曹怡

[摘要]目的 探討細胞黏附分子1（CADM1）基因啟動子區(qū)甲基化與宮頸癌的關(guān)系。方法 計算機檢索PubMed、Medline、Embase、Cochrane、中國知網(wǎng)、萬方、維普數(shù)據(jù)庫，按照擬定的納入排除標準篩選文獻，檢索年限為建庫至2019年2月28日。采用Review Manager 5.3和Meta-DiSc 1.4軟件進行Meta分析，計算合并的診斷比值比（DOR）、敏感度、特異度，并繪制集成受試者工作特征曲線（SROC）。結(jié)果 共納入14篇文獻，包括宮頸癌患者587例、高度鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）患者472例、對照506例。CADM1甲基化診斷宮頸癌的合并DOR為20.97，敏感度為0.68，特異度為0.91，曲線下面積（AUC）為0.88;CADM1甲基化診斷HSIL的合并DOR為6.31，敏感度為0.55，特異度為0.81，AUC為0.77。結(jié)論 CADM1基因高甲基化和宮頸癌、HSIL的發(fā)生存在相關(guān)性，CADM1基因甲基化作為生物標志物可能有助于宮頸癌篩查。

[關(guān)鍵詞]細胞黏附分子1;DNA甲基化;宮頸癌;Meta分析

[中圖分類號] R737.33? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-4721（2019）11（a）-0012-05

Meta-analysis of the relationship between methylation of cell adhesion molecule 1 gene promoter and cervical cancer

CAO Yi

School of Biological Science & Medical Engineering， Southeast University， Jiangsu Province， Nanjing? ?210018， China

[Abstract] Objective To investigate the relationship between methylation of cell adhesion molecule 1 （CADM1） gene promoter and cervical cancer. Methods Published studies were searched from PubMed， Medline， Embase， Cochrane， China National Knowledge Infrastructure， WANFANG and CQVIP database， the retrieval period was to build the database untill February 28， 2019. The pooled diagnostic odds ratio （DOR）， sensitivity， specificity were calculated and the summary receiver operating characteristic curve （SROC） was plotted using Revman 5.3 and Meta-DiSc 1.4 software. Results A total of 14 studies， comprising 587 tumor samples， 472 high-grade squamous intraepithelial lesion （HSIL） samples and 506 normal samples， were analyzed in this Meta-analysis. Methylated CADM1 in cervical cancer achieved the pooled DOR， sensitivity， specificity were 20.97， 0.68， and 0.91， and the area under the curve （AUC） was 0.88. Meanwhile， CADM1 methylation in HSIL achieved the pooled DOR， sensitivity， specificity were 6.31， 0.55， and 0.81， and the AUC was 0.77. Conclusion CADM1 promoter hypermethylation is significantly associated with HSIL and cervical cancer， it could be an auxiliary biomarker for cervical cancer screening.

[Key words] Cell adhesion molecule 1; DNA methylation; Cervical cancer; Meta-analysis

宮頸癌是最常見的婦科癌癥之一，目前主流的宮頸癌篩查方案是通過細胞學(xué)檢查和人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）檢測進行。然而，細胞學(xué)篩查準確性低，可重復(fù)性差[1]，HPV檢測敏感性高，但高達90%的一過性感染率限制了其特異性[2]。因此，需要開發(fā)新的高敏感性和特異性的生物標記物應(yīng)用于宮頸癌篩查。

細胞黏附分子1（cell adhesion molecule 1，CADM1），又稱為肺癌抑制基因1（tumor suppressor in lung cancer 1，TSLC1），是一種腫瘤抑制基因，主要介導(dǎo)細胞間黏附的穩(wěn)定[3]。在宮頸癌中，有大量研究評估了CADM1甲基化與宮頸癌發(fā)展的關(guān)聯(lián)。本研究將這些數(shù)據(jù)結(jié)合起來進行Meta分析，評估CADM1甲基化在宮頸癌及癌前高度鱗狀上皮內(nèi)病變（high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL）的診斷性能，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1納入及排除標準

文獻納入標準：①病例對照研究;②評估CADM1甲基化在宮頸癌中的診斷性能;③檢測人CADM1基因;④對照使用正?；蛄夹约膊颖?⑤研究有可提取四格表的數(shù)據(jù)。

排除標準：①綜述、摘要和病例報告;②體外研究;③沒有完整數(shù)據(jù)的研究。對于重復(fù)數(shù)據(jù)，僅選擇最新或詳細的數(shù)據(jù)集。

1.2檢索策略

檢索的外文數(shù)據(jù)庫為：PubMed，Cochrane，Med-line和Embase，檢索式為：（“CADM1” or “TSLC1”） and （“methylation” or “methylated”） and （“cervical”）;檢索的中文數(shù)據(jù)庫為：中國學(xué)術(shù)期刊全文數(shù)據(jù)庫、萬方數(shù)據(jù)庫和維普中文科技期刊數(shù)據(jù)庫，檢索式為：（“CADM1”或“TSLC1”）和（“甲基化”和“宮頸”）。檢索年限為建庫至2019年2月28日。

1.3文獻篩選、資料提取、質(zhì)量評價

檢索得到的文獻去除重復(fù)后閱讀標題和摘要進行初步篩選，再閱讀全文根據(jù)納入及排除標準進一步篩選。對選定的研究提取以下信息：出版年份、第一作者姓名、國家、樣本類型、疾病及對照的樣本量、甲基化檢測方法。使用診斷性試驗準確性質(zhì)量評價工具[4]（quality assessment of diagnostic accuracy studies 2，QUADAS2）對研究質(zhì)量進行評分。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

統(tǒng)計分析使用軟件Review Manager 5.3和Meta-DiSc 1.4進行，合并診斷比值比（diagnostic odds ratio，DOR）、敏感度、特異度及其相應(yīng)的95%置信區(qū)間（Confidence interval，CI）并繪制集成受試者工作特征曲線（summary receiver operating characteristic curve，SROC）以評估CADM1甲基化狀態(tài)與HSIL、宮頸癌的關(guān)聯(lián)。納入研究的異質(zhì)性通過Q檢驗和I2檢驗來評估。當發(fā)現(xiàn)顯著的異質(zhì)性（I2≥50%或PQ-檢驗≤0.1）時，使用隨機效應(yīng)模型匯總結(jié)果;否則應(yīng)用固定效應(yīng)模型。通過回歸分析探索異質(zhì)性的來源，通過漏斗圖評估發(fā)表偏倚。

2結(jié)果

2.1文獻檢索結(jié)果

使用檢索策略共檢索出177篇潛在相關(guān)研究，排除86篇重復(fù)后通過閱讀標題和摘要排除53篇研究。閱讀全文后排除22篇無可納入數(shù)據(jù)的研究，2篇非病例對照研究。最終納入了14篇文章，其中1篇文章包含2項獨立研究的數(shù)據(jù)，共15項研究。

2.2納入研究的基本特征與質(zhì)量評價

納入文獻的基本特征見表1，所有研究的診斷金標準均為組織病理學(xué)。

采用QUADAS2的條目評估了每篇文獻的研究質(zhì)量，結(jié)果見圖1。

2.3 Meta分析結(jié)果

2.3.1 CADM1甲基化與宮頸癌發(fā)生風(fēng)險? 共11項研究[5，8-13，15-18]（n=472）報道了CADM1甲基化與宮頸癌發(fā)生的風(fēng)險，各研究間無統(tǒng)計學(xué)異質(zhì)性（I2=7.1%，P=0.38），固定效應(yīng)模型Meta分析結(jié)果顯示，合并敏感度為0.68（95%CI：0.63～0.72），特異度為0.91（95%CI：0.87～0.94），DOR為20.97（95%CI：12.76～34.44），SROC的曲線下面積（area under the curve，AUC）為0.88（圖2）。

2.3.2 CADM1甲基化與HSIL發(fā)生風(fēng)險? 共15項研究[5-18]（n=587）報道了CADM1甲基化與HSIL發(fā)生的風(fēng)險，各研究間有統(tǒng)計學(xué)異質(zhì)性（I2=60%，P=0.002），隨機效應(yīng)模型Meta分析結(jié)果顯示，合并敏感度為0.55（95%CI：0.51～0.59），特異度為0.81（95%CI：0.78～0.85），DOR為6.31（95%CI：3.41～11.69），SROC的AUC為0.77（圖3 ）。

為了研究HSIL的分析中觀察到的顯著異質(zhì)性，本研究進行了回歸分析，使用基于國家、檢測方法、樣本類型三個變量的回歸模型，結(jié)果表明，異質(zhì)性主要來源于樣本類型（表2）。

2.4發(fā)表偏倚評估

發(fā)表偏倚的漏斗圖未表現(xiàn)出明顯的不對稱性，表明本研究中發(fā)表偏倚較?。▓D4）。

3討論

DNA甲基化是癌癥檢測的有力工具，目前已發(fā)表了大量致力于尋找與宮頸癌的檢測、進展或預(yù)后相關(guān)的甲基化生物標志物的研究[19]。不少研究顯示CADM1啟動子高甲基化與宮頸癌有關(guān)，本研究通過診斷性Meta分析評估了CADM1在宮頸癌中的診斷性能。

本研究Meta分析結(jié)果提示，在宮頸癌中，CADM1甲基化的匯總的DOR為20.97，SROC的AUC為0.88。HSIL中，匯總的DOR為6.31，SROC的AUC為0.77。SROC是評估診斷準確性的指標，AUC>0.7被認為是良好的風(fēng)險預(yù)測因子。DOR也是評估診斷準確性的指標[20]，DOR<1.0表明診斷的鑒別值較低，高的DOR值代表更好的診斷準確性。本研究的AUC和DOR結(jié)果提示，CADM1甲基化用于宮頸癌/HSIL檢測具有良好的性能。本研究在CADM1高甲基化與HSIL風(fēng)險之間關(guān)聯(lián)的分析中發(fā)現(xiàn)了顯著的異質(zhì)性。本研究的回歸分析結(jié)果提示，樣本類型的差異是異質(zhì)性存在的主要原因。各研究中使用的樣本為組織和宮頸脫落細胞，宮頸脫落細胞樣本受病變位置、采集方法等影響，腫瘤細胞的含量可能差別巨大，因而導(dǎo)致異質(zhì)性的結(jié)果。

本研究有一些局限性，首先，大多數(shù)納入研究使用MSP進行檢測，研究使用的引物不同會導(dǎo)致潛在的發(fā)表偏倚;其次，納入的研究均采用病例對照設(shè)計可能導(dǎo)致選擇偏倚;再次，未發(fā)表的研究及其他語言的研究未包括在本研究中。

綜上所述，本Meta分析表明，CADM1甲基化在宮頸癌檢測中具有良好的診斷性能，可能被視為宮頸癌檢測的輔助生物標志物，未來仍需前瞻性大樣本的臨床對照研究進一步加以評估。

[參考文獻]

[1]王軼英，王悅，喬友林，等.中國宮頸癌篩查未來之路——細胞學(xué)初篩的棄或守[J].中國實用婦科與產(chǎn)科雜志，2017， 33（3）：88-90.

[2]胡詩淇，楊雨靜，趙霞.HPV檢測獨立應(yīng)用于宮頸癌篩查長期預(yù)測價值的Meta分析[J].實用婦產(chǎn)科雜志，2018，34（5）：371-376.

[3]張睿怡.基因甲基化修飾對宮頸癌病變影響的研究進展[J].中國計劃生育學(xué)雜志，2018，26（7）：639-642.

[4]鄔蘭，張永，曾憲濤.QUADAS-2在診斷準確性研究的質(zhì)量評價工具中的應(yīng)用[J].湖北醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報，2013，32（3）：201-208.

[5]Alfred H，Daniel S，Christiane G，et al.A Promising DNA methylation signature for the triage of high-risk human papillomavirus DNA-positive women[J].PLoS One，2014，9（3）：e91905.

[6]Apostolidou S，Hadwin R，Burnell M，et al.DNA methylation analysis in liquid-based cytology for cervical cancer screening[J].Int J Cancer，2009，125（12）：2995-3002.

[7]Gustafson KS，F(xiàn)urth EE，Heitjan DF，et al.DNA methylation profiling of cervical squamous intraepithelial lesions using liquid-based cytology specimens：An approach that utilizes receiver-operating characteristic analysis[J].Cancer，2004， 102（4）：259-268.

[8]Mersaková S，Holubeková V，Grendár M.Methylation of CADM1 and MAL together with HPV status in cytological cervical specimens serves an important role in the progression of cervical intraepithelial neoplasia[J].Oncol Lett，2018，16（6）：7166-7174.

[9]Mi-Kyung K，In-Ho L，Ki-Heon L，et al.DNA methylation in human papillomavirus-infected cervical cells is elevated in high-grade squamous intraepithelial lesions and cancer[J].J Gynecol Oncol，2016，27（2）：e14.

[10]Overmeer RM，Henken FE，Snijders PJF，et al.Association between dense CADM1 promoter methylation and reduced protein expression in high-grade CIN and cervical SCC[J].J Pathol，2008，215（4）：388-397.

[11]Overmeer RM，Louwers JA，Meijer CJLM，et al.Combined CADM1 and MAL promoter methylation analysis to detect （pre-）malignant cervical lesions in high-risk HPV-positive women[J].Int J Cancer，2011，129（9）：2218-2225.

[12]Steenbergen RDM，Kramer D，Braakhuis BJM，et al.TSLC1 Gene Silencing in Cervical Cancer Cell Lines and Cervical Neoplasia[J].J Natl Cancer Inst，2004，96（4）：294-305.

[13]Van Baars R，Jacolien VDM，Snijders PJF，et al.CADM1 and MAL methylation status in cervical scrapes is representative of the most severe underlying lesion in women with multiple cervical biopsies[J].Int J Cancer，2016，138（2）：463-471.

[14]Vuyst HD，F(xiàn)ranceschi S，Plummer M，et al.Methylation levels of CADM1，MAL and MIR124-2 in cervical scrapes for triage of HIV-infected，high-risk HPV-positive women in Kenya[J].J Acquir Immune Defic Syndr，2015，70（3）：311-318.

[15]Yang N，Nijhuis ER，Volders HH，et al.Gene Promoter Methylation Patterns throughout the Process of Cervical Carcinogenesis[J].Cell Oncol，2010，32（1-2）：131-143.

[16]王卡娜，許飛雪，李紅芳，等.TSLC1基因異常甲基化及與HPV的關(guān)系在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的意義[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展，2009，18（2）：94-98.

[17]徐彩炎，張為遠，張淞文，等.子宮頸病變中CADM1、DAPK及RARB基因的甲基化狀態(tài)[J].醫(yī)學(xué)研究雜志，2017，46（12）：108-111.

[18]趙旭曄，崔勇，李亞玲，等.肺癌腫瘤抑制因子1基因甲基化和肺癌腫瘤抑制因子1蛋白在宮頸病變中的表達及意義[J].中華腫瘤雜志，2015，37（5）：356-360.

[19]Lorincz AT.Virtues and Weaknesses of DNA Methylation as a Test for Cervical Cancer Prevention[J].Acta Cytol，2016， 60（6）：501-512.

[20]張俊，徐志偉，李克，等.診斷性試驗分析的效應(yīng)指標評價[J].中國循證醫(yī)學(xué)雜志，2013，13（7）：890-895.

（收稿日期：2019-03-15? 本文編輯：孟慶卿）