潘 靜 顏丹紅 屠昌鵬 龔 芬

（浙江省玉環(huán)市農(nóng)業(yè)農(nóng)村和水利局，浙江 玉環(huán)317600）

榆黃蘑是一種藥食兩用菌，味道鮮美，營養(yǎng)豐富，具有降壓、預防腫瘤及延緩衰老的功效，市場前景廣闊[1]。菌種（包括母種、原種和栽培種）生產(chǎn)是榆黃蘑栽培的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，關(guān)系到榆黃蘑的產(chǎn)量和質(zhì)量。

1 榆黃蘑菌種分級

1.1 母種

母種是榆黃蘑孢子分離或組織分離獲得的純試管種，也叫一級菌種。母種分離培養(yǎng)的質(zhì)量直接關(guān)系到原種和栽培種的遺傳和生理特性，關(guān)系到榆黃蘑子實體的產(chǎn)量和品質(zhì)，是制種過程中最關(guān)鍵的一個環(huán)節(jié)，必須經(jīng)過提純、篩選、試種、出菇、鑒定。母種大多使用以試管為容器、以瓊脂為凝固劑的培養(yǎng)基。母種可以進行擴管。

1.2 原種

將母種在木屑、棉殼、麩皮等基質(zhì)或麥?；|(zhì)上擴大繁殖，成為原種，也叫二級菌種。1支母種可移接4～6瓶（袋）原種。原種可直接用于生產(chǎn)，但因其數(shù)量少，生產(chǎn)上使用成本高，往往需要進一步擴繁。

1.3 栽培種

栽培種是指由原種擴培而成的直接用于生產(chǎn)的菌種，又稱生產(chǎn)種、三級菌種。一般每瓶原種可擴接栽培種25～30瓶（袋）。

經(jīng)過母種、原種、栽培種的擴大繁殖，菌絲更加粗壯，其分解基質(zhì)的能力更強，子實體高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)。

2 母種制作

2.1 母種培養(yǎng)基配方

一般母種培養(yǎng)基配方有2 種。（1）馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂（PDA）培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮）200 g，瓊脂20 g，葡萄糖20 g，水1 000 mL，pH值5.5～6.0；（2）PDA綜合培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，磷酸二氫鉀2 g，硫酸鎂2 g，瓊脂20 g，水1 000 mL，pH值5.5～6.0。

2.2 制作

配方1 和配方2 培養(yǎng)基制作方法相同，磷酸二氫鉀和硫酸鎂應先分別溶解后再混合。將馬鈴薯（不干縮、無病蟲、未出芽）洗凈去皮，稱取200 g，切成薄片；蒸鍋中加入清水1 000 mL，放入馬鈴薯煮沸，至薯片酥而不爛，時間約15 min；用4 層紗布過濾溶液，取其汁液，將濾液置于鍋中，加入瓊脂，小火加熱，并用玻璃棒不斷攪拌，以防汁液溢出和焦底；加入葡萄糖，用熱水補足1 000 mL，最后測定并調(diào)節(jié)pH 值至所需范圍。配制好的培養(yǎng)基趁熱分裝入試管（培養(yǎng)基不可沾到試管口），裝入量為試管長度的1/5～1/4。分裝完畢后，試管塞上棉塞或硅膠塞，要求松緊合適，確保既可通氣又能防止雜菌侵入。棉塞應用干凈普通棉花制作，脫脂棉易吸潮感染雜菌。

2.3 滅菌

每7支試管用橡皮筋捆好，管塞部分用報紙或牛皮紙包扎，然后將試管豎直放入高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌。滅菌時，排干鍋內(nèi)冷空氣，壓力達到103 kPa（121.3 ℃）后維持30 min。試管滅菌后溫度降至60 ℃時，在桌上放1根1 cm厚木條，將試管傾斜放在桌上，斜面長度為試管總長度的2/3～3/4，培養(yǎng)基冷卻凝固后即成斜面培養(yǎng)基。

2.4 接種

可在接種箱內(nèi)或超凈工作臺上接種。嚴格按照無菌操作規(guī)程切下1 塊母種的菌絲體，然后迅速接到斜面培養(yǎng)基的中央，接種動作要快而且菌絲體不可接觸到其他物品。最后將試管置于25 ℃條件下恒溫培養(yǎng)。

3 原種和栽培種制作

由于母種數(shù)量少，生活力弱，應選擇菌絲健壯潔白、生長旺盛、無老化、無雜菌感染的母種試管進行原種和栽培種的擴大培養(yǎng)[2]。制作生產(chǎn)工藝流程為配料-裝瓶（袋）-滅菌-接種-培養(yǎng)。

3.1 培養(yǎng)基配制

（1）木屑、棉籽殼培養(yǎng)基：闊葉樹木屑40%，棉籽殼40%，麩皮或米糠15%，玉米粉3%，石膏1%，蔗糖1%，料水比為1∶（1.1～1.2）;（2）棉籽殼、麩皮培養(yǎng)基：棉籽殼77%，麩皮20%，石膏1.5%，白糖1%，石灰0.5%，料水比為1∶（1.2～1.3）;（3）木屑、麩皮培養(yǎng)基：木屑82%，麩皮16%，石灰1%，石膏1%，料水比為1∶（1.2～1.3）；（4）麥粒培養(yǎng)基：麥粒94%，麩皮5%，石膏1%，含水量50%左右。

3.2 制作

（1）配方1、配方2、配方3 制作方法：按配方稱取原料，先將不溶于水的原料混拌均勻，再將蔗糖等溶于水后加入料中，邊灑水邊拌料，最后用拌料機攪拌2～3次即可裝瓶（袋）。（2）配方4制作方法：選擇無霉變、無蟲蛀、籽粒飽滿的陳麥，置于2%石灰水中浸泡（夏季浸泡24 h，冬季浸泡48 h），然后用清水沖洗干凈，置于鍋中煮至膨大變軟、無白心不破皮時撈出瀝干水分，稍晾后拌入麩皮等輔料，裝瓶滅菌。

3.3 裝瓶或裝袋

原種一般以裝瓶為好，栽培種可裝瓶或裝袋。原種可選用專用菌種瓶，要求透明度好，便于觀察菌絲生長情況。裝瓶時，一般先裝入2/3，然后手握瓶頸，將瓶底在手掌上叩幾下，讓培養(yǎng)料自然下沉，然后繼續(xù)裝到瓶頸，再用搗棒壓實、壓平。培養(yǎng)料以裝至瓶肩為宜，要求松緊適度，上緊下松，便于菌絲生長，一般以翻瓶倒不出料為宜。培養(yǎng)料裝瓶或裝袋后，用接種棒打一深孔（麥粒培養(yǎng)基不需要打孔），用于接種，最后用清水洗凈瓶的外壁及瓶頸上部內(nèi)壁，然后封口。

3.4 滅菌

將栽培瓶放入高壓鍋內(nèi)，當壓力穩(wěn)定在147 kPa 時開始計時，木屑棉籽殼培養(yǎng)基維持2～3 h、麥粒培養(yǎng)基維持3～4 h。如果栽培種采用聚乙烯袋，則采用常壓滅菌方法，100 ℃維持10～12 h。

4 接種

滅菌后的培養(yǎng)基經(jīng)冷卻后出鍋，溫度降至28 ℃以下時即可接種。接種必須嚴格按無菌操作要求進行。接種前檢查菌種質(zhì)量，使用菌齡適中、菌絲生長健壯、無污染的菌種。

4.1 原種接種

用已消毒的接種鉤切下1塊母種的菌絲體及培養(yǎng)基，在酒精燈無菌區(qū)快速接入原種瓶，將瓶口和棉塞過火滅菌后塞緊。一般1支母種可轉(zhuǎn)接4～6瓶原種。

4.2 栽培種接種

栽培種直接用于生產(chǎn)，因此其培養(yǎng)基應盡量和栽培料相近，以便菌種迅速適應栽培料配方。栽培種較原種應適當增大接種量，以盡快封閉料面，縮短發(fā)菌時間。把處理好菌皮、老接種塊的原種迅速接入栽培種中，一般1瓶原種可接種25～35瓶栽培種。接種后，用火焰灼燒瓶口，蓋上棉塞，最后移入培養(yǎng)室培養(yǎng)。

5 發(fā)菌管理

培養(yǎng)料接種后移入培養(yǎng)室培養(yǎng)。最初幾天，室溫控制在24～28 ℃，以利菌絲定植，此時菌瓶應豎直放置；7 d后挑出被污染瓶（袋），未萌發(fā)的及時補種。待菌種萌發(fā)封面后菌瓶改為橫臥放置，溫度降至22～24 ℃，每周檢查1次。室內(nèi)保持干燥，要求較暗或黑暗，濕度控制在50%～60%。每天通風，保持空氣新鮮；每隔7 d消毒1次，保證室內(nèi)清潔，做好殺蟲防鼠工作。

6 菌種質(zhì)量鑒別

（1）直觀法：新引進或剛分離的菌種，可通過肉眼觀察其菌絲生長情況，再用鼻子聞氣味，如菌絲潔白濃密，生長整齊，無霉味，則為優(yōu)良菌種。（2）培養(yǎng)鑒定法：將菌種接在固體培養(yǎng)基上，置于恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，觀察其生長情況和抗逆性，如果菌絲萌發(fā)快、生長迅速、健壯有力，且菌絲長勢均勻一致，抗逆性強，則為優(yōu)良菌種。（3）鏡檢鑒定法：選取少量菌絲制片，鏡檢觀察。有榆黃蘑特征、無雜菌孢子或其他菌絲體，則為優(yōu)良菌種。（4）出菇試驗鑒定：出菇試驗可直觀篩選優(yōu)良菌株，為大批量生產(chǎn)提供參考和菌種。

在實際生產(chǎn)中，直觀法可容易鑒別栽培種的好壞，質(zhì)優(yōu)的栽培種有榆黃蘑特有的清香氣味，其菌絲潔白濃密，不松散，菌袋內(nèi)培養(yǎng)料含水量適當，不干燥，不積水[3]。菌種表面出現(xiàn)子實體原基，不是菌種老化，而是成熟的標志。當培養(yǎng)基表面出現(xiàn)大量黃豆大小的原基時，表明菌種已成熟過度，應立即使用。