韓風(fēng)波 畢博 宮敬利 張國峰

【摘? ?要】 通過查閱資料及前期試驗(yàn)，選取對槲蕨總黃酮超聲波提取影響比較大的3個因素料液比、提取功率、提取劑濃度進(jìn)行正交試驗(yàn)，結(jié)果表明：槲蕨總黃酮超聲波提取工藝最佳生產(chǎn)方案為：料液比為1：30，超聲功率480W，溶劑濃度為65%乙醇，此時，槲蕨黃酮含量最高，黃酮的提取率為0.7961%。

【關(guān)鍵詞】 總黃酮;槲蕨;提取工藝;優(yōu)化

[Abstract] Through access to information and early experiment， the selection of more influence ultrasonic extraction of total flavonoids of dl-tetrahydropalmatine fern three factors of material liquid ratio， extraction， concentration of extractant power orthogonal experiment was carried out， the results show that total flavonoids of dl-tetrahydropalmatine fern ultrasonic extraction technology： for best production material liquid ratio of 1：30， ultrasonic power 480 w， 65% ethanol solvent concentration， at this point， it fern flavonoids content is the highest， flavonoids extraction yield of 0.7961%.

[Keywords] total flavonoids; antioxidant ferns; extraction process; optimize

槲蕨，骨碎補(bǔ)科骨碎補(bǔ)屬，又名爬巖姜、肉碎補(bǔ)、石碎補(bǔ)、飛天鼠、骨碎補(bǔ)等，該植物體輕、質(zhì)脆、易折斷，斷面紅棕色，維管束呈黃色點(diǎn)狀，排列成環(huán)，無臭，味淡，微澀，其活性成分為以柚皮苷為主的二氫黃酮類化合物。超聲波提取技術(shù)具有利用設(shè)計好的功率震動，使溶質(zhì)分子自由擴(kuò)散，大大減少了提取所需時間的功效，另外提出率和原料的利用率也被大幅度提升，超聲波獨(dú)具的物理特性能促使植物細(xì)胞組織破壁或變形，使中藥有效成分提取更充分。該試驗(yàn)通過查閱資料及前期試驗(yàn)，選取對槲蕨總黃酮超聲波提取影響比較大的3個因素：提取溶劑乙醇濃度、料液比、超聲功率[1-2]，進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計，按照試驗(yàn)設(shè)計提取得到樣品液，在490nm波長下測量吸光度，最后根據(jù)回歸方程計算出供試品溶液中槲蕨總黃酮的濃度，計算總黃酮含量，以對槲蕨總黃酮超聲波提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。

1? 材料與方法

1.1? 試驗(yàn)材料

槲蕨，市售，由吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院中藥學(xué)院張忠寶教授鑒定;無水乙醇（分析純）、蒸餾水、5%亞硝酸鈉、10%硝酸鋁、4%氫氧化鈉、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，由中國藥品生物制品檢定所提供;電子分析天平（CP114 奧豪斯儀器有限公司上海）、JY2002電子天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）、752 紫外-可見分光光度計（上海奧普勒儀器有限公司）、 F80型高速粉碎機(jī)（金壇市金城國勝實(shí)驗(yàn)儀器廠）、THC-5B型數(shù)控超聲提取機(jī)（濟(jì)寧天華超聲電子儀器有限公司），由吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院中藥實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2? 試驗(yàn)方法

1.2.1 總黃酮含量測定方法? 取供試品2mL置10mL容量瓶中，加入3mL 50%的乙醇，再加入5%亞硝酸鈉0.3mL，搖勻，靜置6min，加入10%硝酸鋁0.3mL，搖勻，靜置6min，加入4%氫氧化鈉4mL，以50%乙醇定容，搖勻，靜置15min，取出，在490nm測定吸光度，將測出的吸光度代入回歸方程計算，可得樣品液中黃酮的濃度，再經(jīng)計算得出樣品中黃酮的含量[3]，計算公式如下：黃酮含量=C·V1·V2/V3·M，式中：C為標(biāo)準(zhǔn)曲線中黃酮的濃度mg/mL;V1為稀釋的體積;V2為樣品溶液的體積;M為樣品質(zhì)量;V3為取樣體積。

1.2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計方案? ?選取提取溶劑乙醇濃度、料液比、超聲功率3個因素，每個因素選取3個水平，選用L9（34）正交表進(jìn)行試驗(yàn)[4-5]，如表1。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 總黃酮提取條件的正交試驗(yàn)結(jié)果

依正交試驗(yàn)設(shè)計，按照L9（34）正交試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)，按照正交表方案依次進(jìn)行提取，制得供試品溶液，按照黃酮含量測定方法進(jìn)行檢測，試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2表明：比較各因素的極差可知R2最大，R1最小，故因素B對試驗(yàn)結(jié)果影響最大，再比較各個因素不同水平的綜合平均值。確定最佳試驗(yàn)方案為A2B3C3。即提取溶劑濃度為65%，料液比為1：30，超聲功率為480W。

2.2? 正交試驗(yàn)方差分析

針對表2總黃酮提取條件的正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，分析結(jié)果如表3。

表3表明：因素A、B、C對黃酮提取影響均存在顯著性差異，結(jié)合各個因素不同水平綜合平均值比較，確定最佳生產(chǎn)方案的條件為A2B3C3，即即提取溶劑濃度為65%，料液比為1：30，超聲功率為480W。此時，槲蕨黃酮含量最高。

2.3? 最佳工藝驗(yàn)證

在最優(yōu)條件下進(jìn)行9次試驗(yàn)，提取槲蕨黃酮，計算黃酮含量，結(jié)果見表4。

表4表明：在最優(yōu)工藝條件下提取的9份槲蕨黃酮樣品，黃酮樣品中平均黃酮含量為79.605mg/g，黃酮的提取率0.7961%，RSD=1.24%<2% （RSD（%）=標(biāo)準(zhǔn)偏差SD/平均值*100%），表明利用優(yōu)化的提取工藝所制備的樣品含量高，黃酮含量穩(wěn)定。

3? 結(jié)論

通過料液比、提取功率、提取劑濃度3個因素進(jìn)行正交試驗(yàn)，結(jié)果表明：料液比，超聲功率和提取劑濃度對黃酮提取影響均存在顯著性差異。結(jié)合各個因素不同水平綜合平均值比較，確定最佳生產(chǎn)方案是超聲功率480W，料液比為1：30，溶劑濃度為65%乙醇，此時，槲蕨黃酮含量最高為79.605mg/g，黃酮的提取率為0.7961%。

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