潘春燕

浙江省金華市中心醫(yī)院 浙江 金華 321000

麻杏石甘湯出自漢代張仲景的《傷寒論》，由麻黃、杏仁、石膏、炙甘草四味藥組成，功可辛涼宣泄，清肺平喘[1]。對(duì)于麻杏石甘湯提取工藝的研究，文獻(xiàn)報(bào)道大多只考慮不同提取方法之間的差異，中藥的提取過(guò)程是一個(gè)從植物細(xì)胞液到溶液的優(yōu)化擴(kuò)散過(guò)程，是有效成分濃度不斷優(yōu)化變化的過(guò)程。期間可能發(fā)生多種物理、化學(xué)變化，根據(jù)物質(zhì)溶出原理，溶質(zhì)從高濃度向低濃度的擴(kuò)散，當(dāng)溶質(zhì)在兩種溶劑中濃度趨于平衡時(shí)，溶液中濃度不再變化，即溶劑中有效成分達(dá)到最大的濃度。有效成分達(dá)到優(yōu)化平衡時(shí)的提取時(shí)間通常為最優(yōu)提取時(shí)間。本研究通過(guò)實(shí)時(shí)測(cè)定麻杏石甘湯提取過(guò)程中提取液有效成分含量的優(yōu)化變化規(guī)律，確定提取時(shí)間；通過(guò)稱定每次提取浸膏得率和總成分含量，確定提取次數(shù)，與傳統(tǒng)工藝相比，一定程度上縮短了提取時(shí)間，節(jié)約了成本[2]。

1 材料

1.1 儀器：HPLC色譜儀（LC-20AT，日本島津公司），美地亞超聲清洗器（MP-1120C，南昌普惠實(shí)驗(yàn)儀器有限公司），賽多利斯電子天平（BT-120，德國(guó)賽多利斯實(shí)驗(yàn)室），加熱套（北京市貝斯特實(shí)驗(yàn)儀器有限公司），離心機(jī)（AT-25D，天津津美實(shí)驗(yàn)儀器廠）。

1.2 試藥：鹽酸麻黃堿對(duì)照品（批號(hào)：171242-200404）、鹽酸偽麻黃堿（批號(hào)：171237-201510）、苦杏仁苷（批號(hào)：110820-201607）、甘草苷（批號(hào)：111610-201607）、甘草酸銨（批號(hào)：110731-201619），均由金華市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院提供，供含量測(cè)定用。生麻黃、生石膏、炙甘草飲片購(gòu)于浙江景岳堂中藥飲片廠。甲醇、乙腈為色譜純（Fisher公司），高氯酸、硝酸分別為分析純；優(yōu)級(jí)純，氨水、乙醚、磷酸為分析純（均購(gòu)自天津化學(xué)試劑有限公司），水為超純水（杭州娃哈哈有限公司）。

2 方法

2.1 色譜條件：參考文獻(xiàn)報(bào)道色譜條件，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸（5:95），檢測(cè)波長(zhǎng)207nm，柱溫為35℃；體積流1ml/min。

2.2 提取方法：分述如下。

2.2.1 傳統(tǒng)工藝：稱取麻黃、苦杏仁、甘草各28g，石膏112g，加水1568ml，文火提取，待沸騰后，繼續(xù)提取60min，紗布濾過(guò)，再次加水1568ml，提取60min，共提取3次，合并提取液，即得[3]。

2.2.2 優(yōu)化工藝：稱取麻黃、苦杏仁、甘草各28g，石膏112g，加水1568ml，文火提取，待沸騰后，繼續(xù)提取60min，紗布濾過(guò)，再次加水 1568ml，提取 60min，每10min取樣測(cè)定鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸含量[4]。各有效成分含量均趨于平衡時(shí)的提取時(shí)間設(shè)為優(yōu)化工藝的提取時(shí)間，把浸膏重能達(dá)到90%以上時(shí)的提取次數(shù)作為優(yōu)化工藝的提取次數(shù)。確定提取時(shí)間與次數(shù)，作為優(yōu)化工藝。取相同重量飲片，按照優(yōu)化后工藝提取。合并提取液，即得[5]。

2.3 對(duì)照品溶液制備：精密稱取麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品適量，加甲醇，分別制成每1ml含0.0510mg麻黃堿、0.0454mg偽麻黃堿的溶液。精密稱取苦杏仁苷對(duì)照品適量，甲醇配制為每1ml含0.0431mg苦杏仁苷的溶液。稱取甘草苷、甘草酸對(duì)照品適量，加70%乙醇制成每1ml含0.02032mg甘草苷、0.0844mg甘草酸對(duì)照品溶液（甘草酸對(duì)照品質(zhì)量濃度=甘草酸銨對(duì)照品質(zhì)量濃度/1.0207）。

2.4 供試品制備：分述如下。

2.4.1 供試品溶液的制備：精密量取麻杏石甘湯10ml，置50ml量瓶中，加甲醇35ml，超聲30min，放冷后，用甲醇定容至刻度，以0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得[6]。

2.4.2 浸膏制備：將傳統(tǒng)工藝、優(yōu)化工藝的2次提取藥液分別合并，各精密量取50ml，置恒重后蒸發(fā)皿，水浴蒸干，置105℃烘箱中3小時(shí)，放置常溫后稱重[7]。

2.4.3 樣品測(cè)定：精密吸取樣品10μl，注入高效液相色譜儀，按照2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定含量。

3 結(jié)果

3.1 優(yōu)化工藝提取次數(shù)確定：浸膏重第1次7.3215g，第2次3.0142g，第3次0.6845g，前2次浸膏重占3次總重的93.8%，確定優(yōu)化工藝提取次數(shù)為2次。

3.2 各樣品溶液中指標(biāo)成分的含量：見(jiàn)表1。

表1 前2次提取各時(shí)間點(diǎn)指標(biāo)成分的含量（mg/ml）

3.3 前2次提取液各有效成分含量時(shí)間變化曲線：見(jiàn)圖1、圖2。隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，各有效成分含量的變化率越來(lái)越小，分別在50min、40min時(shí)趨于穩(wěn)定。

圖1 第1次提取液各有效成分隨時(shí)間變化曲線

圖2 第2次提取液各有效成分隨時(shí)間變化曲線

3.4 兩種工藝提取液中指標(biāo)成分的含量比較：見(jiàn)表2。優(yōu)化工藝提取的麻杏石甘湯各有效成分含量與傳統(tǒng)工藝對(duì)比，相對(duì)偏差均小于5%。

表2 兩種工藝提取液中指標(biāo)成分的含量（mg/ml）

4 討論

本方法通過(guò)考察提取過(guò)程中不同時(shí)間麻杏石甘湯有效成分的含量，實(shí)時(shí)反映提取液中有效成分變化，得出提取過(guò)程中有效成分實(shí)時(shí)變化規(guī)律。對(duì)比優(yōu)化工藝與傳統(tǒng)工藝，在保證有效成分含量提取率的前提下，縮短提取時(shí)間，節(jié)約能源。在確定提取時(shí)間時(shí)，由于藥材中指標(biāo)成分溶出規(guī)律不一致，所以有效成分濃度-時(shí)間曲線到達(dá)平臺(tái)期時(shí)間不同。中藥提取時(shí)間是影響其湯液中有效成份溶出的重要因素之一，提取時(shí)間過(guò)短會(huì)使許多有效成分未能從藥材中溶出，從而造成藥材資源的浪費(fèi)；提取時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致其中揮發(fā)性成分及熱不穩(wěn)定成分的含量降低，且會(huì)造成能源的浪費(fèi)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，優(yōu)化提取工藝部分有效成分濃度略高于傳統(tǒng)提取工藝，原因可能是提取時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致其中揮發(fā)性成分及熱不穩(wěn)定成分的含量降低。本方法特別適合考察揮發(fā)性的成分、熱不穩(wěn)定成分、毒性成分以及在提取過(guò)程中產(chǎn)生新的有效成分優(yōu)化變化規(guī)律，實(shí)時(shí)反映這些有效成分隨時(shí)間的變化，能夠很好地確定其最佳提取時(shí)間。