(青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院,青海西寧 810016)

住肉孢子蟲病是由肉孢子蟲科肉孢子蟲屬(Sarcocystis)原蟲引起的一種食源性人獸共患寄生蟲病,呈現(xiàn)世界性分布,感染率較高[1]。住肉孢子蟲具有致病性,寄生在宿主肌肉中形成包囊,可引起貧血、厭食、消瘦、發(fā)熱、肌肉炎癥、乳產(chǎn)量下降、流產(chǎn),甚至死亡。蟲體包囊在肌肉中寄生使大量肉品廢棄,造成畜牧業(yè)經(jīng)濟損失,同時也危及到人類肉食品安全。青海地區(qū)住肉孢子蟲病流行情況較為嚴重,感染率為53.7%～100%,每0.1 g 肉樣中包囊感染強度為1～997 個[2];共和縣為青海省海南藏族自治州州屬五縣之一,是青海藏區(qū)人口較多、地域遼闊、畜牧業(yè)經(jīng)濟比重較大的一個縣,為了解共和縣藏羊住肉孢子蟲感染情況,為今后共和縣藏羊住肉孢子蟲病的防控、肉品質(zhì)量安全工程及防治工作提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 2017 年10 -12 月,隨機采集共和縣屠宰場藏羊食道肌、膈肌、心肌3 個部位肉樣各10 g,共收集食道肌512 份,膈肌32 份,心肌32 份。編號分裝于自封袋中,-20 ℃保存待檢。

1.2 方法

1.2.1 壓片鏡檢 剝離肉樣(膈肌、心肌、食道肌)表面肌膜、脂肪,肉眼觀察肌肉表面是否存在白色米粒狀或點狀疑似蟲體存在。隨機稱取各肉樣1 g,順肌纖維方向剪碎,用載玻片壓至半透明狀態(tài),光學(xué)顯微鏡下進行住肉孢子蟲包囊檢查,計數(shù)。任何肉樣中發(fā)現(xiàn)住肉孢子蟲包囊則判定為陽性,未發(fā)現(xiàn)包囊則判定為陰性。

1.2.2 染色切片 根據(jù)壓片鏡檢結(jié)果,選擇感染率較高的肉樣進行H.E.染色,切片觀察蟲體形態(tài),大小。

甲醛固定→組織修塊→50%乙醇溶液脫水→75%乙醇溶液過夜→梯度乙醇溶液脫水→二甲苯脫乙醇→樣品浸蠟→組織包埋→切片→攤片→烘片→二甲苯脫蠟→梯度乙醇溶液二甲苯→自來水脫乙醇→蘇木素浸染→流水沖洗→伊紅染色→梯度乙醇脫水→二甲苯脫乙醇→封片。

1.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計 感染率=(樣品陽性數(shù)/受檢樣品總數(shù)) ×100%

2 結(jié)果

2.1 壓片鏡檢結(jié)果 本次調(diào)查的青海省共和縣藏羊食道肌512 份,膈肌32 份,心肌32 份。肉眼可發(fā)現(xiàn)食道肌中存在明顯的住肉孢子蟲包囊,如中插彩版圖1 中箭頭所示;蟲體包囊壓較大(平均大小4.47 mm×2.59 mm),為白色橢圓狀或米粒狀。壓片鏡檢藏羊膈肌、心肌中住肉孢子蟲包囊,如中插彩版圖2、圖3 中箭頭所示,視野中住肉孢子蟲包囊順肌纖維寄生,大多呈長梭形、柳葉形,顏色呈乳白色或者灰白色,內(nèi)部為顆粒狀。

圖1 食道住肉孢子蟲(肉眼觀察)

圖2 膈肌住肉孢子蟲 (100 ×)

圖3 心肌中住肉孢子蟲 (100 ×)

2.2 藏羊住肉孢子蟲感染情況 青海省和縣藏羊住肉孢子蟲感染情況如表1 所示。此次隨機抽樣調(diào)查的576 份肉樣中172 份判斷為陽性,感染率為29.86%。不同部位感染率由高到低依次為心肌(96.88%)、膈肌(87.5%)、食道肌(22.07%); 172份樣品中123 份輕度感染(包囊數(shù)<200),占檢出總數(shù)的71.51%;48 份為中度感染(包囊數(shù)為200～500),占檢出總數(shù)的27.91%;僅有1 份為重度感染(包囊數(shù)>500),占檢出總數(shù)的0.58%。說明共和縣屠宰藏羊的住肉孢子蟲感染普遍,多為輕度與中度感染。

表1 食道肌、膈肌、心肌住肉孢子蟲感染情況

2.3 膈肌、心肌H.E.染色結(jié)果 陽性樣品膈肌、心肌經(jīng)H.E.染色,結(jié)果如中插彩版圖4、5 所示。圖中肌肉呈紅色,蟲體為藍色,蟲體呈橢圓形或柳葉狀,與肌肉纖維方向平行,外部包被肌肉纖維,內(nèi)部呈顆粒狀。中插彩版圖4 所示為藏羊膈肌住肉孢子蟲包囊,平均大小150 mm ×30 μm。中插彩版圖5 所示為藏羊心肌住肉孢子蟲包囊;平均大小120 mm×35 μm。

圖4 膈肌住肉孢子蟲 (40 ×)

圖5 心肌中住肉孢子蟲 (40 ×)

3 討論

此次調(diào)查結(jié)果顯示,青海省共和縣藏羊住肉孢子蟲感染率高,感染情況嚴重,陽性檢出率為29.86%;不同部位感染率由高到低依次為心肌(96.88%)、膈肌(87.5%)、食道肌(22.07%);韓樂等[3]對青海六縣綿羊住肉孢子蟲感染情況調(diào)查結(jié)果(共和縣感染率55%、感染強度35 個/g)比較發(fā)現(xiàn)感染率下降;馮成蘭等[4]對共和地區(qū)屠宰牲畜住肉孢子蟲感染情況調(diào)查結(jié)果心肌(69.76%)、膈肌(68.90%)、食道肌(76.79%)相比較,發(fā)現(xiàn)心肌與膈肌的感染率增高,食道肌感染率下降。劉永蘭等[5]調(diào)查發(fā)現(xiàn)共和地區(qū)羊住肉孢子蟲感染率為13.24%,感染強度40 個/g,與之相比感染率升高。巨金玲等[6]對青海部分地區(qū)藏羊膈肌住肉孢子蟲檢測結(jié)果(感染率70.73%、感染強度31 個/g)相比感染率下降。本調(diào)查被檢的172 份樣品中輕度感染占71.51%;中度感染為27.91%;重度感染為0.58%。從多個調(diào)查研究結(jié)果可分析得出,共和縣屠宰藏羊的住肉孢子蟲感染普遍,藏羊或綿羊感染率并不相同;不同時間、不同部位感染率出現(xiàn)波動,此情況為正?，F(xiàn)象;其調(diào)查結(jié)果與被檢飼養(yǎng)羊群是否投喂驅(qū)蟲藥物,中間宿主數(shù)目的變化等有關(guān)。

本次調(diào)查僅通過肉眼及光學(xué)顯微鏡觀察肉樣中蟲體形態(tài),測量蟲體由大到小分別為食道肌(4.47 mm×2.59 mm)、膈肌(150 mm ×30 μm)、心肌(120 mm ×35 μm)。該方法只適于蟲體形態(tài)結(jié)構(gòu)的初步觀察,無法根據(jù)其特點鑒定種屬;需通過組織學(xué)方法結(jié)合分子生物學(xué)對蟲體進行鑒定。2016年Damboriaenna[7]發(fā)現(xiàn)綿羊食道中有大量白色橢圓形巨型住肉孢子蟲包囊,與本次調(diào)查的藏羊食道住肉孢子蟲形態(tài)、大小相似,但本次試驗僅通過肉眼觀察蟲體形態(tài),無法以此為依據(jù)判定該蟲為巨型住肉孢子蟲。膈肌、心肌中住肉孢子蟲在光學(xué)顯微鏡下觀察,視野中蟲體形態(tài)呈紡錘形、圓柱形、卵圓形等,顏色呈灰白色、乳白色,且膈肌蟲體較大于心肌(150mm×30 μm>120mm×35 μm)。

目前,住肉孢子蟲病無特效治療藥物,因此該病的防治主要依靠預(yù)防。青海共和地區(qū)牛羊住肉孢子蟲感染率高與當(dāng)?shù)剞r(nóng)牧民生活習(xí)慣和飲食習(xí)慣有關(guān);如食用開鍋肉、將屠宰牛羊臟器直接喂終末宿主犬,終末宿主與中間宿主牛羊接觸,使住肉孢子蟲形成完整的生活史,進行傳播,造成惡性循環(huán)。所以生活衛(wèi)生和飲食衛(wèi)生方面應(yīng)引起足重視并加強對牧場的管理。