呂其凡

（丹東市婦女兒童醫(yī)院，遼寧 丹東 118000）

隨著臨床醫(yī)療技術(shù)水平的提高，抗菌藥物廣泛應(yīng)用，耐藥性明顯增加，為了保證用藥安全性，國家相關(guān)部門加強了對抗菌藥物的管理以及微生物檢驗工作的重視[1]。微生物送檢標本質(zhì)量好壞以及病原菌能否被準確檢出，直接影響藥敏試驗準確性。因此研究一種有效篩查送檢前不合格送檢標本、提高病原菌檢出準確率方法，是檢驗科研究主要方向。本次研究中，分析涂片鏡檢用于微生物標本送檢前培養(yǎng)的臨床價值，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取我院送檢的微生物標本400份，其中分泌物標本240份、尿液標本80份、痰液標本30份、其他標本50份。

1.2 試劑及儀器：應(yīng)用試劑為快速革蘭染色液，檢測儀器為微生物鑒定儀器以及配套鑒定板條。

1.3 方法：無菌標簽蘸取適量膿液、痰液、分泌物標本，上述標本制做薄片。尿液以及胸腹水處理方法：取新鮮標本5～10 mL，置于無菌試管中，取沉渣制備涂片，涂片風(fēng)干后，經(jīng)革蘭染色處理，并進行鏡檢。標本合格標準以及陽性判斷標準，痰標準：鏡檢顯示外觀膿性，或檢查顯示血性存在，低倍鏡下視野標準顯示鱗狀上皮細胞少于10個，白細胞超過25個，部分白細胞少于25個，但有顯著的染色以及的形態(tài)特征，需進行培養(yǎng)，并跟蹤檢驗結(jié)果；膿液、分泌物以及胸腹水標本：保持無菌狀態(tài)，收集檢驗，鏡檢涂片顯示鱗狀上皮細胞標本曾有污染，需重現(xiàn)選取標本；尿標本：至少選擇10個油鏡視野，且視野中存在細菌，并注意觀察細菌，區(qū)分不同種類，若檢查細菌種類超過3種，則判斷標本不合格，已被污染，需重新制取。涂片與培養(yǎng)結(jié)果符合：培養(yǎng)結(jié)果檢出致病菌，與鏡檢顯示疑似病原菌，基本相符，區(qū)分致病菌與污染菌，經(jīng)鏡下查看細菌或真菌情況。

1.3.3 培養(yǎng)及鑒定：痰液標本接種不同平面上，經(jīng)24～48 h孵育；胸腹水標本接種于麥康凱平板、肉湯增菌及血平板上，放于恒溫箱中，溫度控制為（35±2）℃中，孵育24～48 h；膿液、尿液以及分泌物接種在麥康凱平板、血平板上。觀察優(yōu)勢致病菌或純培養(yǎng)菌，并取菌落經(jīng)革蘭染色、分離以及微生物檢定儀鑒定。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析：本次研究數(shù)據(jù)以SPSS19.0軟件分析，計數(shù)資料用百分率表示，獨立樣本用χ2檢驗，P＜0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 篩查不合格標本：依據(jù)標本合格判斷標準：400份送檢標本中不合格19份（痰液標本6份、尿液標本13份）。痰液培養(yǎng)陽性8份，其中肺炎克雷伯菌、白念珠菌、銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌、溶血葡萄球菌、其他分別為2、2、1、1、1、1份；尿液培養(yǎng)陽性52份，屎腸球菌、產(chǎn)氣腸桿菌、惡臭假單胞菌、大腸埃希菌、白念珠菌則分別為28、6、6、6、6份；分泌物培養(yǎng)陽性33份，大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、白念珠菌、肺炎鏈球菌、其他則分別為20、4、3、3、1、1、1份；其他培養(yǎng)陽性10份，大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、木糖葡萄球菌、液化沙雷菌、金黃色葡萄球菌則分別為5、2、1、1、1份。

2.2 涂片鏡檢與培養(yǎng)陽性符合率對比：381份合格標本中檢出致病菌103株，其中痰液標本8株，尿液標本52株，分泌物標本33株，其他10株。合格標本中，痰液、尿液、分泌物及其他標本鏡檢陽性率分別為62.5%（5/8）、76.9%（40/52）、87.9%（29/33）、80.0%（8/10），鏡檢結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果基本無差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討 論

臨床中涂片鏡檢是通過將送檢標本制作薄片，進行革蘭染色，顯微鏡下觀察微生物形態(tài)，具有早期診斷、鑒別細菌、判斷標本合格與否、鑒定細菌的作用[2-3]。通過送檢前鏡檢，不僅可以用于檢驗標本質(zhì)量，還可用于指導(dǎo)臨床醫(yī)師用藥治療。

本次研究中，總結(jié)400份送檢標本中，送檢前鏡檢結(jié)果顯示不合格19例，其中鏡檢顯示6例為痰標本，鏡檢分析為鱗狀上皮細胞檢出超過25個低倍視野，白細胞水平低于10個低倍視野，判定結(jié)果為唾液；52例為尿液標本，鏡檢可見有革蘭陽性球菌、革蘭陽性桿菌以及革蘭陰性桿菌，與培養(yǎng)結(jié)果基本相符，分析檢出不合格是標本受污染。經(jīng)鏡檢篩查分析，分析不合格標本具體情況，用于指導(dǎo)臨床，臨床可明確檢驗工作中存在的問題，并相應(yīng)改善，提高檢驗標本的質(zhì)量合格率，提高檢驗結(jié)果及時性以及準確性，同時減少經(jīng)濟損傷，避免因標本不合格，而影響診斷結(jié)果，出現(xiàn)臨床誤診[4]。

381份合格標本中，培養(yǎng)結(jié)果顯示檢出10株3致病菌，涂片鏡檢陽性率為82例，兩組對比無明顯差異。分析涂片陰性培養(yǎng)陽性發(fā)生原因：①標本可能在接種過程中被污染；一些細菌鏡下形態(tài)為格蘭陰性球桿菌，類似奈瑟菌，容易混淆；②取材不適合，或制作的圖片太薄，不能準確用于反映標本具體情況；③涂片經(jīng)染色處理后，背景為紅色，而鏡檢檢出病菌也是紅色，診斷時容易誤診漏診，這種多發(fā)生于痰液標本中[5]?？偨Y(jié)涂片陽性培養(yǎng)陰性原因：涂片檢查，膿細胞吞噬細菌，不能準確檢出細菌，再加上死亡后尸體和白細胞會釋放抑制細菌繁殖的物質(zhì)；標本中L型菌、緩慢生長菌或苛氧菌，會因培養(yǎng)環(huán)境、培養(yǎng)時間以及培養(yǎng)基營養(yǎng)不夠，而停止生長；標本采集前仍應(yīng)用抗菌藥物，檢查體內(nèi)有明顯的抗菌藥物殘留，導(dǎo)致細菌被殺滅或抑制，不利于檢出細菌[6]。

經(jīng)分析研究，標本培養(yǎng)前涂片鏡檢與培養(yǎng)結(jié)果密切相關(guān)，因此臨床可通過染色鏡檢，提前將鏡檢結(jié)果告知臨床，并為臨床醫(yī)師用藥提供可參考依據(jù)，這對于提高檢驗結(jié)果準確具有重要意義，應(yīng)引起臨床足夠重視。涂片染色鏡檢為一種方便有效的微生物檢驗方法，可提高微生物檢出的速度以及準確率，用于臨床具有重要的意義。微生物標本經(jīng)鏡檢篩查合格標本，提高檢驗標本質(zhì)量，避免培養(yǎng)結(jié)果準確率偏差太大，提高陽性檢出率。