韋武，郭紅星

(1．天津市血液灌流技術(shù)企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津市紫波高科技有限公司，天津 300170;2．衛(wèi)生部人工細(xì)胞工程技術(shù)研究中心，天津市肝膽疾病研究所，天津市第三中心醫(yī)院，天津 300170)

肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)在國(guó)內(nèi)外有著很高的關(guān)注度。作為人類常見惡性腫瘤之一，2015 年的國(guó)內(nèi)癌癥流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)顯示肝癌發(fā)病率位列第4位，病死率位列第3位[1]，為此，對(duì)于肝癌的研究一直是國(guó)家重點(diǎn)支持的項(xiàng)目。肝癌動(dòng)物模型在實(shí)驗(yàn)研究中起著十分重要的作用。因此，構(gòu)建理想的肝癌動(dòng)物模型，往往是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵因素。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇上，大鼠體型較大、易于飼養(yǎng)、成本低廉、可獲取較大標(biāo)本量，因此是公認(rèn)的研究肝癌的主要?jiǎng)游锬Ｐ椭?。本文?duì)近年來文獻(xiàn)中常用的大鼠肝癌動(dòng)物模型進(jìn)行回顧總結(jié)，并概要介紹建模方法及應(yīng)用。

1 大鼠肝癌模型分類

根據(jù)構(gòu)建模型方法不同，大鼠肝癌模型常見為以下三種：自發(fā)性、誘發(fā)性、移植性肝癌。盡管大鼠是常用的自發(fā)性腫瘤動(dòng)物模型，但多見于乳腺纖維腺瘤和垂體腺瘤等，鮮有自發(fā)性肝癌報(bào)道，故而仍以誘發(fā)性和移植性兩種應(yīng)用最為廣泛，本文也主要介紹這兩種類型。

2 常用建立模型方法

2.1 實(shí)驗(yàn)大鼠品系

目前，常用于構(gòu)建大鼠肝癌動(dòng)物模型的大鼠品系主要有 SD、Wistar、Fisher344和Buffalo等，其中應(yīng)用最為廣泛的品系為SD和Wistar大鼠[2]。至于胸腺缺陷型的裸鼠，雖然腫瘤易于成活，但由于成本較高，應(yīng)用于構(gòu)建肝癌動(dòng)物模型的報(bào)道并不多見[3-4]。

2.2 誘發(fā)性模型

誘發(fā)性肝癌動(dòng)物模型通常是利用單一或聯(lián)合應(yīng)用多種化學(xué)藥物、生物毒素等直接或間接作用于大鼠肝，使之在數(shù)月內(nèi)發(fā)生肝癌。該方法操作簡(jiǎn)單，癌變率高且易于操控，是構(gòu)建肝癌動(dòng)物模型的理想方法之一。通常采用如下幾種藥(毒)物誘導(dǎo)大鼠肝癌。

2.2.1 用于誘導(dǎo)的化學(xué)物質(zhì)

常用的化學(xué)物質(zhì)如二乙基亞硝胺(N-nitrosodiethylamine， DEN)、3′-甲基-4-二甲基氨基偶氮苯(3′-methyl -4′-dimethylaminoazobenzene，3′-Me-DAB)、2-乙酰氨基芴(2-acetamidofluorene， 2-AAF)、四氯化碳(CCL4)、黃曲霉素(aflatoxin B1,AFB1)等。

2.2.2 給藥途徑

主要分為經(jīng)典飲水給藥法和腹腔注射給藥法兩種，可單獨(dú)使用或聯(lián)合應(yīng)用。其中，飲水法操作簡(jiǎn)單，但因個(gè)體差異會(huì)造成飲水量不同導(dǎo)致攝入藥物差別較大；注射法通常選用腹腔注射途徑，該方法雖可以更準(zhǔn)確地控制注射藥物量，減少個(gè)體差異，但需要多次注射操作，增加了工作量，因而實(shí)驗(yàn)成本較高。

2.2.3 給藥方案

由于可用于誘發(fā)的化學(xué)藥物有多種，且實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?，因此，雖然有推薦的方案，但仍可在文獻(xiàn)中見到多種衍生方案。最常見的DEN 給藥方案有，如(1)單獨(dú)采用飲水給藥法誘導(dǎo)，通常按照估算最終攝入劑量為達(dá)到500 mg/kg以上。將DEN投入大鼠飲水中，進(jìn)行3 ～ 6個(gè)月的持續(xù)誘導(dǎo)[5-7]。(2)單獨(dú)采用腹腔注射DEN誘導(dǎo)的方法，近年來有較多文獻(xiàn)報(bào)道[8-11]。通常單次給予DEN劑量為20 ～ 70 mg/kg，每周給藥2 ～ 3次，持續(xù)2 ～ 4個(gè)月。(3)采用腹腔注射藥物后輔以飲水或飼料維持給藥的方式進(jìn)行誘導(dǎo)，方案可采用50 ～ 200 mg/kg DEN單次或多次腹腔注射，其后輔以飲食中攝入DEN或苯巴比妥或2-AAF等進(jìn)行飼養(yǎng)；也有隨后用CCL4腹腔注射維持誘導(dǎo)的方法，均可在數(shù)月內(nèi)誘發(fā)肝癌[12-16]。

再如較常見的2-AFF給藥方案，多為摻入飼料中誘導(dǎo)方式。 趙魯笳等[17]誘導(dǎo)方法為 6% 的3′-Me-DAB 花生油溶液與精制大米按照1:49的比例配置成誘癌飼料，然后按照2次/日，每次5 g進(jìn)行飼養(yǎng)3個(gè)月，3月后改為普通大鼠飼料。 Yan等[18]用濃度為 0.06%的3′-Me-DAB飼料喂養(yǎng)大鼠，20周后誘癌成功。

至于AFB1給藥方案，已經(jīng)不再局限于傳統(tǒng)的口服飼料中大劑量摻雜黃曲霉素的方法，也可采用諸如(1)持續(xù)灌胃法，如Johnson等[19]對(duì)F344大鼠按照每日 200μg / kg的實(shí)驗(yàn)方案持續(xù)灌胃 AFB1 4 周，誘癌成功率高達(dá)96%。(2)低頻次腹腔注射：每周進(jìn)行1～3次腹腔注射，濃度為100 ～ 200 μg/kg，55周左右誘癌成功[20-21]。(3) 高濃度腹腔注射輔以口服飼料誘導(dǎo)：段小嫻等[22]以0.75 ～ 1.5 g/kg的劑量腹腔注射，其后正常飼養(yǎng)，兩周后將飼料換為0.015% 的 2-AAF 飼料，連續(xù)飼養(yǎng)4周，可成功建模。

2.2.4 誘發(fā)周期

除個(gè)案文獻(xiàn)報(bào)道外，多數(shù)藥物誘導(dǎo)方案需要的時(shí)間較長(zhǎng)。通常約為3 ～ 6個(gè)月。

2.2.5 構(gòu)建模型成功率及主要影響因素

除了構(gòu)建與雌激素水平密切相關(guān)的乳腺癌、卵巢癌模型要選擇雌性大鼠外，肝癌建模多選擇對(duì)于化學(xué)誘發(fā)因素更為敏感的雄性大鼠[23]。同時(shí)，選擇幼齡大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型也能夠提高成功率。

2.3 移植性模型

移植性肝癌模型是指將肝癌細(xì)胞株、肝癌組織塊(來源于人或動(dòng)物)或非肝組織來源的惡性腫瘤(如乳腺癌、結(jié)直腸癌等)接種于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝所形成的肝癌動(dòng)物模型。主要包括同種原位移植(腫瘤細(xì)胞類型與宿主動(dòng)物種屬一致)、異種原位移植(如人源肝癌接種到大鼠肝)、異位移植(同種或異種非肝癌細(xì)胞移植于大鼠肝)三種[24]。將肝癌細(xì)胞或者組織直接植入于肝內(nèi)，其在微環(huán)境、形態(tài)學(xué)以及對(duì)后續(xù)治療的反應(yīng)上更加符合肝癌的相關(guān)特征[25]；而異位移植將非肝癌細(xì)胞或者組織塊植入肝，因無法保證提供與腫瘤來源器官相同的微環(huán)境，會(huì)對(duì)異位移植肝癌的發(fā)展產(chǎn)生不利影響[26]。因此，異位模型的治療效果必須通過與原位移植對(duì)比進(jìn)行再次確認(rèn)。目前，多數(shù)學(xué)者通過異位模型確認(rèn)腫瘤生長(zhǎng)情況(如先接種于皮下后再將成長(zhǎng)的組織塊移植到肝)，然后構(gòu)建原位移植模型，以此提高原位移植模型的建模成功率。下面簡(jiǎn)單介紹常見移植性模型的構(gòu)建方法。

2.3.1 經(jīng)皮下種植獲得組織塊后通過手術(shù)移植

此種方法通常選用體外培養(yǎng)擴(kuò)增、生長(zhǎng)狀態(tài)良好的2 ～ 3代腫瘤細(xì)胞或癌種鼠的腹水癌細(xì)胞懸液進(jìn)行皮下注射，注射點(diǎn)通常為表淺、易于觀察且有充足生長(zhǎng)空間的部位。例如將1×107以上細(xì)胞懸液注射于大鼠皮下，接種10 d左右即可觸摸到瘤塊，此時(shí)即可進(jìn)行手術(shù)切除。將切除的腫瘤塊處理為1 mm3左右的組織塊后，用于肝內(nèi)種植[27]。

2.3.2 開腹進(jìn)行肝內(nèi)注射腫瘤細(xì)胞

通常采用小切口顯露肝葉，將細(xì)胞懸液注射到肝內(nèi)形成腫瘤[28]。腫瘤細(xì)胞的來源除了體外培養(yǎng)，還可采用癌性腹水離心后收集的細(xì)胞懸液注射的方法[29]，以期獲得更好的種植效果。該方法存在穿刺針孔滲漏導(dǎo)致腹腔播散腫瘤的可能性，但形成的腫瘤定位明確，往往是單一腫塊，便于通過外科切除或者超聲射頻消融治療。

3 構(gòu)建大鼠肝癌模型方法的探索改進(jìn)

3.1 注意操作細(xì)節(jié)以提高成功率

近年來的文獻(xiàn)報(bào)道中，在傳統(tǒng)的飲水或飼料口服給藥誘導(dǎo)方式之外，也出現(xiàn)了較多腹腔注射給藥方式，目的是更為準(zhǔn)確地控制給藥劑量，同時(shí)縮短誘導(dǎo)成瘤的時(shí)間。在構(gòu)建移植性肝癌模型過程中，注重縮短操作時(shí)間以保持植入腫瘤細(xì)胞或組織塊的活性；采用異氟烷、七氟烷等氣體麻醉而不是氯仿、苯巴比妥鈉等腹腔注射麻醉方法；用小切口微型開腹手術(shù)、采用金屬釘快速關(guān)閉手術(shù)切口以減少絲線縫合線的異物刺激等操作細(xì)節(jié)都有益于成功建立模型。

3.2 超聲、MRI引導(dǎo)注射建模

隨著超聲等影像設(shè)備普及，為了盡可能減少有創(chuàng)操作帶來的大鼠創(chuàng)傷應(yīng)激反應(yīng)，借助超聲等進(jìn)行微創(chuàng)注射移植的報(bào)道逐漸增多。引入影像技術(shù)不僅降低了有創(chuàng)操作對(duì)于大鼠免疫系統(tǒng)的影響，而且對(duì)于肝腫瘤的演變過程，可以更為及時(shí)地通過超聲、MRI[30]等進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察，獲取影像資料進(jìn)行對(duì)比。

研究表明，大鼠的體液免疫會(huì)形成不利于腫瘤細(xì)胞生存的細(xì)胞因子環(huán)境，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤移植失敗。因此，避免傳統(tǒng)的手術(shù)切開縫合操作對(duì)于大鼠的創(chuàng)傷刺激，弱化不利于移植細(xì)胞生存的局部組織微環(huán)境，一定程度上將提高移植腫瘤的存活率。這種建模方式，需要借助精準(zhǔn)的超聲設(shè)備及專業(yè)技術(shù)人員的嫻熟操作技巧，并未廣泛普及但已經(jīng)在肝癌動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)中予以采用。如Buijs等[31]在超聲引導(dǎo)下，將N1-S1細(xì)胞和McA-RH7777兩種細(xì)胞經(jīng)皮穿刺直接接種于SD大鼠肝內(nèi)，一周后超聲可檢測(cè)癌組織存活并生長(zhǎng)。Chu等[32]將N1-S1大鼠肝癌細(xì)胞通過超聲引導(dǎo)植入雄性SD大鼠肝內(nèi)，10 d后檢測(cè)到有腫瘤組織塊。Pan等[33]在超聲引導(dǎo)下，將肝癌細(xì)胞經(jīng)皮注射到大鼠肝葉內(nèi)，并與開腹手術(shù)注射方法相對(duì)比。盡管兩種方法的成瘤率相差不大，但影像學(xué)輔助減小了大鼠創(chuàng)傷反應(yīng)，無疑更有利于研究動(dòng)物負(fù)荷腫瘤情況下的體液免疫變化等。

3.3 免疫抑制措施輔助建立肝癌模型

大鼠的免疫排斥作用是導(dǎo)致構(gòu)建腫瘤模型失敗的因素之一，而采用射線輻照、注射或口服免疫抑制藥物(如環(huán)磷酰胺、糖皮質(zhì)激素、他克莫司、環(huán)孢菌素等)的方法，則可以強(qiáng)化對(duì)宿主免疫系統(tǒng)的抑制作用，從而提高移植成功率。

4 大鼠肝癌模型應(yīng)用中值得關(guān)注的問題

4.1 選擇化學(xué)藥物誘導(dǎo)模型時(shí)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

DEN誘導(dǎo)法是構(gòu)建大鼠肝癌模型的一種有效方法，其對(duì)肝的誘導(dǎo)作用相對(duì)專一，肝細(xì)胞癌占比較大且誘癌成功率高(約76.67%)[8,34]。DEN誘癌過程中，由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物個(gè)體差異，對(duì)DEN的耐受性不同，存在動(dòng)物死亡或者無腫瘤生長(zhǎng)的情況而導(dǎo)致誘癌成功率的差異。因此，在DEN誘癌實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)考慮到剔除誘導(dǎo)失敗大鼠的樣本數(shù)量。同時(shí)，誘導(dǎo)過程中可密切關(guān)注大鼠狀態(tài)，便于發(fā)現(xiàn)異常及時(shí)調(diào)整誘導(dǎo)方案，不應(yīng)盲目地固定誘導(dǎo)周期，而應(yīng)在動(dòng)物存活前提下提高誘導(dǎo)成功率。

DEN誘發(fā)的肝癌模型，發(fā)病過程較接近人類，病理結(jié)果表現(xiàn)為癌組織呈現(xiàn)彌漫性結(jié)節(jié)，合并肝硬化。在誘癌過程中藥物劑量及給藥途徑易于調(diào)整，多重復(fù)性良好且成功率較高。不足之處為誘發(fā)所需時(shí)間通常需幾個(gè)月甚至更長(zhǎng)。此類模型動(dòng)物的肝功能、免疫狀態(tài)及時(shí)間因素在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)宜予以考慮。

4.2 移植性腫瘤的自發(fā)消除現(xiàn)象

如果不抑制大鼠的免疫系統(tǒng)功能，那么即使將同源的肝癌細(xì)胞接種于健康大鼠皮下或者肝，多數(shù)因受到大鼠自體免疫排異的影響，而出現(xiàn)瘤塊逐漸自行消退現(xiàn)象。因此，如果實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑槎唐趦?nèi)進(jìn)行手術(shù)切除或者觀察腫瘤演變的動(dòng)態(tài)變化等，選擇移植模型仍有參考價(jià)值。若用于肝癌治療效果的觀察，則必須考慮到大鼠自身免疫排斥作用對(duì)腫瘤的清除作用，而不宜將腫瘤消退或者縮小的效果僅僅歸因于治療作用。

5 結(jié)語

可以說，構(gòu)建大鼠肝癌模型的手段正在不斷增多，傳統(tǒng)的口服及腹腔注射給藥途徑之外、超聲引導(dǎo)穿刺、微創(chuàng)手術(shù)、聯(lián)合免疫抑制等輔助手段也逐漸被研究人員采用。按照實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇適宜方法構(gòu)建高質(zhì)量的大鼠肝癌模型，有助于肝癌研究的學(xué)術(shù)發(fā)展。

參考文獻(xiàn)

[1] Chen W, Zheng R, Baade PD, et al. Cancer statistics in China, 2015[J]. CA Cancer J Clin, 2016, 66(2): 115-132.

[2] 劉克辛. 肝疾患基礎(chǔ)及其實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型[M].北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2003: 44-81.

Liu KX. The basis of liver disease and its experimental animal model [M]. Beijing: China Medical Science and Technology Press, 2003: 44 - 81.

[3] Hanada M, Baba A, Tsutsumishita Y, et al. Intra-hepatic arterial administration with miriplatin suspended in an oily lymphographic agent inhibits the growth of tumors implanted in rat livers by inducing platinum-DNA adducts to form and massive apoptosis [J]. Cancer Chemother Pharmacol, 2009, 64(3): 473-483.

[4] Enomoto T, Oda T, Aoyagi Y, et al. Consistent liver metastases in a rat model by portal injection of microencapsulated cancer cells [J]. Cancer Res, 2006, 66(23): 11131-11139.

[5] 李笑巖,白咸勇,劉同慎,等.二乙基亞硝胺誘發(fā)大鼠肝癌模型的建立及病理學(xué)改變 [J]. 濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007, 30(6): 401-403.

Li XY, Bai XY, Liu TS, et al. Establishment of a rat model of liver cancer induced by diethylnitrosamine and pathological changes [J]. J Binzhou Medl Univ, 2007, 30(6): 401-403.

[6] 朱艷志,孔憲炳,顏朗.間斷給藥 DEN 誘導(dǎo)大鼠肝癌模型建立及病理研究[J]. 重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2010, 35(12): 1843-1846.

Zhu YZ, Kong XB, Yan L. Intermittent administration of DEN induced rat liver cancer model establishment and pathological study [J]. J Chongqing Med Univ, 2010, 35(12): 1843-1846.

[7] Abd El-Moneim OM, Abd El-Rahim AH, Hafiz NA. Evaluation of selenium nanoparticles and doxorubicin effect against hepatocellular carcinoma rat model cytogenetic toxicity and DNA damage [J]. Toxicol Rep, 2018, 5: 771-776.

[8] 周倜,陳勇,尤楠,等. 二乙基亞硝胺誘導(dǎo)大鼠肝癌模型的建立及評(píng)價(jià) [J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2010,10(20): 3812-3815.

Zhou T, Chen Y, You N, et al. Establishment and evaluation of rat liver cancer model induced by diethylnitrosamine [J]. Progr Mod Biomedi, 2010, 10(20): 3812-3815.

[9] Pan LC, Xiao HY, Yin WJ, et al. Correlation between HSD17B4 expression in rat liver cancer tissues and inflammation or proliferation [J]. Eur Rev Med Pharmacol Sci, 2018, 22(11): 3386-3393.

[10] Jiang W, Wen D, Cheng Z, et al. Effect of sitagliptin, a DPP-4 inhibitor, against DENA-induced liver cancer in rats mediated via NF-κB activation and inflammatory cytokines [J]. J Biochem Mol Toxicol 2018 Sep 15: e22220.

[11] 夏寧，高媛，王興，等. 血清及肝組織miR-200a在大鼠肝癌發(fā)生過程中的動(dòng)態(tài)表達(dá)分析 [J]. 中華肝臟病雜志 2014, 22(6): 440-444

Xia N, Gao Y, Wang X, et al. An expression analysis of miR-200a in serum and liver tissue during the process of liver cancer development in rats [J]. Chin J Liver Dis, 2014, 22(5): 440-444.

[12] Solt DB, Medline A, Farber E. Rapid emergence of carcinogen-induced hyperplastic lesions in a new model for the sequential analysis of liver carcinogenesis [J]. Am J Pathol, 1977, 88(3): 595-618.

[13] Ghosh MK, Patra F, Ghosh S, et al. Antisense oligonucleotides directed against insulin-like growth factor-II messenger ribonucleic acids delay the progress of rat hepatocarcinogenesis [J]. J Carcinog, 2014, 13: 2.

[14] Akshatha GM, Raval SK, Arpitha GM, et al. Immunohistochemical, histopathological study and chemoprotective effect of Solanum nigrum in N-nitrosodiethylamine-induced hepatocellular carcinoma in Wistar rats [J]. Vet World, 2018, 11(4): 402-409.

[15] Saad ED, Fouad H, Rashed LA, et al. Impact of mesenchymal stem cells and vitamin D on transforming growth factor beta signaling pathway in hepatocellular carcinoma in rats [J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2018, 19(4): 905-912.

[16] Dai ZJ, Wu WY, Kang HF, et al. Protective effects of Scutellaria barbata against rat liver tumorigenesis [J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2013, 14(1): 261-265.

[17] 趙魯笳,劉小北,郭宏偉. 3′-Me-DAB 誘發(fā)大鼠肝癌模型的建立與病理研究 [J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2004,8(3): 243-245.

Zhao LJ, Liu XB, Guo HW. 3′-Me-DAB induced rat liver cancer model establishment and pathological study [J]. Chin J Lab Diagn, 2004, 8(3): 243-245.

[18] Yan Y, Zeng ZZ, Higashi S, et al. Resistance of DRH strain rats to chemical carcinogenesis of liver: genetic analysis of later progression stage [J]. Carcinogenesis, 2002, 23(1): 189-196.

[19] Johnson NM, Egner PA, Baxter VK, et al. Complete protection against aflatoxin B1-induced liver cancer with a triterpenoid: DNA adduct dosimetry, molecular signature, and genotoxicity threshold [J]. Cancer Prev Res, 2014, 7(7): 658-665.

[20] 蒿艷蓉, 楊芳, 曹驥,等. 銀杏葉提取物(EGb761)阻斷AFB1致大鼠肝癌及其機(jī)制研究 [J]. 中藥材, 2009, 32(1): 92-96.

Hao YR, Yang F, Cao J, et al. Ginkgo biloba extract (EGb761) blocks AFB1-induced liver cancer in rats and its mechanism [J]. J Chin Med Mat, 2009, 32(1): 92-96.

[21] 劉東璞, 盧鳳美, 姚海濤, 等． 黃曲霉毒素B1誘導(dǎo)大鼠肝癌模型的建立 [J]．黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2012，35(6): 47-48．

Liu DP, Lu FM, Yao HT, et al. Aflatoxin B1 induces the establishment of rat liver cancer model [J]. Heilongjiang Med Sci, 2012, 35(6): 47-48.

[22] 段小嫻，覃柳亮，覃國(guó)忠，等．單劑量黃曲霉毒素 B1 致大鼠肝癌作用的短期實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蚚J]．癌癥，1996，15(1): 21-23．

Duan XX, Qin LL, Qin GZ, et al. Short-term experimental model of single-dose aflatoxin B1-induced liver cancer in rats [J]. Cancer, 1996, 15(1): 21-23.

[23] Peraino C, Staffeldt EF, Carnes BA, et al. Characterization of histochemically detectable altered hepatocyte foci and their relationship to hepatic tumorigenesis in rats treated once with diethylnitrosamine or benzo(a)pyrene within one day after birth [J]. Cancer Res, 1984, 44(8): 3340-3347.

[24] Troiani T, Schettino C, Martinelli E, et al. The use of xenograft models for the selection of cancer treatments with the EGFR as an example [J]. Crit Rev Oncol Hematol, 2008, 65(3): 200-211.

[25] Khanna C, Hunter K. Modeling metastasis in vivo [J]. Carcinogenesis, 2005, 26(3): 513-523.

[26] Bibby MC. Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation: advantages and disadvantages [J]. Eur J Cancer, 2004, 40(6): 852-857.

[27] Chen LC, Lee WC, Ho CL, et al. Biodistribution, pharmacokinetics and efficacy of 188Re(I)-tricarbonyl-labeled human serum albumin microspheres in an orthotopic hepatoma rat model [J]. In Vivo, 2018, 32(3): 567-573.

[28] Su Z, Wang X, Zheng L, et al. MRI-guided interventional natural killer cell delivery for liver tumor treatment [J]. Cancer Med, 2018,7(5): 1860-1869.

[29] Sun B, Chen Y, Xiang T, et al. The Chinese herb contributes to the regulation of OATP1B2 and ABCC2 in a rat model of orthotopic transplantation liver cancer pretreated with food restriction and diarrhea [J]. Biomed Res Int, 2015, 2015: 752850.

[30] 楊煒,冉立峰,周崑,等.Wistar大鼠CBRH-3肝癌模型的構(gòu)建 [J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2018, 34(14): 2131-2133.

Yang W, Ran LF, Zhou K, et al. Construction of CBRH-3 liver cancer model in Wistar rats [J]. Mod Med Health, 2018, 34(14): 2131-2133.

[31] Buijs M, Geschwind JF, Syed LH, et al. Spontaneous tumor regression in a syngeneic rat model of liver cancer: implications for survival studies [J]. J Vasc Int Radiol, 2012, 23(12): 1685-1691.

[32] Chu TH, Chan HH, Hu TH, et al. Celecoxib enhances the therapeutic efficacy of epirubicin for Novikoff hepatoma in rats [J]. Cancer Med, 2018,7(6): 2567-2580.

[33] Pan HB, Wang EM, Sun CK, et al. Rapid induction of orthotopic hepatocellular carcinoma in immune-competent rats by non-invasive ultrasound-guided cells implantation [J]. BMC Gastroenterol, 2010, 10: 83.

[34] Yoshiji H, Yoshii J, Ikenaka Y, et al. Inhibition of renin-angiotensin system attenuates liver enzyme-altered preneoplastic lesions and fibrosis development in rats [J]. J Hepatol, 2002, 37(1): 22-30.