馬國和 ,吳勝強(qiáng) ,張美玲 ,李艷娟 ,鄧立新 ,王新衛(wèi)

(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院,河南鄭州450002 ;2.伊川縣肉牛產(chǎn)業(yè)發(fā)展研究院,河南洛陽 471300)

牛猝死癥是一種致病因素復(fù)雜的難治之癥,一般不表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀突然死亡,往往來不及治療,沒有明顯的季節(jié)性,在世界上許多國家都有發(fā)生,呈散發(fā)或地方流行性[1-2]。其致病因素有感染、礦物質(zhì)缺乏以及中毒等猝死,因牛猝死癥病程較短,多數(shù)沒有治療過程,通過死后實(shí)驗(yàn)室檢查進(jìn)行確診,治療難度大,死亡率極高,給肉牛養(yǎng)殖帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。2018 年6 月份河南某大型肉牛場突然換料后陸續(xù)發(fā)生散發(fā)性牛只猝死現(xiàn)象,發(fā)病急,病程短,巡圈發(fā)現(xiàn)時(shí)牛只已經(jīng)死亡。筆者通過臨床檢查、尸體剖檢和實(shí)驗(yàn)室檢測等方法,確診為集團(tuán)腸桿菌、腸炎沙門菌感染,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 病史 總牛數(shù)1 201 頭。其中即將出欄的西雜育肥牛200 頭,黑白花奶公牛(育肥)350 頭(7 月齡),西門塔爾雜交母牛99 頭(成牛),還有夏南牛150 頭公母各一半(13 月齡),其余的402 頭來自陜西、重慶的地方黃牛(5 -6 月齡)——犢牛引進(jìn)已經(jīng)近2.5 個(gè)月。2018 年6 月2 日,全群(除去即將出欄的200 頭育肥牛和西雜成母牛外),其他牛均防疫商品化多殺性巴氏桿菌病滅活疫苗。牛群均按照常規(guī)程序防疫過口蹄疫(FMD)三價(jià)滅活疫苗。

2018 年6 月9 日因犢牛料(即南陽波杜農(nóng)牧有限公司的育成前期飼料,組成成分(犢牛):粗蛋白≥13.5,粗灰分≤12,粗纖維≤20,鈣0.8～1.8,總磷≥0.35,賴氨酸≥0.4,食鹽0.3～0.8,水分≤13.5)庫存缺乏,臨時(shí)使用育肥牛飼料(同一公司來源)飼喂5 月齡犢牛(育肥后期牛飼料:粗蛋白≥12.5,粗灰分≤10,粗纖維≤18,鈣0.8～1.8,總磷≥0.35,賴氨酸≥0.4,食鹽0.3～0.8,水分≤13.5),當(dāng)天上午有12 頭5 月齡左右的犢牛出現(xiàn)瘤胃鼓氣的癥狀,獸醫(yī)隨后對之治療,多數(shù)發(fā)病牛好轉(zhuǎn)。但當(dāng)天下午其中1 頭5 月齡200 kg 體重牛突然發(fā)病死亡(未發(fā)生瘤胃鼓氣),死前癥狀不明顯,經(jīng)剖檢也未能確診。當(dāng)天共死亡2 頭牛。6 月10日又有1 頭牛發(fā)病,病牛突然倒地,口吐白沫,全身肌肉震顫,從發(fā)病到死亡僅間隔1 h,同時(shí)頭天發(fā)病牛死亡1 頭;無菌采集2 頭病牛心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟等組織,送檢河南農(nóng)業(yè)大學(xué)進(jìn)行病原檢測;同時(shí)采集飼料樣品和健康牛只血樣送檢河南海瑞正檢測技術(shù)有限公司進(jìn)行微量元素硒的檢測。6月11 日死亡3 頭,6 月12 日死亡2 頭,6 月13 日死亡1 頭,6 月14 日大群正常。6 月9 -13 日共10 頭犢牛死亡。6 月11 日晚更換飼料為犢牛料-育成前飼料。

1.2 臨床癥狀與剖檢變化 犢牛突然死亡,瘤胃鼓氣,無其他臨診表現(xiàn)。個(gè)別病死牛尸僵不完全,從鼻孔流出淡黃色液體;血液黑褐色,凝血不良。心臟變化不明顯,但心包液呈淡黃色,稍偏多。肝臟腫大、易碎,手指輕輕一觸就破,脾臟腫大,個(gè)別死牛脾臟極度腫大,肺臟含有帶血泡沫,胃黏膜變化不大,但腸充血,潮紅或有黏膜出血;其他臟器病理變化不明顯。

牛場巡視顯示,牛群整體狀況良好,調(diào)查飼養(yǎng)管理,發(fā)現(xiàn)存在犢牛料突然更換飼料情況-犢牛突然食育肥牛料。其他無明顯變化。

1.3 實(shí)驗(yàn)室檢測

1.3.1 微量元素檢測 依據(jù)GB/T 13883-2008 標(biāo)準(zhǔn),分別采集飼料樣品、健康牛全血液送至河南海瑞正檢測技術(shù)有限公司進(jìn)行了飼料硒、血硒含量的測定,牛全血硒、飼料硒含量均在正常水平,飼料為0.48 mg/kg,牛為0.13 μg/mL。

1.3.2 病原微生物檢測 細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定:將采集的心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟等樣品分別接種于厭氧肉肝湯培養(yǎng)基,37 ℃培養(yǎng)18 -24 h,再取菌液培養(yǎng)物接種于產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基即SPS 培養(yǎng)基,在厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24 h,沒有發(fā)現(xiàn)任何菌落。

需氧培養(yǎng):無菌操作取心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟制成乳液或混懸液,以接種環(huán)取乳液或混懸液分別劃線接種于綿羊血培養(yǎng)基、巧克力培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基,置37 ℃培養(yǎng)24 -48 h,檢查菌落,見幾種培養(yǎng)基上均有少量透明菌落;經(jīng)過革蘭染色鏡檢,為革蘭陰性桿菌。

將分離出的細(xì)菌培養(yǎng)物送至河南省進(jìn)出口檢疫局,通過細(xì)菌自動(dòng)鑒定儀檢測后,確定為(病牛肝臟分出)集團(tuán)腸桿菌,腸炎沙門菌(溶血型)和腸炎沙門菌屬(不溶血型)。

1.3.3 動(dòng)物致病性試驗(yàn) 將分離純化的(3 種)細(xì)菌原液混合對18～20 g 體重小鼠進(jìn)行腹腔注射,小鼠6 h 后死亡,取小鼠肝臟進(jìn)行細(xì)菌分離,分離的細(xì)菌與注射的細(xì)菌相同。

將細(xì)菌原液進(jìn)行10 倍稀釋,72 h 后,小鼠未死亡,剖檢后發(fā)現(xiàn)肺臟出血明顯,其他臟器未見明顯病變,取肝臟、肺臟、脾臟分離,均為攻毒細(xì)菌。

2 討論

根據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀及實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)檢驗(yàn)結(jié)果,本次發(fā)生的西門塔爾牛猝死癥為換料應(yīng)激協(xié)同集團(tuán)腸桿菌,腸炎沙門菌(溶血型)和腸炎沙門菌屬沙門菌感染所致。致病性沙門菌可產(chǎn)生毒力質(zhì)粒、外毒素和內(nèi)毒素,毒力質(zhì)粒能增強(qiáng)沙門菌在腸道黏膜的粘附作用,幫助完成整個(gè)侵襲過程;外毒素可導(dǎo)致腸道上皮細(xì)胞受損,引發(fā)腸黏膜損傷;內(nèi)毒素主要通過腸壁吸收進(jìn)入血液循環(huán),引發(fā)中毒型敗血癥,引起體溫升高,黏膜受損,血糖含量下降,甚至出現(xiàn)休克。本次致西門塔爾育肥牛猝死,與牛只在疫苗免疫應(yīng)激和換料應(yīng)激的雙重作用下,沙門菌感染;同時(shí)在集團(tuán)腸桿菌(也可致敗血癥導(dǎo)致動(dòng)物急性死亡)的協(xié)同作用下致牛急性死亡。

牛猝死癥的原因有感染性因素,如炭疽桿菌、巴氏桿菌、沙門菌等細(xì)菌性感染和冠狀病毒、腹瀉病毒的感染;也有微量元素硒、銅等缺乏以及中毒等[1-6]。筆者起初也懷疑因炭疽感染導(dǎo)致牛猝死,但按照國家炭疽檢測標(biāo)準(zhǔn),并未檢測到炭疽桿菌,因而,排除炭疽感染,何況該廠從未有炭疽病史。細(xì)菌分離和鑒定也排除了巴氏桿菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的死亡。同時(shí)也懷疑缺硒引起牛猝死,隨即采集飼料、飼草以及抽血進(jìn)行了硒微量元素檢測,結(jié)果飼料和牛血液含量均正常,排除硒缺乏引起的猝死。但實(shí)驗(yàn)室檢測發(fā)現(xiàn)了集團(tuán)腸桿菌和沙門菌,犢牛死亡與之相關(guān)。幾種細(xì)菌接種小鼠試驗(yàn),其致死性也證實(shí)了該案例牛死亡的原因。但有研究文獻(xiàn)顯示,精料過多可導(dǎo)致牛猝死[3]。本案例中,犢牛突然飼喂育肥牛料,飼料突變本身對牛就是應(yīng)激,加之育肥牛飼料能量高,引起牛瘤胃鼓氣等病理反應(yīng),最終導(dǎo)致死亡。本案例中這種原因也不能排除,因此筆者結(jié)合突然換料產(chǎn)生應(yīng)激,協(xié)同集團(tuán)腸桿菌、沙門菌感染引起牛只猝死。這是首次報(bào)道突然換料協(xié)同集團(tuán)腸桿菌和沙門菌感染致牛猝死案例報(bào)道。我國部分牛場的管理應(yīng)予以加強(qiáng)。

最后依據(jù)檢測結(jié)果對癥狀緩慢和早期發(fā)現(xiàn)的病畜,及時(shí)給予抗生素治療,同時(shí)輔助中藥進(jìn)行清熱解毒,有效控制了牛只繼續(xù)死亡。