骨調(diào)素、趨化因子和細(xì)胞因子水平與銀屑病關(guān)系的探究

馬小娜，王 爽，呼菊蓮，史龍泉，王宏?yáng)|，張 輝，韓曉虹

銀屑病為常見(jiàn)的慢性炎癥性疾病，其病因不明且發(fā)病過(guò)程不可預(yù)測(cè)，發(fā)病率可達(dá)2%～3%[1,2]。尋常性銀屑病最為常見(jiàn)，約占銀屑病的95%左右，其臨床表現(xiàn)為邊界清楚、形狀不規(guī)則的紅斑，表面覆蓋多層鱗屑，且鱗屑易脫落，嚴(yán)重患者可擴(kuò)散至全身[3,4]。銀屑病因其病情頑固不易治愈，患者需終生治療。有關(guān)細(xì)胞因子和趨化因子與銀屑病之間的關(guān)系研究較多[5,6]。Komorowski等[7]發(fā)現(xiàn)銀屑病患者血清中與肥胖者脂肪組織中骨調(diào)素（osteopontin，OPN）濃度較健康對(duì)照組高，而且肥胖和銀屑病有一定的相關(guān)性，患者的體重與銀屑病的嚴(yán)重程度也具有一定的相關(guān)性[8,9]。本研究探討OPN、CC類趨化因子配體 5[chemokine(C-C motif)ligand 5，CCL5]、趨化因子（C-X-C）配體 9[chemokine（C-X-C motif）ligand 9，CXCL9]、腫瘤壞死因子 -α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和 γ-干擾素（interferon-γ，IFN-γ）與銀屑病發(fā)生之間的關(guān)系，同時(shí)也分析銀屑病患者上述因子水平是否與患者肥胖狀態(tài)相關(guān)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2011年3月—2015年6月在我院就診的銀屑病患者，研究對(duì)象納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18歲；②均為尋常性銀屑病患者；③前4周均未給予銀屑病藥物或光療；④無(wú)免疫性疾病或慢性代謝病史；⑤病歷資料完整。根據(jù)上述納入標(biāo)準(zhǔn)共納入108例患者（研究組），其中肥胖患者53例，非肥胖患者55例；同時(shí)納入31例體檢健康志愿者為對(duì)照組，肥胖者15例，非肥胖者16例；所有納入的研究對(duì)象均簽訂知情同意書(shū)，本研究同時(shí)經(jīng)醫(yī)院道德倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

研究組和對(duì)照組在年齡、性別、體質(zhì)（BMI）指數(shù)、肥胖、腰圍、腰臀比和腰高比方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05），具有臨床可比性（表1）。

1.2 方法

1.2.1 相關(guān)指標(biāo)定義 銀屑病嚴(yán)重程度采用銀屑病面積和嚴(yán)重度指數(shù)（psoriasis area severity index，PASI）進(jìn)行評(píng)估，若PASI≥10則為中重度銀屑病[10]；根據(jù)中國(guó)肥胖問(wèn)題工作組建議和中國(guó)成人超重和肥胖癥預(yù)防控制指南[11]，采用BMI進(jìn)行評(píng)估，若BMI≥28 kg/m2則定義為肥胖。

1.2.2 OPN、趨化因子和細(xì)胞因子濃度測(cè)定 于受試者肘靜脈處采集外周全血10 ml，置于枸櫞酸鈉（濃度為0.129 mol/L）抗凝管中，于4 ℃，離心條件為978×g，離心15 min，分離血漿，并貯存在-30 ℃，待檢（血漿樣品在1個(gè)月內(nèi)完成檢測(cè)）。

OPN水平檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）， 人 ELISA 檢測(cè)試劑盒購(gòu)自R&D公司，具體操作按照說(shuō)明書(shū)完成，采用多功能酶標(biāo)儀分別測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品和樣本A450吸光度，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本中的OPN量，檢測(cè)靈敏度為0.011 ng/ml；CXCL9、CCL2和CCL5水平的測(cè)定均采用北京康潤(rùn)生物公司人ELISA檢測(cè)試劑盒，操作參照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，分別測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品和樣本A450吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本的CXCL9、CCL2和CCL5含量，檢測(cè)靈敏度為31.3 pg/ml。TNF-α和IFN-γ測(cè)定采用北京康潤(rùn)生物公司人ELISA檢測(cè)試劑盒，操作參照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，分別測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品和樣本A450吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本的TNF-α和IFN-γ含量，檢測(cè)靈敏度為3.9 pg/ml。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS.22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，連續(xù)性變量以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（xˉ±s）描述，組間差異性比較采用t檢驗(yàn)；分類資料以百分比的形式描述，組間差異性比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)，ROC曲線分析OPN的臨界值，采用多因素分析OPN水平與臨床特征的關(guān)系，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組和對(duì)照組OPN水平

研究組OPN水平為（42.98±20.32）ng/ml，對(duì)照組為(12.08±4.02)ng/ml，兩組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=8.399，P＜0.001）；研究組中肥胖患者OPN為（42.56±21.04）ng/ml，非肥胖患者為（43.04±19.08）ng/ml，兩者相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.114，P=0.455）；對(duì)照組中肥胖者OPN為（12.38±3.96）ng/ml，非肥胖患者為（11.98±4.02）ng/ml，兩者相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.494，P=0.311）。研究組中肥胖患者的OPN水平顯著高于對(duì)照組肥胖者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=25.362，P＜0.001）；PASI≥10銀屑病患者OPN水平為（43.02±20.14）ng/ml與PASI＜10[（42.06±21.02）ng/ml]相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.242，P=0.404）；肥胖銀屑病患者中平均PASI為（52.1±11.4）分，其中PASI≥10為53例，非胖患者PASI為（36.8±10.9）分，PASI＜10為12例（21.8%）。

血漿中OPN診斷銀屑病患者的臨界值為18.01 ng/ml，曲線下面積為0.802，診斷的敏感性為78%，特異性為74%；高血漿OPN水平與銀屑病的發(fā)生相聯(lián)系，銀屑病患者較正常健康人群相比高血漿OPN水平風(fēng)險(xiǎn)顯著增加（P＜0.001）（表2）。

表1 研究組和對(duì)照組臨床基本特征

2.2 研究組和對(duì)照組趨化因子和細(xì)胞因子水平

研 究 組 CCL5、CXCL9、TNF-α 和 IFN-γ水 平分 別 為（4011.5±1024.1）pg/ml、（682.7±104.8）pg/ml、（76.7±33.4）pg/ml 和（41.6±10.5）pg/ml，對(duì) 照 組 為（2489.7±788.6）pg/ml、（622.2±118.4）pg/ml、（14.2±2.9）pg/ml和 10.1 pg/ml，兩組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.641，P＜0.001；t=2.757，P=0.003；t=10.067，P＜ 0.001；t=3.683，P=0.011）；研究組CCL2 水平為（785.6±344.5）pg/ml，對(duì)照組為（755.6±107.6）pg/ml，兩組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.477，P=0.317）。PASI≥10銀屑病患者CCL5水平為（4236.5±1113.4）pg/ml、CXCL9水平為（704.5±102.1）pg/ml、CCL2 水平為（796.4±339.3）pg/ml，與PASI＜10[（3988.3±877.3）pg/ml、（665.4±98.3）pg/ml和（781.5±342.7pg/ml）]相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.143，P=0.128；t=1.542，P=0.092；t=0.202，P=0.419），而TNF-α水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[（102.2±18.4）pg/ml 對(duì)（51.1±16.5）pg/ml，t=13.932，P＜0.001）]。

2.3 CXCL9和TNF-α水平與OPN的相關(guān)性

研究組銀屑病患者OPN水平與CXCL9和TNF-α水平均無(wú)顯著相關(guān)性（r=0.008，P=902；r=0.112，P=887）（圖 1）。

3 討論

銀屑病為自身免疫性疾病，與促炎因子的生成相關(guān)聯(lián)[2]。OPN是免疫系統(tǒng)細(xì)胞分泌的糖蛋白，如脂肪組織巨噬細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、平滑肌、內(nèi)皮細(xì)胞。成骨細(xì)胞和肝細(xì)胞等等。OPN可以與不同種類的泛表達(dá)受體相互作用，包括整合素和CD44變異體，并在生理和病理過(guò)程中扮演著重要作用，例如炎癥和免疫反應(yīng)，增強(qiáng)Th1反應(yīng)而抑制Th2 反應(yīng)。OPN同時(shí)也參與Th17細(xì)胞系的調(diào)節(jié)，同自身免疫功能紊亂相關(guān)聯(lián)，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和克羅恩病[7,12]。研究發(fā)現(xiàn)銀屑病患者血清中和肥胖者脂肪組織中OPN濃度較健康對(duì)照者升高[7]，而且肥胖和銀屑病也具有一定的相關(guān)性，研究發(fā)現(xiàn)隨著體重的增加PASI也隨之增加[8,9]。本研究結(jié)果也進(jìn)一步證實(shí)先前的研究觀察，銀屑病患者血漿中OPN水平高于對(duì)照組，但是肥胖和非肥胖銀屑病患者相比OPN水平并無(wú)顯著性差異，對(duì)于肥胖和非肥胖的對(duì)照組也具有類似的結(jié)果。此外，高血漿OPN水平與銀屑病的發(fā)生相關(guān)聯(lián)，銀屑病患者較正常健康人群相比高血漿OPN水平風(fēng)險(xiǎn)顯著增加，這也表明OPN可能是影響銀屑病發(fā)病機(jī)制的一個(gè)重要因素。

表2 多因素回歸分析銀屑病患者高血漿OPN的相關(guān)因素

圖1 OPN水平與CXCL9和TNF-α水平的關(guān)系

另外，外周血中趨化因子水平較細(xì)胞因子水平更高，這也促使其可作為量化的更為方便和可靠指標(biāo)，因此，趨化因子可作為銀屑病治療效果的監(jiān)測(cè)因子。在疾病早期，通過(guò)抑制趨化因子下調(diào)促炎因子水平，其可作為特定細(xì)胞因子阻滯替代性選擇，趨化因子受體至少有一個(gè)配體，不同的趨化因子與不同的受體相結(jié)合；所以趨化因子和OPN可作為銀屑病最有潛力的生物指標(biāo)[9,13]。銀屑病患者經(jīng)高克曼（Goeckerman）法治療后，隨著CCL2和CCL5水平降低，皮膚的病變部位也得以緩解[14]；王凱新等[15]研究新疆地區(qū)尋常性銀屑病患者CXCL9和CCL5水平顯著高于正常人群，但是不同民族之間并無(wú)顯著性差異。本研究結(jié)果也表明銀屑病患者的CXCL9和CCL5水平高于對(duì)照組，但是銀屑病患者和健康人相比CCL2水平并無(wú)明顯差異；此外，先前的針對(duì)性探討銀屑病患者細(xì)胞因子與趨化因子之間的關(guān)系，如CCL2、CCL3、CXCL1、CXCL9、白細(xì)胞介素（IL）-6和IL-12或IL-13與PASI之間的關(guān)系，則常出現(xiàn)相反的的研究結(jié)果[16,17]。Ekma等[17]的 研 究 顯示，雖然銀屑病患者CXCL9、CXCL10、CCL17、CCL20 和CCL22水平高于對(duì)照組，但是只有CCL20與PASI相關(guān)，而且對(duì)于接受治療的患者細(xì)胞因子水平與對(duì)照組相比并無(wú)顯著性差異，此項(xiàng)研究也與本研究的結(jié)果相似。

本研究尚存在一定的不足之處。首先，研究所納入的患者數(shù)量較少，其統(tǒng)計(jì)分析略顯不足；其次，本研究?jī)H分析患者血漿中各因子變化，并未采集患者病變處進(jìn)行研究；第三，研究中所采用的手段具有一定的局限性，在測(cè)定銀屑病患者中OPN、趨化因子和細(xì)胞因子之間的相關(guān)性時(shí)，僅采用ELISA法進(jìn)行檢測(cè)。因此，后續(xù)的研究應(yīng)該擴(kuò)大標(biāo)本數(shù)量，同時(shí)采用多種研究方法，檢測(cè)患者血漿及病變處OPN、趨化因子和細(xì)胞因子的變化。

本文研究結(jié)果顯示，銀屑病患者血漿中OPN、CCL5、和CXCL9水平均高于健康者，而且其水平與患者是否肥胖無(wú)明顯相關(guān)性；高血漿OPN水平與銀屑病的發(fā)生相關(guān)聯(lián)，銀屑病患者較正常健康人群相比高血漿OPN水平風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。因此，OPN可能是影響銀屑病發(fā)病機(jī)制的重要分子，可作為銀屑病診斷的生物標(biāo)志物，或可用于臨床銀屑病患者的診斷。