李守杰
(渭南職業(yè)技術學院,陜西 渭南 714000)
賈第鞭毛蟲是可感染人、寵物犬貓等的重要人獸共患致病性寄生蟲[1]。在分類學上賈第蟲屬于原生動物門、鞭毛蟲總綱、動物鞭毛蟲綱、雙滴目、六鞭科、賈第屬。根據(jù)顯微鏡下形態(tài)學差異、超微結構和宿主來源,目前將賈第蟲分為6種:敏捷賈第蟲、蒼鷺賈第蟲、鸚鵡賈第蟲、微小賈第蟲、鼠賈第蟲和藍氏賈第鞭毛蟲[2]。近年來,黑龍江省、四川省、河南省和上海市等地都有犬貓賈第蟲流行情況及感染的報道[3]。犬賈第蟲感染率比貓高,部分地區(qū)可高達25.20%,嚴重影響犬的生長發(fā)育[4]。臨床上貓的發(fā)病報道較少,但群飼的貓易感染賈第蟲。貓由于群居環(huán)境不衛(wèi)生,特別是糞便、水的污染等是導致貓感染賈第鞭毛蟲病逐漸增多的主要原因[5]。
犬作為家養(yǎng)動物或?qū)嶒瀯游?,與人類關系密切,可作為賈第蟲感染的儲蓄宿主,具有傳播感染的潛力[6-7]。絕大多數(shù)犬和貓感染后,糞便中雖有卵囊排出,但無特別明顯的臨床癥狀。少數(shù)成年犬感染后,呈短暫的間歇性腹瀉或慢性腹瀉,排出含大量泡沫樣的稀便,且糞便惡臭,顏色暗淡或呈脂肪痢,精神沉郁,食欲減退,漸進性消瘦以及貧血、嘔吐,體溫一般不高。剖檢時可見腸道不同程度的潰瘍、出血,小腸、大腸中亦可見蟲體。仔犬窩內(nèi)的交叉感染率較高,可達100%,癥狀也較重,表現(xiàn)為精神沉郁,并有先急后重及間歇性腹瀉,糞便呈現(xiàn)灰色,并帶有黏液和血液,且腹瀉2 d后開始出現(xiàn)脫水、消瘦等癥狀。貓感染后幼貓可見腹壁脹氣,大便黃色糊狀,肛門松弛,被毛粗糙,偶有帶血或果凍樣稀便。成年貓幾乎不呈現(xiàn)腹瀉癥狀,但會成為潛在的帶毒者。感染后糞便中往往會有蟲體排出,如有其他貓或別的寵物食入糞便,或污染了食物或飲水,則食入者就有可能感染賈第鞭毛蟲。
在國外寵物犬貓賈第蟲病研究中,發(fā)現(xiàn)歐洲犬樣品8 000多只和貓樣品4 000多只,其中分別有24.8%和20.3%的樣品呈賈第蟲陽性,<6月齡的犬和貓感染率高[8]。在德國,犬和貓感染此病的幾率差不多是英國、西班牙、荷蘭和意大利的2倍,比利時感染率更高。我國調(diào)查顯示,犬賈第蟲陽性率為4.5%~25.2%。幼齡犬更容易感染賈第蟲的原因,可能與其免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善有關[9-10]。雌性犬和雄性犬賈第蟲陽性率無統(tǒng)計學意義(P<0.05)[11]。這一流行性的原因可能與貓個體免疫力、臨床診斷手段和診斷技術的提升、貓的壽命增加等多種原因有關。因此,在對犬貓進行臨診時,發(fā)現(xiàn)急慢性腹瀉,都應對其進行合理懷疑及檢查,以免錯過最佳治療時間,增加感染其他動物的機會。
賈第鞭毛蟲屬于兼性厭氧真核生物,賈第蟲缺乏線粒體、過氧化物酶體、高爾基復合體等細胞器,但有細胞骨架[12]。生活史中包括滋養(yǎng)體和包囊兩個階段。滋養(yǎng)體為營養(yǎng)繁殖階段,包囊為傳播階段[13]。賈第蟲的傳播以包囊為主,包囊隨糞便排出體外后,會污染食物和水,在被犬貓食入后而感染。目前,牡蠣等貝類水產(chǎn)動物體內(nèi)已發(fā)現(xiàn)有賈第蟲的感染,犬貓生食或半生食這些水產(chǎn)動物也會感染。包囊在十二指腸內(nèi)脫囊變成滋養(yǎng)體,在腸壁和膽囊中寄生并繁殖。犬的滋養(yǎng)體一般在小腸上段,貓則在小腸下段。滋養(yǎng)體在寄生和繁殖時,會引發(fā)腸炎。滋養(yǎng)體到達腸后端,形成包囊,隨后隨糞便排出體外。賈第蟲的致病機制尚不完全清楚,一般認為,患病犬貓發(fā)病情況與自身的免疫力和抵抗力、蟲株毒力、飼養(yǎng)環(huán)境等多種影響因素有關。一旦出現(xiàn)嚴重感染,蟲體寄生在腸道內(nèi),容易形成機械性阻塞。蟲體滋養(yǎng)體通過吸盤吸附于腸黏膜上又會形成機械性刺激,出現(xiàn)炎性反應,對腸黏膜造成一定程度的損傷;蟲體分泌物和代謝產(chǎn)物對腸黏膜、微絨毛也會產(chǎn)生不同的刺激,導致腸功能出現(xiàn)紊亂。賈第蟲宿主的感染具有一定的特異性。溫少芳等認為賈第蟲可分為聚集體A、B、C、D、E 5種,且賈第蟲株聚集體D為犬科動物特有的基因型,不會感染人和其他動物[14]。齊萌等認為,A和B群主要感染人,C和D群主要感染犬,E群主要感染牛、羊、豬、馬等,F(xiàn)群主要感染描,G群主要感染鼠,A群有時也會感染貓[15]。
目前,國家標準中并未列出藍氏賈第鞭毛蟲的檢測方法。近些年,犬貓賈第鞭毛蟲的診斷主要采用病原學診斷、免疫學診斷、分子生物學等診斷方法。其中,直接鏡檢法、快速姬姆薩染色法和多重PCR方法在臨床上均能快速檢出賈第鞭毛蟲,可用于賈第鞭毛蟲病的快速診斷。
賈第鞭毛蟲的形態(tài)學研究起步較晚。最初,研究者為了研究藍氏賈第鞭毛蟲的結構,采用直接鏡檢法或者快速姬姆薩染色法進行診斷。實時動態(tài)顯微視頻攝錄技術也在跟蹤和監(jiān)測寄生蟲方面能起到很大作用,可觀察到滋養(yǎng)體和包囊的典型形態(tài)及運動方式。陳陽等用改良TYI-S-33培養(yǎng)基對滋養(yǎng)體進行培養(yǎng),用透射電鏡觀察蟲體的超微結構,結果觀察到蟲體的質(zhì)膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核膜、核質(zhì)、核仁以及二聯(lián)微管結構[16]。
3.1.1 直接鏡檢法診斷
糞便鏡檢是臨床常用的簡單可靠的診斷方法,通常是采集寵物犬貓的腹瀉糞便,采用直接涂片法可以觀察到滋養(yǎng)體。在犬貓患病急性或間斷腹瀉期間,糞便多呈水樣或糊狀,檢查時為避免滋養(yǎng)體死亡應采集新鮮標本。送檢的標本應注意保溫,以確保滋養(yǎng)體保持一定的活力。在疾病的后期,假如糞便已基本成形,為了檢測包囊,一般可采用2%的碘液直接涂片法即可確診。為了提高檢出率,亦可采用相對密度1∶18的硫酸鋅浮聚或醛-醚濃集等方法,但在蔗糖或其他漂浮液中包囊會收縮變形影響鑒別。因為包囊是間斷排出的,檢查時可增加檢查頻率來提高檢出率。相差顯微鏡有助于鑒別賈第蟲滋養(yǎng)體和包囊。如果沒有相差顯微鏡的話,在蓋玻片邊緣加盧戈氏碘液1滴,使滋養(yǎng)體和包囊著色,增加蟲體內(nèi)細胞核的反差,使之更容易鑒定。賈第蟲包囊在無癥狀宿主的正常糞便中同樣能夠觀察到。但也有少數(shù)病例雖然出現(xiàn)了臨床癥狀,但容易造成漏檢,在糞便中既找不到包囊,也找不到滋養(yǎng)體,所以需要多次采集進行鑒定為宜。
3.1.2 快速姬姆薩染色法診斷
采用此方法檢查時,取待測糞便樣本,置潔凈離心管中,加入磷酸鹽緩沖液稀釋,混勻,室溫靜置5 min,取中上層液體做滴片,姬姆薩快速染色,動態(tài)顯微鏡觀察結果[17]。也可利用內(nèi)窺鏡摘取黏膜組織,制作壓片,固定,姬姆薩染色觀察,可見鞭毛蟲著紫色,腸上皮細胞呈粉紅色。如果是剖檢的寵物腸樣本,可用新鮮配制的姬姆薩液,對樣本中鮮活蟲體進行快速染色,利用動態(tài)顯微攝錄,觀察、記載蟲體特征,隨后進行鑒定。
酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。既可以檢測抗體,也可以檢測抗原,診斷陽性率高,但操作過程較為煩瑣,且對熒光顯微鏡要求高。間接熒光抗體試驗(IFA)是用熒光標記抗體方法進行檢驗[18]。對流免疫電泳(CIE)法是通過檢測糞內(nèi)抗原進行確定,診斷可靠性較高。
生物素標記賈第蟲滋養(yǎng)體全基因組DNA近年來已獲得較大突破。鄧國超等研究了貓源賈第蟲EF1α和GDH基因的擴增與分析,首次采用兩組引物EF1-F、EF1-R和GDHeF、GDHiF、GDHiR通過普通PCR及套式PCR方法對兩基因片段進行特異性擴增,為賈第蟲分子學研究奠定了基礎[19]。張萍等針對犬源賈第蟲16S rRNA基因片段設計一對引物,建立了賈第蟲DNA的SYBR GreenⅠreal-time PCR檢測方法[20]。顧有方等首先對糞樣基因組DNA提取。按糞便DNA提取試劑盒說明書操作。所得DNA溶于50 μL洗脫緩沖液(TB)中,并于20℃保存?zhèn)溆?。然后采用基因的巢式PCR方法對所有糞樣進擴增,并對獲得的陽性擴增產(chǎn)物進行測序和生物信息學分析,最后確定藍氏賈第鞭毛蟲的聚集體。李雅文等應用PCR技術對廣州市某寵物寄養(yǎng)所采集的一株D型犬源賈第蟲和一株F型貓源賈第蟲的核糖體IGS序列進行了擴增、克隆、測序,并建立了PCR檢測方法[21]。結果顯示D型犬源賈第蟲和F型貓源賈第蟲的IGS序列存在多態(tài)性現(xiàn)象,種間差異明顯。
犬感染賈第蟲病使用甲硝唑是臨床首選的治療藥物,然而有效率在50%~60%,比較低。同時在狗貓身上應用也有一定安全顧慮,甲硝唑?qū)Z第蟲有直接殺滅作用,也能干擾白胞與內(nèi)皮細胞的黏附作用、抑制炎癥細胞的移行,起到免疫調(diào)節(jié)、增強免疫功能[22]。另外,甲硝唑的硝基還原中間代謝產(chǎn)物,對病變黏膜尚有修復作用。但甲硝唑胃腸道反應較強,所以要謹慎使用。甲氰咪胍可減少胃酸分泌,對抑制甲硝唑的消化道不良反應有效。甲氰咪胍還可阻滯腸上皮肥大細胞、嗜鉻細胞釋放組胺和5-羥色胺,而使胃腸蠕動減慢,有利于腸道黏膜損傷修復。阿苯達唑治療賈第鞭毛蟲也有效,但是對于貓狗并不安全。歐洲批準了芬苯達唑用于狗的賈第鞭毛蟲感染治療,治療時,可按照50 mg·kg-1,1次·d-1,連用3~5 d,能夠有效驅(qū)除狗的賈第鞭毛蟲感染[23]。雙羥萘酸噻嘧啶和吡喹酮的復方制劑,可以用于狗的賈第鞭毛蟲治療,1次·d-1,連用3 d。羅硝唑既有驅(qū)蟲作用,也有抗菌作用,對賈第鞭毛蟲病的治療效果也明顯。呋喃唑酮(使用5 d)的療效與甲硝唑相近,臨床多用混懸劑,這樣更易于治療感染幼貓。丙硫咪唑(貓連續(xù)用5 d)和芬苯達唑(貓均使用5 d)治療本病同樣有效??诜嫦踹?qū)θ堎Z第蟲感染治療效果也較好,療程為6~7 d,臨床應注意個別犬貓容易出現(xiàn)胃腸道反應。
脫水是患病犬貓的普遍并發(fā)癥,嘔吐、腹瀉都可能導致脫水?;疾∪埫撍罂沙霈F(xiàn)厭食、昏睡、虛脫。脫水的治療主要是采用靜脈輸液來糾正脫水狀態(tài),并解決電解質(zhì)和酸堿紊亂問題。臨床往往根據(jù)脫水的程度進行補液,并隨時調(diào)整補液量。
食欲對犬貓的恢復起著很關鍵的作用,且影響到患病犬貓的生存質(zhì)量。食欲減退會降低犬貓對疾病的抵抗力。嘔吐要注意積極治療,因為嘔吐會導致脫水、低血鉀癥、酸中毒等。食欲不振時,應減少飲食中蛋白質(zhì)的攝入量。惡心和嘔吐的治療可使用H2抗組胺藥抑制胃酸、使用愛茂爾等止吐藥抑制惡心和嘔吐、使用硫糖鋁保護黏膜等。
美國富道動物保健公司生產(chǎn)的犬的Giardia Vax和貓的Fel-O-VaxGiardiat已批準用來預防犬的賈第蟲病,并且已向美國農(nóng)業(yè)部提交了使用效果的數(shù)據(jù)作為獲準的部分材料。然而,多數(shù)獸醫(yī)認為這些疫苗使用價值不大,只有少數(shù)人認為有效。所以,疫苗預防賈第蟲病還存在很多爭議。
定期進行體內(nèi)外驅(qū)蟲,對控制賈第鞭毛蟲病的發(fā)病效果良好。犬的常規(guī)體內(nèi)驅(qū)蟲推薦選擇拜寵清(1次·90 d-1)或者犬心寶(驅(qū)蟲種類最多,除腸道寄生蟲還可驅(qū)心臟寄生蟲,要求1次·30 d-1),體外驅(qū)蟲推薦福萊恩,夏秋季1次·30 d-1,冬春季1次·90 d-1;貓的常規(guī)體內(nèi)驅(qū)蟲推薦選擇貓寵清(1次·90 d-1)。體外驅(qū)蟲推薦福萊恩或者大寵愛,如果散養(yǎng),建議體外驅(qū)蟲1次·30 d-1。如果家養(yǎng),則1次·90 d-1進行體外驅(qū)蟲。群養(yǎng)犬貓爆發(fā)賈第鞭毛蟲感染時,必須要對全群一起投放抗賈第鞭毛蟲的藥物,如僅對發(fā)病的犬貓作治療處理,其糞便中排泄出的滋養(yǎng)體或包囊又會感染群內(nèi)其他犬貓,造成疾病繼續(xù)傳播。
賈第鞭毛蟲屬于人畜共患傳染病,在人類及犬貓之間是會互相傳染的,尤其對于抵抗力差的兒童及老人或免疫不全患者而言,要謹慎預防賈第鞭毛蟲感染。所以在處理犬貓的糞便時,應該注意到衛(wèi)生防護的問題,如果犬貓被確認感染,應避免讓小孩、老人及免疫功能差的人來處理貓咪的排泄物。
新購入的犬貓應先進行隔離及檢驗,確認無賈第鞭毛蟲病原攜帶后才能和其他犬貓混養(yǎng)。尤其犬貓感染賈第鞭毛蟲后,可能沒有任何的臨床癥狀,但在抗病能力下降及年老、虛弱的時候,賈第鞭毛蟲就會大量增殖,并造成胃腸道癥狀,亦會危害其他健康犬貓。
賈第鞭毛蟲作為一種人獸共患寄生蟲病,越來越得到人們的重視,犬貓作為中間宿主,在其感染后積極治療,對于犬貓自身或者人類的健康都有積極意義。特別是隨著科學技術的發(fā)展,診斷手段和治療方法也將越來越多。在賈第鞭毛蟲病的診治過程中,要注意以下幾點。要對可疑患病犬貓作積極診斷,盡早確診。使用驅(qū)蟲藥物時,建議兩種藥物作交替使用或聯(lián)合使用,以防賈第鞭毛蟲可能會對某些藥物產(chǎn)生抵抗力。盡量選用優(yōu)質(zhì)日糧,增加寵物犬貓的抗病能力,尤其要注意在患有其他疾病或存在免疫缺陷時,會增加感染賈第鞭毛蟲病的機會,或者在感染后增加治療難度。日常飼養(yǎng)中,要注意環(huán)境的定期消毒,不要忽視賈第鞭毛蟲卵對外界環(huán)境較強的抵抗力,這會增加犬貓重復感染的幾率??傊?,一旦確診本病,應盡早制定科學的治療方案,在用藥的同時,盡量保持足夠的營養(yǎng)攝入,積極治療并發(fā)癥,增加犬貓抗病能力。當然,這些問題的實現(xiàn)需要其主人的積極配合,真正完全治愈,還要依靠實驗室的定期監(jiān)測。