ALP、OC 表達(dá),MSCs細(xì)胞表面表達(dá)CD29及CD90,不表達(dá)CD45。青瑩等[27]對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUCMSCs)進(jìn)行培養(yǎng)及鑒定發(fā)現(xiàn),第 3代 hUCMSCs表面 CD29、CD44、CD105、CD45、CD34表達(dá)率分別為 99.04%、98.8%、85.09%、0.19%、0.58%,通過檢測內(nèi)源性Hh信號通路中主要因子表達(dá),Shh水平相對較高。徐艷華等[28]發(fā)現(xiàn)MSCs生長迅速,呈均一的成纖維樣細(xì)胞,表達(dá) CD29、CD90、不表達(dá) CD45。

      另外,在腫瘤環(huán)境的影響下,MSCs表面標(biāo)記物并不是那么絕對,如CD166在正常胃黏膜、腺瘤及腺癌組織中存在表達(dá),CD271在正常胃黏膜、腺瘤及腺癌組織中幾乎不表達(dá),不能作為胃癌腫瘤細(xì)胞的特異性標(biāo)記[29]。而在結(jié)腸癌微環(huán)境與MSCs共培養(yǎng)的研究中發(fā)現(xiàn)其可誘導(dǎo)MSCs向結(jié)腸癌細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化,MSCs表面標(biāo)記物CD13、CD133表達(dá)率分別為 89.7%,90.5%[30]。

      由此可發(fā)現(xiàn)應(yīng)用CD分子的陽性表達(dá)來對MSCs標(biāo)記已經(jīng)取得重大成就,但是MSCs具有非單一性特點,具有多種表面標(biāo)志物,當(dāng)前尚沒有篩選出其獨特的MSCs表面標(biāo)志分子,以此來作為MSCs的專屬鑒定,這為MSCs之鑒定帶來一定阻力。另外,在腫瘤微環(huán)境干預(yù)下,研究發(fā)現(xiàn)CD166、CD271不能作為腫瘤細(xì)胞的特異性標(biāo)記。再者,當(dāng)前研究的MSCs表面CD分子中,CD34到底是陽性表達(dá)還是陰性表達(dá),尚存在爭議,有待基礎(chǔ)驗證。反映MSCs的表面標(biāo)記物、基因、CD分子等如表1所示。

      3 結(jié) 語

      MSCs是近年來研究的熱點,其在體內(nèi)向骨髓細(xì)胞、脂肪細(xì)胞及軟骨細(xì)胞等多方向分化,這為我們治療各種難治性疾病帶來了希望。正因為其具有多向分化性,所以到目前為止仍舊未篩選出其獨特的表面標(biāo)記物。當(dāng)前研究比較成熟的是MSCs內(nèi)基因表達(dá)的檢測以及MSCs表面分子的檢測,通過已知,可以幫助我們更好把握MSCs相關(guān)功能及其移植治療作用的發(fā)揮。

      表1 MSCs表面標(biāo)記物及反映MSCs的基因、CD分子

      近年隨著干細(xì)胞研究的不斷深入,干細(xì)胞逐漸被應(yīng)用于各種難治性疾病的治療。實驗中關(guān)于MSCs鑒定所采用最低標(biāo)準(zhǔn)是:標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)條件下,MSCs能夠貼壁成梭形生長;MSCs能表達(dá)CD90、CD44、CD29,不表達(dá) CD45、CD34、CD14 或者 CD79alpha、CD11b、HLA-DR 等[31]。本文總結(jié)了與MSCs有關(guān)的表面標(biāo)記物、反映MSCs的基因及目前廣泛應(yīng)用的CD分子標(biāo)記等,可幫助我們把握MSCs的相關(guān)功能。另外,慢病毒載體介導(dǎo)的GFP轉(zhuǎn)染技術(shù)、DAPI標(biāo)記等技術(shù)可以對MSCs進(jìn)行輔助標(biāo)記,以示蹤MSCs在體內(nèi)的分布情況,當(dāng)有熒光到達(dá)的地方,可能就是我們示蹤的MSCs。當(dāng)前研究為我們進(jìn)一步探討MSCs奠定了堅實基礎(chǔ),干細(xì)胞的深入研究為組織工程學(xué)中組織器官的修復(fù)、替代開辟了一條嶄新的治療思路,進(jìn)一步探求與MSCs密切相關(guān)的標(biāo)記物成為我們研究MSCs要解決的重點問題。

      猜你喜歡
      干細(xì)胞陰性分子
      干細(xì)胞:“小細(xì)胞”造就“大健康”
      分子的擴散
      造血干細(xì)胞移植與捐獻(xiàn)
      鉬靶X線假陰性乳腺癌的MRI特征
      “精日”分子到底是什么?
      新民周刊(2018年8期)2018-03-02 15:45:54
      米和米中的危險分子
      三陰性乳腺癌的臨床研究進(jìn)展
      干細(xì)胞產(chǎn)業(yè)的春天來了?
      臭氧分子如是說
      hrHPV陽性TCT陰性的婦女2年后隨訪研究
      湖北省| 衢州市| 腾冲县| 日照市| 大城县| 荆门市| 通江县| 长宁县| 万山特区| 建水县| 泊头市| 恩平市| 大关县| 章丘市| 奉节县| 元谋县| 永福县| 巨野县| 元朗区| 弥渡县| 鹿邑县| 西乌珠穆沁旗| 栾城县| 南雄市| 巴彦县| 陆良县| 海原县| 蒙山县| 新绛县| 阿拉善右旗| 九龙县| 昭通市| 荃湾区| 河池市| 牡丹江市| 布拖县| 云霄县| 定远县| 察雅县| 瑞安市| 红原县|