張桂清, 楊宇森, 許藝敏, 羅海凌, 姚俊新, 林占熺

(福建農(nóng)林大學(xué)國(guó)家菌草工程技術(shù)研究中心,福建 福州 350002)

紫蘇(PerillafrutescensL.)系唇形科紫蘇屬一年生草本植物,是我國(guó)傳統(tǒng)的藥食兩用植物[1],是國(guó)家衛(wèi)生部首批頒布的既是“食品又是藥品”的物品之一.其主要含有紫蘇醛、紫蘇醇、丁香油酚以及紫蘇苷、木犀草素、芹菜苷、芹黃素等多種黃酮類化合物[2,3].由于存在結(jié)構(gòu)的差異, 黃酮類化合物表現(xiàn)出不同的生物活性.有的黃酮可促使血管擴(kuò)張,增加冠狀動(dòng)脈血流量,從而起到降血壓、降血脂、增大心臟血流量、降低心率等作用[4]；某些黃酮還具有抗菌消炎、抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、保肝護(hù)肝及抗氧化等作用[5].

紫蘇獨(dú)具降壓、助消化、解熱、鎮(zhèn)靜、止咳平喘、增強(qiáng)免疫力、抗癌、降血脂、清熱解毒等功效,其各部位都具有較好的抗癌作用,尤以葉片的作用更強(qiáng),紫蘇籽中所含黃酮類化合物具有顯著的抗動(dòng)脈硬化和降低甘油三脂的作用[6].近年來,紫蘇因具有獨(dú)特的活性物質(zhì)及營(yíng)養(yǎng)成分,隨著對(duì)紫蘇含有的多種營(yíng)養(yǎng)成分和活性物質(zhì)的深入研究,其開發(fā)利用研究也日益成為世界性的熱點(diǎn)課題.紫蘇適應(yīng)性較強(qiáng)、對(duì)土壤要求不嚴(yán),易于種植,產(chǎn)量高,降脂效果顯著,大面積推廣和應(yīng)用必將提高我國(guó)人口的健康狀況,對(duì)國(guó)家衛(wèi)生保健事業(yè)的發(fā)展起到積極促進(jìn)作用.

通過系統(tǒng)的化學(xué)研究,目前已從紫蘇中分離鑒定出百余種化合物,包括揮發(fā)油類、萜類、黃酮類、甾醇類和酚類等.隨著技術(shù)的不斷發(fā)展,液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)已成為解析復(fù)雜組分的常用分析方法之一.采用高效液相色譜—飛行時(shí)間質(zhì)譜系統(tǒng)、液相色譜—四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(QTOF/MS)結(jié)合液相色譜-離子阱質(zhì)譜(IT/MS)鑒定紫蘇化學(xué)成分的報(bào)道較少,采用高分辨離子淌度液質(zhì)聯(lián)用儀(超高效液相UPLC-SYNAPT G2-Si HD質(zhì)譜聯(lián)用)技術(shù)鑒定其它植物鮮有報(bào)道,但采用高分辨離子淌度液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)鑒定紫蘇化學(xué)成分尚未見報(bào)道.四級(jí)桿質(zhì)量分析器對(duì)高質(zhì)量數(shù)離子有質(zhì)量歧視效應(yīng)、分辨率較低、適用質(zhì)量范圍較??；飛行時(shí)間質(zhì)量分析器存在分辨率低,無串極功能,限制了進(jìn)一步的定性能力；液相色譜—離子阱質(zhì)譜(IT-MS)通常是低分辨質(zhì)譜,無法獲得準(zhǔn)確質(zhì)量信息,定量靈敏度低于四級(jí)桿分析器,而且MS/MS模式下離子阱中碎裂程度低于串聯(lián)四級(jí)桿,因?yàn)槟鸽x子在離子阱中不會(huì)進(jìn)一步碎裂,此外,IT-MS不能獲得分子式,不適用于定量分析；液相色譜—四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(QTOF-MS)結(jié)合液相色譜—離子阱質(zhì)譜(IT-MS),雖然結(jié)合了二者功能的一些優(yōu)點(diǎn),但總體存在分辨率較低的缺點(diǎn).

采用高效的T-Wave離子淌度分離技術(shù),增加了分離維度,具有無可比擬的離子淌度性能,可提供更詳細(xì)的信息,顯著提高了分析的峰容量、特異性和靈敏度,SYNAPT G2-Si擁有獨(dú)特的研發(fā)優(yōu)勢(shì),其巨大的潛力更可滿足未來需求.本研究采用高分辨離子淌度液質(zhì)聯(lián)用儀,獲取精確相對(duì)分子質(zhì)量或裂解行為以推斷可能的分子式和化學(xué)結(jié)構(gòu),實(shí)現(xiàn)了紫蘇超聲波協(xié)同微波和二次微波法提取物復(fù)雜組分的較系統(tǒng)的快速分析鑒定,為紫蘇資源開發(fā)利用及臨床應(yīng)用提供依據(jù).

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

高分辨離子淌度液質(zhì)聯(lián)用儀,其中質(zhì)譜儀為SYNAPT G2-Si HD(英國(guó),沃特世)、ACQUITY(美國(guó),沃特世)超高效液相色譜儀、超離心研磨儀(德國(guó),RetschZM200)、電腦紫外檢測(cè)儀(HD-3000,上海嘉鵬科技有限公司)、程控多功能全自動(dòng)部分收集器(CBS-B,上海嘉鵬科技有限公司)、恒流泵(HL-2S,上海嘉鵬科技有限公司)、中壓特制玻璃層析柱(CXZ-5 cm×20 cm)、大孔弱酸性陽離子交換樹脂(D152,北京索萊寶科技有限公司)、甲酸(CFTB-94318-250ML,上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)、乙腈(sigma)、LCMS級(jí)、NaOH(分析純,西隴化工股份有限公司)、HCl(分析純,西隴化工股份有限公司)、乙醇(分析純,西隴化工股份有限公司)、紫蘇(廣東匯群中藥飲片股份有限公司).

1.2 方法

1.2.1 粗黃酮制備 (1)超聲波協(xié)同微波提取紫蘇莖和葉:稱取紫蘇莖和葉放在烘干箱中干燥5 h,之后用德國(guó)Retsch(萊馳)ZM200超離心研磨儀(RetschZM200)研磨成約40 μm紫蘇粉末.稱取該粉末50 g,用1 000 mL 61%乙醇浸泡20 min,超聲時(shí)間30 min,水浴溫度40 ℃,過濾后低壓濃縮并冷凍干燥.

(2)二次微波提取紫蘇莖和葉:稱取紫蘇莖和葉放在烘干箱中干燥5 h,之后用德國(guó)Retsch(萊馳)ZM200超離心研磨儀(RetschZM200)研磨成大約40 μm紫蘇粉末.稱取該粉末,料液比1∶20(50 g紫蘇粉末溶于1000 mL 61%乙醇),提取時(shí)間30 min,功率800W×60%,乙醇體積分?jǐn)?shù)61%,提取2次,過濾,低壓濃縮,冷凍干燥.

1.2.2 粗黃酮純化 先預(yù)處理D152大孔樹脂,之后裝上?5cm×24 cm的玻璃層析柱.采用61%(體積分?jǐn)?shù))乙醇進(jìn)行洗脫柱子，恒流泵(HL-2S)轉(zhuǎn)速45 r·min-1,實(shí)際流速約1.53 mL·min-1洗脫柱子,直至閾值低于6 MV,洗脫液開始從收集器廢液管流出時(shí),收集管子,并集中在一起.過濾,濃縮,冷凍干燥.

1.3 材料處理

稱取純化黃酮粉50 mg溶于10 mL甲醇中,濃度為5 mg·mL-1,離心,轉(zhuǎn)速8 000 r·min-1.

1.4 高分辨離子淌度液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)條件

1.4.1 色譜分析條件 超高效液相：ACQUITY,色譜柱：HSS T3(2.1×100 mm,1.8 μm),色譜梯度洗脫溶劑：水(0.1%甲酸)、乙腈(0.1%甲酸)、進(jìn)樣量1 μL,流速0.45 mL·min-1(表1).

表1 超高效液相色譜梯度洗脫程序Table 1 Gradient elution procedure for ultra-high performance liquid chromatography

1.4.2 質(zhì)譜條件 儀器:SYNAPT G2-Si HDMS,離子模式:電噴霧離子源(ESI),負(fù)離子掃描模式,數(shù)據(jù)采集：MSe,ramp:10～50 ev,m/z掃描范圍:50～1 200 Da,Lockspray校正系統(tǒng):亮氨酸—腦啡肽,毛細(xì)管電壓：(ESI-:3.0 kV),離子源溫度:120 ℃,脫溶劑溫度:450 ℃,脫溶劑氣體流速:800 L·h-1,錐體氣流速:50 L·h-1,樣品孔電壓:40 V,源偏移:80,霧化器氣流:6.5,掃描時(shí)間:0.2 s.

2 結(jié)果與分析

采用高分辨離子淌度液質(zhì)聯(lián)用(超高效液相UPLC-SYNAPT G2-Si HD質(zhì)譜聯(lián)用)技術(shù)鑒定紫蘇化學(xué)成分,在全波長(zhǎng)UV譜與總離子流譜圖中(圖1,2),各峰得到較好分離.通過對(duì)各化合物進(jìn)行Masslyznv4.1軟件分析和數(shù)據(jù)庫(human metabolome、reaxys、pubchem)查詢,對(duì)各色譜峰準(zhǔn)分子離子與碎片離子的高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,結(jié)合文獻(xiàn)中紫蘇植物化學(xué)研究結(jié)果,初步鑒定出10種化學(xué)成分(表2),這些化合物從結(jié)構(gòu)類別上看主要為酚酸與黃酮類兩大類成分.

表2 高分辨離子淌度液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)鑒定紫蘇超聲波協(xié)同微波和二次微波提取物的相同化學(xué)成分Table 2 High-resolution ion mobility liquid chromatography-mass spectrometry to identify the same chemical constituents of perilla-extracted by ultrasonic synergistic microwave and secondary microwave

2.1 迷迭香酸及咖啡酸四聚體類化合物

色譜峰保留時(shí)間為5.16 min,其準(zhǔn)分子離子峰[M-H]-m/z 359.076 9,同時(shí)還可觀察到二聚體離子峰[2M-H]-m/z 719.163 0,及其碎片離子m/z分別為[M-H-Caffeoyl]-197.045 4,[M-H-Caffeoyl-H2O]-179.036 4,[M-H-C9H10O5]-161.0240,[M-H-Caffeoyl-H2O-CO2]-135.045 2.m/z 179.036 4[Caffeicacid-H]為咖啡酸,m/z 135.045 2[Caffeicacid-H-CO2]為咖啡酸失去1個(gè)中性碎片CO2產(chǎn)生的離子m/z 135[M-H-CO2],這是典型的迷迭香酸的質(zhì)譜特征,因此推測(cè)此化合物為迷迭香酸[7-9].而且,咖啡?；c葡萄糖基在高能量質(zhì)譜中的準(zhǔn)確相對(duì)分子質(zhì)量(162.031 7和162.052 8)存在顯著差異,本研究的[M-H-C9H10O5]-161.024 0,準(zhǔn)確相對(duì)分子質(zhì)量為162.024 0,與咖啡?；鶞?zhǔn)確相對(duì)分子質(zhì)量(162.031 7)較接近,可信度較高,因此,本研究[M-H-C9H10O5]-161.024 0應(yīng)為咖啡?；?而不是葡萄糖基,這進(jìn)一步證明該化合物含有咖啡酰基,而迷迭香酸包含咖啡?；?因此,推斷該化合物為迷迭香酸.

色譜保留時(shí)間4.804 min,檢測(cè)到質(zhì)譜峰m/z 719.161 7,其低能量質(zhì)譜中僅有較弱碎片離子峰m/z 359.076 4.此化合物的高能量質(zhì)譜中,觀察到碎片離子m/z 197.044 3,179.03 53與161.023 9,135.045 0這些碎片離子質(zhì)量表明此化合物與迷迭香酸有相似的結(jié)構(gòu)特征,故推測(cè)此化合物可能為咖啡酸四聚體類化合物或迷迭香酸二聚體.具有此特征的咖啡酸四聚體類化合物未見文獻(xiàn)報(bào)道,因此有可能為新化合物,但其結(jié)構(gòu)有待進(jìn)一步結(jié)合磁共振技術(shù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定.

2.2 黃酮類化合物鑒定

黃酮及其苷類化合物質(zhì)譜特征較為明確,通過對(duì)各化合物進(jìn)行Masslyznv4.1軟件分析和數(shù)據(jù)庫(human metabolome、reaxys、pubchem)查詢,對(duì)各色譜峰準(zhǔn)分子離子與碎片離子的高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,結(jié)合文獻(xiàn)中紫蘇植物化學(xué)研究結(jié)果,可初步鑒定出芹菜素6,8-二葡萄糖苷、木樨草素-7-氧-二葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-氧-二葡萄糖醛酸苷、山奈酚3-葡萄糖醛酸-7-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-D-吡喃葡萄糖醛酸糖苷、芹菜素-7-氧-葡萄糖醛酸苷等化合物.

大量文獻(xiàn)將保留時(shí)間3.621 min核質(zhì)比m/z 593的化合物歸類為芹菜素7-O-咖啡酰葡萄糖苷,這與本試驗(yàn)結(jié)果不一致,對(duì)此,本研究對(duì)該化合物進(jìn)行了詳細(xì)分析.首先從質(zhì)量數(shù)準(zhǔn)確度的角度考慮,芹菜素7-O-咖啡酰葡萄糖苷的準(zhǔn)確分子質(zhì)量為m/z 594.137 3,分子式為C30H26O13,在質(zhì)譜正離子模式下加合H離子的信號(hào)[M+H]+為m/z 595.144 6,負(fù)離子模式下[M-H]-m/z 593.130 1[10],這與本研究實(shí)際測(cè)得結(jié)果(594.158 5)差異較大,誤差為35.68e-6.而芹菜素6,8-二葡萄糖苷的準(zhǔn)確分子質(zhì)量為m/z 594.158 5,分子式為C27H30O15,在質(zhì)譜正離子模式下加合H離子的信號(hào)[M+H]+為m/z 595.165 7[10],這與本研究實(shí)際測(cè)得結(jié)果(594.158 5)一致,可信度較高.此外,該化合物的高分辨率質(zhì)譜結(jié)果也得到了豐富的碎片離子信息,通過比較[10],該化合物的碎片離子與芹菜素6,8-二葡萄糖苷碎片離子基本一致,都有m/z 383、353、473、503等碎片離子,裂解規(guī)律也大致相同.

保留時(shí)間3.856 min色譜峰的準(zhǔn)分子離子峰[M-H]-為 m/z 637.104 0,通過軟件分析和數(shù)據(jù)庫查詢,對(duì)各色譜峰準(zhǔn)分子離子與碎片離子的高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,結(jié)合文獻(xiàn)中紫蘇植物化學(xué)研究結(jié)果,得到化學(xué)式為C27H25O18.在紫蘇植物化學(xué)成分研究中[7,11],野黃芩素-7-氧-二葡萄糖醛酸苷、木樨草素-7-氧-二葡萄糖醛酸苷兩化合物分子式都為C27H25O18,野黃芩素-7-氧-二葡萄糖醛酸苷和木犀草素-7-氧-二葡萄糖醛酸苷為一對(duì)同分異構(gòu)體,擁有相同的碎片m/z285、351和193,[M-H-2(Glu-H2O)]-285.0397,[M-H-C15H10O6]-351. 055 6,[M-H-C15H10O6-C6H6O5]-193.035 0分別為苷元、2個(gè)葡萄糖醛酸離子及它們斷裂形成的碎片[12].m/z 351為2個(gè)葡萄糖醛酸離子,由于葡萄糖醛酸含有羧基,使得其在負(fù)離子條件下有較強(qiáng)的響應(yīng).但本研究高能量質(zhì)譜中存在m/z 175.025 2碎片,則可以將兩者區(qū)分開來,m/z 175為木犀草素脫去鄰羥基苯酚后的碎片離子,而野黃芩素沒有此碎片,推斷m/z 637.103 9為木犀草素-7-氧-二葡萄糖醛酸苷.

保留時(shí)間4.241 min色譜峰的準(zhǔn)分子離子峰[M-H]-m/z 621.109 3,數(shù)據(jù)庫查詢得到化學(xué)式為C27H26O17,此化合物低能量質(zhì)譜中可檢測(cè)到碎片離子m/z 351.056 3,高能量質(zhì)譜中檢測(cè)到碎片離子m/z 269.044 8、351.056 3、m/z 487、351和269等比較明顯的碎片離子,其中m/z 487為[M-H-C8H6O2]-,為黃酮的特征斷裂方式；m/z 351[M-H-C15H10O5]-351.2,為2個(gè)葡萄糖醛酸離子,由于葡萄糖醛酸含有羧基,使得其在負(fù)離子條件下有較強(qiáng)的響應(yīng),本研究中m/z 351豐度最高,響應(yīng)最強(qiáng).[M-H-2(Glu-H2O)]-269.2為芹菜素苷元.結(jié)合數(shù)據(jù)庫信息,質(zhì)譜碎片信息及文獻(xiàn)報(bào)道[7,11,13],即可判斷此譜峰為芹菜素-7-氧-二葡萄糖醛酸苷.以上2個(gè)黃酮二葡萄糖醛酸苷類的低能量質(zhì)譜中并未檢測(cè)到高強(qiáng)度的黃酮苷元離子,而檢測(cè)到較高能量的碎片離子 m/z 351.056 3,經(jīng)數(shù)據(jù)庫查詢得到其化學(xué)式為C12H16O12,表明此片段為二葡萄糖醛酸離子.此碎片離子強(qiáng)度較高,可能與其結(jié)構(gòu)中羧基易失去質(zhì)子離子化有關(guān).

保留時(shí)間4.077 min色譜峰的準(zhǔn)分子離子峰[M-H]-為m/z 637.104 0,通過軟件分析和數(shù)據(jù)庫查詢,對(duì)各色譜峰準(zhǔn)分子離子與碎片離子的高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,結(jié)合文獻(xiàn)中紫蘇植物化學(xué)研究結(jié)果,得到化學(xué)式為C27H25O18.521.189 8應(yīng)該是丟失1個(gè)C4H6O3后形成的碎片；475.180 1應(yīng)該是丟失C5H8O5后形成的碎片；285.039 4是丟失葡萄糖基和葡萄糖醛酸基后的母核碎片.根據(jù)以上信息,推測(cè)該化合物可能為山奈酚3-葡萄糖醛酸-7-葡萄糖苷或其同分異構(gòu)體.

保留時(shí)間4.537 min,色譜峰的準(zhǔn)分子離子峰[M-H]-為m/z 461.071 8,數(shù)據(jù)庫查詢得到其化學(xué)式為C21H18O12.產(chǎn)生m/z 285的二級(jí)碎片離子,即[M-H-176]-,根據(jù)池玉梅等[14]研究,推測(cè)失去1個(gè)葡萄糖醛酸殘基；m/z 285的二級(jí)碎片離子產(chǎn)生m/z 257的三級(jí)碎片離子,這與標(biāo)準(zhǔn)品山奈酚的碎片離子相同,因此可以推斷色譜峰準(zhǔn)分子離子峰[M-H]-為m/z 461.071 8為山奈酚衍生化的黃酮糖苷.此化合物低能量質(zhì)譜都可檢測(cè)到碎片離子m/z 447.092 3、285.039 8,其中m/z 285.039 8在高能量質(zhì)譜中豐度較高.通過數(shù)據(jù)庫查詢得到m/z 447.092 3化學(xué)式為C21H20O11,m/z 447.092 3失去1個(gè)葡萄糖殘基162,產(chǎn)生m/z 285的二級(jí)碎片離子,推測(cè)為山奈酚-3-O-D-吡喃葡萄糖苷[15].結(jié)合前人研究[10]推測(cè)為山奈酚-3-O-D-吡喃葡萄糖苷酸,根據(jù)文獻(xiàn)[16],推測(cè)該化合物為山奈酚-3-O-D-吡喃葡萄糖醛酸糖苷.

保留時(shí)間5.053 min,色譜峰的準(zhǔn)分子離子峰[M-H]-為m/z 445.977 3,數(shù)據(jù)庫查詢得到其化學(xué)式為C21H18O11.此化合物低能量質(zhì)譜中可檢測(cè)到碎片離子m/z 269.045 2,高能量質(zhì)譜中檢測(cè)到碎片離子m/z 269.045 0,431.096 1,其中[M-H-176]-269.045 0,池玉梅等[14]研究表明,黃酮氧苷表現(xiàn)為丟失糖殘基,如六碳糖苷、五碳糖苷、甲基五碳糖苷和六碳糖醛酸苷分別為丟失162、132、146和176 u,失去1個(gè)葡萄糖醛酸殘基,且豐度較高.通過數(shù)據(jù)庫查詢得到m/z 269.045 0化學(xué)式為：C15H10O5,為芹菜素,m/z 431.096 1化學(xué)式為C21H20O10,為芹菜素-7-葡萄甙,通過前人研究[17]和質(zhì)譜碎片信息,推測(cè)該化合物為芹菜素-7-氧-葡萄糖醛酸苷.

2.3 葵二酸的鑒定

紫蘇提取物色譜分析中,在6.043 min檢測(cè)到離子m/z 201.112 9,通過數(shù)據(jù)庫查詢得到此化合物分子式為C10H18O4,高能量質(zhì)譜中碎片離子m/z分別為[M-H-H2O]-183.102 0、[M-H-H2O-CO2]-139.112 4、[M-H-CO2]-157.124 8、[M-H-CH2O2]-155.108 1.m/z 183.102 0是脫一分子水而產(chǎn)生,m/z 139.112 4是脫一分子水和一分子CO2而產(chǎn)生,m/z 157.124 8是脫一分子CO2而產(chǎn)生,m/z 155.1081是脫一分子CH2O2而產(chǎn)生,因此推斷此化合物為葵二酸,這在紫蘇文獻(xiàn)中尚未找到,是推導(dǎo)出來的新化合物.

2.4 二次微波法與超聲波協(xié)同微波法鑒定紫蘇莖和葉化學(xué)成分比較

通過二次微波法和超聲波協(xié)同微波法提取紫蘇黃酮的負(fù)離子模式高分辨質(zhì)譜總離子圖(圖1)和二次微波法和超聲波協(xié)同微波法提取紫蘇黃酮的液相色譜圖(圖2)分析,黃酮及其化合物主要集中在3.6 min到5.1 min內(nèi),5.1 min以后多為酚酸類.在質(zhì)譜中,分子離子峰的相對(duì)豐度與化合物的結(jié)構(gòu)密切相關(guān).5.1 min以內(nèi),二次微波法提取紫蘇黃酮的負(fù)離子模式高分辨質(zhì)譜總離子相對(duì)豐度高于超聲波協(xié)同微波法,說明二次微波法提取紫蘇黃酮化合物形成的穩(wěn)定性較超聲波協(xié)同微波法的強(qiáng),較不易發(fā)生裂變,但2種方法提取紫蘇黃酮化合物形成的各個(gè)分子離子峰基本一致,即每個(gè)化合物基本一樣；5.1 min以后,超聲波協(xié)同微波法提取紫蘇的酚酸類負(fù)離子模式高分辨質(zhì)譜各離子相對(duì)豐度高于二次微波法,說明超聲波協(xié)同微波法提取紫蘇的酚酸類化合物形成的穩(wěn)定性高于二次微波法,較不易發(fā)生裂變,而且2種方法提取紫蘇的酚酸類化合物形成的各分子離子存在差異.二次微波法提取紫蘇黃酮的液相色譜波峰吸光度顯著高于超聲波協(xié)同微波法(圖2),而且有些液相色譜波峰不同,二次微波法提取紫蘇黃酮的液相色譜波峰數(shù)多于超聲波協(xié)同微波法.通過兩者綜合比對(duì),二次微波法提取紫蘇黃酮類化合物的效果優(yōu)于超聲波協(xié)同微波法,超聲波協(xié)同微波法提取紫蘇酚酸類化 合物的效果優(yōu)于二次微波法.

3 討論

本研究采用高分辨離子淌度液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(聯(lián)合使用超高效液相色譜儀)和質(zhì)譜儀(SYNAPT G2-Si HD英國(guó)沃特世),通過得到的紫外數(shù)據(jù)與高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)結(jié)合分析,再根據(jù)紫蘇化學(xué)成分相關(guān)文獻(xiàn),從紫蘇莖葉提取物中初步鑒定出10種化學(xué)成分.這些成分主要為酚酸與黃酮類化合物,其中葵二酸是采用高分辨離子淌度液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)首次從紫蘇中鑒定出的化合物.在黃酮類成分的質(zhì)譜鑒定中,鑒定出2種含量較高的黃酮二葡萄糖醛酸苷類化合物.這類化合物的低能量質(zhì)譜中,檢測(cè)到較高強(qiáng)度的二葡萄糖醛酸碎片離子m/z 351.056 3,而僅檢測(cè)到極弱的黃酮苷元碎片離子,因此提示此離子可能為黃酮二葡萄糖醛酸苷類化合物在負(fù)離子模式下的特征碎片離子.本研究鑒定的芹菜素6,8-二葡萄糖苷,與芹菜素7-O-咖啡酰葡萄糖苷結(jié)構(gòu)相似,但通過分子質(zhì)量數(shù)準(zhǔn)確度和高分辨率質(zhì)譜結(jié)果得到的豐富碎片離子信息等推斷為芹菜素6,8-二葡萄糖苷,而不是芹菜素7-O-咖啡酰葡萄糖苷.野黃芩素-7-氧-二葡萄糖醛酸苷和木犀草素-7-氧-二葡萄糖醛酸苷為同分異構(gòu)體,擁有相同的碎片m/z 285、351和193,但本研究高能量質(zhì)譜中存在m/z 175.025 2碎片,則可以將兩者區(qū)分開來,m/z 175為木犀草素脫去鄰羥基苯酚后的碎片離子(285-110=175),而野黃芩素沒有此碎片,推斷m/z 637.103 9為木犀草素-7-氧-二葡萄糖醛酸苷.中藥材成分復(fù)雜,藥材植物與產(chǎn)地、季節(jié)等自然因素有關(guān),在藥材采集儲(chǔ)運(yùn)等環(huán)節(jié)還存在著影響藥材化學(xué)成分變化的因素.紫蘇在世界范圍內(nèi)作為藥食兩用的植物藥材,化學(xué)成分的變化必然會(huì)影響其藥理活性與食用價(jià)值,因此在大規(guī)模地開發(fā)利用之前,應(yīng)對(duì)其化學(xué)成分作進(jìn)一步了解.本研究建立了一種基于高分辨離子淌度液質(zhì)聯(lián)用方法,用于紫蘇莖葉提取物中化學(xué)成分快速分離與結(jié)構(gòu)鑒定,可為該植物的合理利用與開發(fā)提供依據(jù).

致謝：本論文研究工作在福建農(nóng)林大學(xué)作物科學(xué)學(xué)院何水林教授實(shí)驗(yàn)室完成,特此致謝！