于汪營，楊靜，安晨

（河南省平頂山市第二人民醫(yī)院 病理科，河南 平頂山 467000）

關(guān)鍵字：增生性腎小球腎炎；病理；CD10；CD34；免疫組化；雙染色

臨床區(qū)分診斷腎臟疾病病理類型和變化常用方式為腎活檢病理檢查[1]，腎臟疾病中種類最多的為腎小球疾病，原發(fā)性腎小球中發(fā)病率最多的為增生性腎小球腎炎，臨床多依據(jù)細(xì)胞、基質(zhì)彌漫性增生病理改變評(píng)定病理類型，包含新月體性腎小球腎炎、膜增生性腎小球腎炎、毛細(xì)血管內(nèi)增生性腎小球腎炎等。腎活檢病理檢查包含馬松（Masson）染色、過碘酸六胺銀染色（periodic acid-silver metheramine,PASM）、過碘酸雪夫（periodic acid-Schiff,PAS）染色、蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin,HE）染色等，Masson染色可反映出纖維蛋白、免疫復(fù)合物、III型膠原、基膜等，PASM染色比PAS更為精細(xì)，PAS染色可反映出系膜基質(zhì)和基膜，臨床可從基膜輪廓分辨細(xì)胞種類，HE染色可反映出細(xì)胞數(shù)量和種類。臨床醫(yī)生在進(jìn)行病理診斷時(shí)主要依據(jù)以上敘述染色檢查的基膜輪廓狀況評(píng)估細(xì)胞種類[2]，但基膜輪廓不清晰時(shí)，則評(píng)估此類固有細(xì)胞確保其客觀性具有一定難度。為此，本研究納入本院2016年4月-2018年2月期間收治的腎疾病患者116例，根據(jù)疾病分組重點(diǎn)討論CD10和CD34免疫組化雙染色診斷增生性腎小球腎炎的病理類型和病理變化的準(zhǔn)確性，具體報(bào)告如下。

1 資料及方法

1.1 一般資料

隨機(jī)從本院2016年4月-2018年2月期間收治的腎疾病患者116例進(jìn)行討論，根據(jù)患者疾病分組，對照組中共35例腎小球微小病變患者，男19例，女16例；年齡46～71歲，平均（60.5±1.3）歲。研究組（81例）中包含新月體性腎小球腎炎21例、膜增生性腎小球腎炎25例、毛細(xì)血管內(nèi)增生性腎小球腎炎12例、系膜增生性腎小球腎炎23例；81例患者中包含男42例，女39例；年齡47～69歲，平均為（60.9±1.2）歲。研究方案經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后實(shí)施，且患者與其家屬均自愿接受此次檢查。比較兩組研究對象性別比、年齡資料無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

兩組患者均接受免疫組化雙染色法腎活檢，標(biāo)記CD10和CD34。由漳州武德公司提供親水性防脫載玻片（U-004）、羅氏全自動(dòng)免疫組化染色儀、CD34（羅氏試劑）、CD10（羅氏試劑）。

將腎活檢組織，做切片，厚2 μm[3]，貼在防脫載玻片上，并在65℃環(huán)境下烘2 h。用全自動(dòng)免疫組化染色儀做免疫組化雙染色檢查，99℃環(huán)境下做抗原修復(fù)0.5 h，37℃環(huán)境下，CD10、CD34孵育15 min[4]。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

參考對照組檢測狀況，毛細(xì)血管基膜呈棕色外包紅色，毛細(xì)血管基膜顯色清晰，且血管管腔正常；腎小球系膜基質(zhì)和細(xì)胞CD10、CD34均呈（-），顏色為無色；腎小囊壁層上皮細(xì)胞CD10（+），臟層上皮細(xì)胞CD10為（++），顏色為紅色；腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞CD34（++），顏色為棕色。研究組接受光鏡檢查腎小球固有細(xì)胞顯色，并評(píng)估腎小球細(xì)胞增生狀況。

2 結(jié)果

2.1 腎小球內(nèi)CD10、CD34表達(dá)

系膜基質(zhì)和細(xì)胞CD10、CD34均為（-），顏色為無色；壁層和臟層上皮細(xì)胞CD10（+-+++），顏色為紅色；毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞CD34（+-+++），顏色為棕色。各細(xì)胞均給予核蘇木精染色處理，顏色為藍(lán)色，各組織定位準(zhǔn)確，顯色清楚。

2.2 腎小球微小病變

系膜基質(zhì)和細(xì)胞CD10、CD34均表現(xiàn)為（-），顏色為無色；毛細(xì)血管基膜呈棕色外包紅色；腎小囊壁層上皮CD10為（+），顏色為紅色，臟層上皮CD10為（++），顏色為紅色；毛細(xì)血管內(nèi)皮CD34表現(xiàn)為（++），顏色為棕色。此3種細(xì)胞均表現(xiàn)為輕度增生，毛細(xì)血管管腔基本正常，基膜顯色明顯。對照組患者CD10和CD34免疫組化雙染色檢查結(jié)果滿足病理判定結(jié)果。

2.3 系膜增生性腎小球腎炎

腎小球系膜基質(zhì)和細(xì)胞CD10、CD34表現(xiàn)為（-），無色；腎小囊上皮細(xì)胞，壁層CD10（-）、臟層CD10（+++），紅色；毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞CD34（+），顏色為棕色。腎小球基質(zhì)和系膜細(xì)胞增生明顯，腎小球毛細(xì)血管腔出現(xiàn)擠壓癥狀，腎小囊臟層上皮細(xì)胞增生明顯。系膜增生性腎小球腎炎23例患者檢測CD10和CD34滿足病理診斷。

2.4 毛細(xì)血管內(nèi)增生性腎小球腎炎

腎小球系膜基質(zhì)和細(xì)胞CD10、CD34表現(xiàn)為（-），顏色為無色；腎小囊上皮細(xì)胞，壁層CD10表現(xiàn)為（+++），顏色為紅色，臟層CD10（+++），顏色為紅色；腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮CD34（+++），顏色為棕色。3種細(xì)胞均呈增生狀態(tài)，毛細(xì)血管管腔出現(xiàn)擠壓癥狀。毛細(xì)血管內(nèi)增生性腎小球腎炎患者CD10、CD34檢測結(jié)果與病理診斷相符。

2.5 膜增生性腎小球腎炎

腎小球系膜基質(zhì)和細(xì)胞CD10、CD34表現(xiàn)為（-），顏色為無色；腎小囊上皮細(xì)胞，壁層CD10表現(xiàn)為（+++），顏色為紅色，臟層CD10（+++），顏色為紅色；腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮CD34（+++），顏色為棕色。腎小球系膜基質(zhì)和細(xì)胞呈顯著增生狀，毛細(xì)血管基膜中存在系膜基質(zhì)，腎小囊臟層上皮細(xì)胞增生突出，擠壓血管管腔。膜增生性腎小球腎炎患者CD10、CD34檢測結(jié)果與病理結(jié)果相符。

3 討論

本研究中所納入的腎小球疾病者接受CD10、CD34免疫組化雙染色檢查后，定位準(zhǔn)確，顯色清晰。提示CD10、CD34免疫組化雙染色特征可靠性高、準(zhǔn)確性高、特異性高，且檢查結(jié)果均滿足病理類型和病理變化的判定，說明CD10和CD34免疫組化雙染色可將腎小球增生程度和固有細(xì)胞準(zhǔn)確顯示，并顯示腎小球毛細(xì)血管基膜和管腔狀況，以及病變程度[5]。

以往所采用的HE染色無法客觀判定腎小囊壁層、臟層上皮細(xì)胞和腎小球系膜細(xì)胞、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞，Masson、PASM、PAS等染色均無法將此類固有細(xì)胞顯示出。醫(yī)生通過病理診斷分析以上染色狀況，根據(jù)分析基膜輪廓區(qū)分固有細(xì)胞種類，若難以區(qū)分基膜輪廓?jiǎng)t無法更為客觀地判定固有細(xì)胞種類[6]。CD34多在血管內(nèi)皮細(xì)胞部位標(biāo)記，內(nèi)皮細(xì)胞呈陽性癥狀。足細(xì)胞在新月體部位時(shí)，經(jīng)常獲得新抗原和失去CD10標(biāo)記[7]。所以，標(biāo)記新月體CD10，結(jié)果為陰性或弱陽性。CD10、CD34不標(biāo)記腎小球系膜細(xì)胞[8]。腎活檢切片時(shí)用免疫組化雙染色法標(biāo)記CD10、CD34，讓腎小囊壁層及臟層上皮細(xì)胞和毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞顯示為紅色、棕色，而腎小球系膜則非棕色、紅色，進(jìn)而可特異、客觀地鑒別固有細(xì)胞[9]。所以，在Masson染色、PASM染色、PAS染色、HE染色等腎活檢病理檢查聯(lián)合CD10、CD34免疫組化雙染色，可準(zhǔn)確地診斷增生性腎炎病理類型和病理改變[10]。CD10、CD34在診斷腎小球疾病中有較大診斷意義，臨床可根據(jù)實(shí)際狀況選擇診斷方式。

綜上所述，腎活檢病理光鏡檢查包含Masson、PASM、PAS、HE等染色，聯(lián)合CD10、CD34免疫組化雙染色，有利于提升增生性腎小球腎炎病理類型和病理變化的診斷準(zhǔn)確性，值得推廣。