鮑留平，黃 娟，錢 媛，張素云

（江蘇省響水縣人民醫(yī)院，1.婦科；2.病理科，江蘇 鹽城 224699）

卵巢惡性腫瘤是女性生殖器最常見的三大惡性腫瘤之一，由于早期無明顯癥狀，且缺乏有效的早期診斷方法，70%患者就診時已屆晚期，因此卵巢惡性腫瘤致死率居婦科惡性腫瘤首位[1]。其中卵巢上皮性腫瘤最常見，占卵巢惡性腫瘤85%～90%。目前并無有效治療手段。

1 材料與方法

1.1 研究資料及標(biāo)本制備

收集本院2015～2018年經(jīng)病理檢查證實為卵巢惡性腫瘤的新鮮卵巢癌組織40例。取組織標(biāo)本離體后10 min內(nèi)置于液氮罐內(nèi)迅速冷凍后置-80℃保存。上調(diào)組患者年齡24～62歲，平均（35.3 0.2）歲，下調(diào)組年齡23～65歲，平均（45.2 0.4）歲，對照組年齡28～75歲，平均（48.5 0.2）歲，3組年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）?；颊咝g(shù)前均未接受過放療、化療或激素治療。

1.2 實驗方法

①主要試劑：酪氨酸蛋白激酶A3受體抗體、免疫組化（SP）試劑盒（兔）購自北京博奧森生物有限公司。②檢測途徑：轉(zhuǎn)染ephrinA3至卵巢癌SKOV3細(xì)胞，分為ephrinA3上調(diào)組、ephrinA3下調(diào)組及空白對照組。利用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞中SKOV3的表達(dá)水平，Transwell實驗檢測轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞的增殖能力及遷移能力。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，兩組間比較用t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組SKOV3細(xì)胞表達(dá)水平的比較

實時熒光定量P C R 檢測顯示，上調(diào)e p h r i n A 3 后SKOV3表達(dá)水平升至(86.3 2.3)%，表達(dá)水平明顯上調(diào)，未轉(zhuǎn)染對照組的表達(dá)水平(32.4 3.2)%(P＜0.05)，而下調(diào)組的表達(dá)水平(50.2 0.7)與未轉(zhuǎn)染對照組(48.5 0.2)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2 各組SKOV3細(xì)胞增殖能力的比較

Transwell實驗發(fā)現(xiàn)上調(diào)組侵襲細(xì)胞數(shù)量為(79.22 0.3)個/視野，明顯高于未轉(zhuǎn)染對照組的(22.10 1.7)個/視野(P＜0.05)，而下調(diào)組的侵襲細(xì)胞數(shù)量為(25.61 2.4)個/視野，與未轉(zhuǎn)染對照組之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)

2.3 各組SKOV3細(xì)胞遷移能力的比較

Transwell實驗發(fā)現(xiàn)上調(diào)組遷移細(xì)胞數(shù)量為(82.3 0.7)個/視野，明顯高于未轉(zhuǎn)染對照組的(22.5 0.8)個/視野(P＜0.05)，而下調(diào)組的遷移細(xì)胞數(shù)量為(29.50 1.3)個/視野，與未轉(zhuǎn)染對照組之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討 論

Ephrin是與Eph受體結(jié)合的配體，根據(jù)對細(xì)胞膜的錨定方式將其分為Ephrin A、Eph-rin B這兩亞家族[2]，目前已有研究顯示，Eph是酪氨酸蛋白激酶受體家族最大的分支，在細(xì)胞的生長、分化、遷移、凋亡等過程中發(fā)揮著重要的作用[3]。

EphA1作為第一個明確的受體,已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)在肝癌、肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌等多種實體瘤中表達(dá)[3]。EphA2在人黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌中表達(dá)水平也增高,而且增高水平與腫瘤的惡性程度、轉(zhuǎn)移行為正相關(guān)。且本人通過實驗證實ephrinA3在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮癌基因的作用，并且可能促進卵巢癌細(xì)胞的生長，與腫瘤組織的組織類型和侵襲性正相關(guān)[4]。綜上所述，Eph/Ephrin受體配體有可能成為多種腫瘤診斷和治療的新靶點。

為了進一步研究ephrinA3對卵巢惡性腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、遷移等生物特性中的作用機制，我們將ephrinA3轉(zhuǎn)染至SKOV3細(xì)胞。免疫組化檢測顯示，ephrinA3能明顯增加SKOV3細(xì)胞的侵襲及遷移能力。卵巢惡性腫瘤預(yù)后差，與腫瘤細(xì)胞侵襲能力強有密切關(guān)系。本研究初步證明，下調(diào)ephrinA3的表達(dá)后，SKOV3細(xì)胞的侵襲能力被顯著抑制。上調(diào)ephrinA3提高了卵巢SKOV3細(xì)胞的侵襲、增殖和遷移能力，并且抑制其凋亡，本研究初步表明，干擾ephrinA3的表達(dá)能影響卵巢癌SKOV3細(xì)胞的生物學(xué)特性。

綜上所述，下調(diào)ephrinA3表達(dá)能夠顯著抑制卵巢癌細(xì)胞SKOV3的增殖、遷移并促進凋亡，有望為卵巢癌的臨床治療提供新的策略。但是Eph/Ephrin受體配體之間關(guān)系錯綜復(fù)雜，且在不同部位腫瘤中表達(dá)高低不同。因此研究其在惡性腫瘤中的作用機制將為今后腫瘤的診療方向提供新的線索。