幾種常見(jiàn)動(dòng)物疫病的化驗(yàn)室診斷

頓巴依爾

（新疆阿勒泰市畜牧獸醫(yī)站 836500）

1 針對(duì)黃疸和黃脂肉的診斷

把需要檢驗(yàn)的脂肪取出數(shù)克，剪碎待檢物后，要把它們放到試管里，隨后取出5ml，濃度為5%的氫氧化鈉溶液，把取出溶液加入預(yù)先準(zhǔn)備出來(lái)的試管里，振蕩裝有溶液的試管，將其煮沸1min，使用流水對(duì)其進(jìn)行冷卻，稱取相同質(zhì)量乙醚加入其中，混入后進(jìn)行充分振蕩，隨后在常溫條件把試管溶液靜置一會(huì)，如果發(fā)現(xiàn)上層乙醚里面融入了胡蘿卜素，并呈現(xiàn)黃顏色便可以把這種疫病判斷成黃脂。如果經(jīng)過(guò)膽汁色素形成出來(lái)的氫氧化鈉呈現(xiàn)黃顏色能把疫病類型判斷為黃疸。上下層如果呈現(xiàn)黃色可以認(rèn)為所診斷的疫病是黃脂和黃疸同時(shí)存在。

2 實(shí)驗(yàn)室針對(duì)羊丹毒的診斷方法

如果實(shí)驗(yàn)室檢查敗血型羊丹毒的話，檢查材料可以使用病豬的心血和肝腎等器官。如果要診斷的疫病類型是疹塊型羊丹毒可以選擇發(fā)生病變疹塊周邊的皮膚。如果診斷是慢性型羊丹毒可以使用出現(xiàn)腫脹問(wèn)題關(guān)節(jié)和心內(nèi)膜位置的增生物加以檢查。

2.1 涂片鏡檢的方法

使用瑞氏染色法、吉姆薩染色法及革蘭氏染色等幾種方法對(duì)組織抹片進(jìn)行染色。鏡檢發(fā)現(xiàn)那些細(xì)小的桿菌，菌體呈現(xiàn)直狀還是彎曲狀態(tài)，存在的方式是成對(duì)、單個(gè)的方式還是成叢的方式。尤其是針對(duì)白細(xì)胞之中的菌體及白細(xì)胞周圍成叢存在的菌體檢測(cè)期間，診斷意義更加明顯。應(yīng)用脾腎抹片檢測(cè)菌體檢出率比較理想。

2.2 分離培養(yǎng)的方法

如果所選的是較為新鮮病理材料，能直接接種到培養(yǎng)基上面。放到37℃左右的溫度條件中持續(xù)1～2d 的時(shí)間。這個(gè)培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)較小，且呈現(xiàn)透明狀態(tài)的形似露滴狀的菌落。而在普通培養(yǎng)基上，菌落的生長(zhǎng)狀態(tài)卻都比較比較貧瘠。肉湯呈現(xiàn)出一種輕度渾濁的狀態(tài)，會(huì)有一些白顏色，較為黏稠的沉淀出現(xiàn)，明膠不會(huì)出現(xiàn)液化，聲場(chǎng)期間呈現(xiàn)為試管狀。

2.3 對(duì)于動(dòng)物的接種

把疹塊和生理鹽水按照1：10 的比例制成組織懸液。也可以選擇小白鼠或鴿子制成肉湯培養(yǎng)物。取出0.5～1ml 的組織懸液注射到鴿子體內(nèi)，如果注射對(duì)象是小白鼠，注射劑量需要控制為0.2ml。隨后取出0.5 和0.1ml 的菌液，分別向鴿子和小白鼠體內(nèi)注射。發(fā)現(xiàn)接種后3～4h 出現(xiàn)死亡。隨后制作圖片，采用已經(jīng)死亡動(dòng)物的臟器或心血作為材料，之后再進(jìn)行鏡檢。如果疫病為典型的羊丹毒桿菌能確診出來(lái)。

3 實(shí)驗(yàn)室針對(duì)羊瘟的診斷方法

3.1 對(duì)于監(jiān)測(cè)樣品的采集

使用的是瀕臨死亡或已經(jīng)死亡以及屠宰死亡的羊的新鮮扁桃體和腎臟，把每個(gè)樣品都放入到對(duì)應(yīng)的滅菌容器里。

3.2 監(jiān)測(cè)方法選擇

選擇直接熒光抗體方法進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

3.3 對(duì)于冰凍切片的制作

切片制作期間選擇新鮮的腎臟組織塊，和一些比較新鮮的扁桃體，制作過(guò)程可以適當(dāng)應(yīng)用冰凍切片機(jī)，把冰凍組織片的厚度制成5～7μm，隨后將其放置在清潔的載玻片上，置于空氣中自然干燥，于室溫條件下向其中放入純丙酮，15min 后將其取出，輕輕地漂洗幾次，自然干燥后等待染色。

3.4 關(guān)于染色方法的應(yīng)用

取出2～3 滴，應(yīng)用熒光標(biāo)記的羊瘟抗體，把它覆蓋到固定組織切片上，隨后在有一定濕度的小盒里面進(jìn)行放置，于37℃的條件下作用30min，這樣能讓熒光抗體更好吸收。一定要保證染色期間不會(huì)出現(xiàn)染色液干涸問(wèn)題，完成染色后使用PBS 液把切片浸洗3 次，還要進(jìn)行3 次換水，每次都要分種。將切片取出后放入到室溫下，等達(dá)到半干狀態(tài)后使用緩沖甘油封片，立刻實(shí)施鏡檢。

3.5 結(jié)果判定

熒光顯微鏡下檢查切片，如果被檢切片顯現(xiàn)腎曲小管或扁桃體隱窩有上皮細(xì)胞胞漿存在，并且呈現(xiàn)出來(lái)的狀態(tài)是明亮的翠綠色熒光。檢查時(shí)候如果能把細(xì)胞形態(tài)清晰發(fā)現(xiàn)出來(lái)[1]，我們就能認(rèn)為屬于一種陽(yáng)性反應(yīng)。如果熒光較為微弱，細(xì)胞形態(tài)不清或者沒(méi)有熒光便可以將反應(yīng)定性為陰性。

4 實(shí)驗(yàn)室對(duì)旋毛蟲(chóng)診斷的方法

4.1 采樣概述

取肉尸中20g 處在左右位置的橫膈肌角的肉樣。放到化驗(yàn)室里面和肉尸編上相同號(hào)碼儲(chǔ)存器皿進(jìn)行檢查。

4.2 使用肉眼觀察

針對(duì)送來(lái)診斷的肉樣，首先應(yīng)用肉眼進(jìn)行詳細(xì)觀察，如果觀察發(fā)現(xiàn)肌腳近腱部位或肌膜下方存在顏色呈灰白色或淡白色，狀態(tài)位微塵狀小點(diǎn)的話，我們便可以認(rèn)定送檢肉樣可能發(fā)生了疫病，取發(fā)生病變部位支撐切片，實(shí)施鏡檢。

4.3 鏡檢

顯微鏡所選的是低倍，這種顯微鏡最大放大倍數(shù)為50～70倍。除此還可以把肉樣放到旋毛蟲(chóng)檢驗(yàn)器上，針對(duì)壓片加以觀察，壓片從一端第一個(gè)開(kāi)始按順序觀察，一定要保證，壓片的所有位置都會(huì)被觀察到。

5 結(jié)束語(yǔ)

動(dòng)物疫病一旦出現(xiàn)很有可能造成動(dòng)物養(yǎng)殖企業(yè)經(jīng)濟(jì)效益受到損害，甚至可能使人們使用食品期間的安全遭到影響。實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)對(duì)不同疫病類型所能使用的檢驗(yàn)方法也都存有一定差異。本文主要選擇了幾種容易出現(xiàn)在動(dòng)物身上的疫病，概述化驗(yàn)室診斷的具體方法。希望能為動(dòng)物疫病檢疫工作的開(kāi)展提供一些經(jīng)驗(yàn)上的參考。