馮言言，孔梅，孟芳，鄭莉，林紅，李龍飛，田振平，劉義明 ，吳連勇

（1.齊魯動物保健品有限公司，濟(jì)南 250100；2.齊魯晟華制藥有限公司，德州 251500；3.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，北京 100081）

頭孢洛寧，為半合成的第一代頭孢菌素類抗生素，由默沙東公司開發(fā)，商品名為Cepravin?，目前在歐盟及英聯(lián)邦國家范圍內(nèi)廣泛使用，可用于治療奶牛干乳期乳房炎以及預(yù)防乳房內(nèi)新增感染，還可作為眼用軟膏，治療由敏感菌引起的牛角膜炎、結(jié)膜炎[1～3]。頭孢洛寧為白色或類白色結(jié)晶性粉末，分子式為C20H18N4O5S2·2H2O，相對分子質(zhì)量為494.54，極微溶于水和甲醇，易溶于二甲基亞砜，不溶于二氯甲烷、96%乙醇和乙醚，可溶解于稀酸和稀堿溶液[1,2]。

頭孢洛寧抗菌譜廣，對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均有較強(qiáng)的抗菌活性，并且對產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶菌有很好的作用。頭孢洛寧敏感菌包括金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、乳房鏈球菌、停乳鏈球菌、大腸桿菌、化膿隱秘桿菌、枸櫞酸桿菌、潰瘍棒狀桿菌、克雷伯菌、變形桿菌等。頭孢洛寧在獸醫(yī)臨床上主要用來治療奶牛干乳期乳房炎以及預(yù)防乳房內(nèi)新增感染[3～7]。本試驗(yàn)觀察了頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）對干乳期奶牛乳房感染的治療和預(yù)防作用，為臨床合理安全用藥提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間和地點(diǎn)

本試驗(yàn)于2016年8～11月，在北京市4個(gè)大型奶牛場進(jìn)行。

1.2 受試藥物與對照藥物

1.2.1 受試藥物 頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期），規(guī)格：250mg/3g；批號1511001，由齊魯動物保健品有限公司提供。

1.2.2 對照藥物 芐星氯唑西林乳房注入劑，規(guī)格：50萬IU/10mL；批號20151218，由國內(nèi)某藥業(yè)有限公司提供。

1.3 試驗(yàn)動物選擇及采樣

從4個(gè)試驗(yàn)?zāi)翀龅? 000余頭奶牛中挑選臨近干乳期的奶牛60頭，用于本次臨床治療及預(yù)防試驗(yàn)。所選奶牛在試驗(yàn)前30d內(nèi)未全身性或乳房內(nèi)給予抗生素，除精神狀態(tài)稍差外，未表現(xiàn)其他明顯全身異常癥狀（如發(fā)熱、咳嗽、流鼻液、呼吸困難、腹瀉等）。

1.3.2 試驗(yàn)動物分組

將入選奶牛隨機(jī)分成4組，每組15頭，其中3個(gè)受試藥物組（I、II、III)，分別為頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）高、中、低劑量組；1個(gè)芐星氯唑西林乳房注入劑對照藥物組（IV組）。

1.3.3 樣品采集

試驗(yàn)?zāi)膛Ｔ谶M(jìn)入干乳期前采集兩次奶樣，給藥前1d采第一次奶樣，在給藥當(dāng)天注射干奶藥之前采集第二次奶樣，兩次采樣間隔24h；在干乳期結(jié)束產(chǎn)犢后第一次擠奶時(shí)采集第一次奶樣，24h后采集第二次奶樣，采樣時(shí)棄去前三把奶，用滅菌試管收集奶樣10～20mL，低溫（4℃）保存并于6h內(nèi)進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查。

1.4 用藥及觀察

受試藥物高劑量組向4個(gè)乳區(qū)分別注入2支頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）；中劑量組向4個(gè)乳區(qū)分別注入1支頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）；低劑量組向4個(gè)乳區(qū)分別注入1/2支頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）；對照藥物組向4個(gè)乳區(qū)分別注入1支芐星氯唑西林乳房注入劑。試驗(yàn)?zāi)膛３皇褂闷渌幬镏委熀皖A(yù)防乳房感染外，其他護(hù)理常規(guī)進(jìn)行。試驗(yàn)期間若出現(xiàn)其他疾病可能對本試驗(yàn)結(jié)果造成影響時(shí)，患牛將退出本試驗(yàn)，同時(shí)選擇相應(yīng)數(shù)量的奶牛補(bǔ)入本試驗(yàn)。

1.5 乳區(qū)SCC測定

試驗(yàn)?zāi)膛Ｔ谶M(jìn)入干乳期最后一次擠奶（用藥第0日）和下次產(chǎn)犢后第1日擠奶時(shí)，分別采集各乳區(qū)奶樣進(jìn)行SCC測定。

群落生物量按喬木層和灌草層分別調(diào)查。樣地中的胸徑(DBH)<3 cm 的喬木及喬木幼苗[24]和灌木統(tǒng)歸為灌木，進(jìn)行生物量和物種數(shù)測定。識別并登記20 m×20 m樣方內(nèi)樹高(TH)≥1.2 m和胸徑(DBH)≥3 cm的所有喬木物種。記錄3類系統(tǒng)中1 m×1 m樣方中草本的種類、多度以及次生林5 m×5 m灌木的種類、數(shù)量。草本、藤本和灌木生物量以全割法實(shí)測，取樣鮮重(G鮮)后帶回實(shí)驗(yàn)室，105℃殺青后，用電熱烤箱在80℃下烘干至恒重，稱干重(G干)，得到樣品含水量并計(jì)算樣點(diǎn)生物量。喬木生物量采用公式[25]計(jì)算。生物量均只包括地上部分。

1.6 乳區(qū)病原菌檢測

試驗(yàn)?zāi)膛Ｔ谶M(jìn)入干乳期最后一次擠奶的前1d和當(dāng)天，分別采集一次奶樣，產(chǎn)犢后0d和產(chǎn)犢后1d，分別采集一次奶樣。各時(shí)間點(diǎn)所采集的奶樣分別進(jìn)行致病菌的分離鑒定。

1.7 治療效果判定

統(tǒng)計(jì)各試驗(yàn)組奶牛給藥前兩次采集奶樣中致病菌檢出情況和產(chǎn)犢后兩次所采集奶樣中未檢出致病菌的乳區(qū)數(shù)，計(jì)算致病菌的感染率和治愈率；統(tǒng)計(jì)各試驗(yàn)組奶牛產(chǎn)犢后檢出致病菌和給藥前兩次采集奶樣中無此種致病菌檢出的乳區(qū)數(shù)，計(jì)算各試驗(yàn)組奶牛病原菌的新感染率。綜合評價(jià)藥物對干乳期奶牛乳房感染的治療與預(yù)防效果。

治療失敗：一種病原菌在治療后只要有一份樣品出現(xiàn)陽性培養(yǎng)結(jié)果（與治療前樣品中分離培養(yǎng)出的細(xì)菌相同）即為治療失??；

治愈：一種病原菌在干奶之前被分離出來且同樣的病原體在產(chǎn)后采集的此乳區(qū)樣本中未發(fā)現(xiàn)，則可認(rèn)為該乳區(qū)被治愈；

新感染：如果在產(chǎn)后分離出一種病原體，而在治療前的樣本中不存在該病原菌，則可認(rèn)為該乳區(qū)為新感染。

1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

通過統(tǒng)計(jì)高、中、低劑量組治愈率、新感染率及細(xì)菌分離培養(yǎng)情況，并與對照組進(jìn)行比較，以確定受試藥物防治干乳期乳房炎的臨床效果。使用SPSS 18.0軟件統(tǒng)計(jì)分析各受試藥物組之間以及與對照藥物組之間乳房炎主要致病菌治愈率的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 用藥前與產(chǎn)犢后的SCC測定結(jié)果

各試驗(yàn)組奶牛產(chǎn)犢后，牛初乳的性狀、顏色等與干乳前牛乳存在差異，SCC高于干奶前牛乳（表1）。

表1 試驗(yàn)?zāi)膛Ｓ盟幥昂彤a(chǎn)犢后牛乳SCC數(shù)據(jù)比較

2.2 乳區(qū)用藥前病原菌檢測結(jié)果

各試驗(yàn)組治療前分別兩次采集奶樣，給藥前1d各試驗(yàn)組乳區(qū)細(xì)菌分離情況見表2。由相關(guān)數(shù)據(jù)可知：給藥前1d采樣時(shí)，高劑量組奶牛乳區(qū)感染率為43.33%(26/60)；中劑量組為40.00% (24/60)；低劑量組為38.33% (23/60)；對照組為40.00% (24/60)。4個(gè)試驗(yàn)組單一感染率和混合感染率分別在62.50%～84.62%及15.38%～37.50%范圍內(nèi)。

表2 給藥前1d各試驗(yàn)組干奶前乳區(qū)細(xì)菌分離情況

表3 給藥前0d各試驗(yàn)組乳區(qū)細(xì)菌分離情況

給藥前0d各試驗(yàn)組乳區(qū)細(xì)菌分離情況見表3。由相關(guān)數(shù)據(jù)可知：給藥前0d采樣時(shí)，高劑量組奶牛乳區(qū)感染率為40.00% (24/60)；中劑量組為38.33%(23/60)；低劑量組為38.33% (23/60)；對照組為40.00%(24/60)。4個(gè)試驗(yàn)組單一感染率和混合感染率分別在69.57%～83.33%及16.67%～30.43%范圍內(nèi)。

2.3 用藥后癥狀觀察

各組奶牛用藥后體溫、呼吸、采食等表現(xiàn)正常。未見頭孢洛寧乳房注入劑 （干乳期）和對照藥物對奶牛造成的不良反應(yīng)，如乳房局部腫脹、疼痛、發(fā)熱等。

2.4 干乳期結(jié)束后乳房炎主要致病菌的分離情況

表4 產(chǎn)犢后各試驗(yàn)組乳房炎主要致病菌分離情況

由表4可以看出，干乳期奶牛乳區(qū)灌注高、中、低劑量的頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）和芐星氯唑西林乳房注入劑均能對乳房炎主要致病菌的清除起到良好的作用。高劑量組由給藥前兩次采樣的58株減少到產(chǎn)犢后兩次采樣的10株；中劑量組由63株減少到14株；低劑量組由57株減少到22株；對照藥物組由63株減少到25株。與對照藥物芐星氯唑西林乳房注入劑相比，高、中劑量的頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）對干乳期乳房炎主要致病菌有更好的清除效果；低劑量的清除作用與對照藥物組相當(dāng)。

2.5 產(chǎn)犢后試驗(yàn)?zāi)膛Ｈ榉績?nèi)致病菌的清除情況及新增感染情況

表5 各試驗(yàn)組產(chǎn)犢后乳房炎主要致病菌治愈情況

表6 各試驗(yàn)組產(chǎn)犢后乳房炎主要致病菌新感染情況

由表5、6可知，不同劑量受試藥物和對照藥物對乳房炎主要致病菌（乳房鏈球菌、無乳鏈球菌、金葡菌、大腸桿菌）均具明顯的清除作用。高、中、低劑量受試藥物對乳房鏈球菌、無乳鏈球菌、金葡菌、大腸桿菌的治愈率分別為83.33%、100%、83.33%、87.5%，80%、75%、76.92%、81.82%，80%、75%、55.56%、72.73%；對照藥物對乳房鏈球菌、無乳鏈球菌、金葡菌、大腸桿菌的治愈率分別為66.67%、80%、77.78%、76.92%。4個(gè)試驗(yàn)組對4種主要致病菌的治愈率無顯著性差異（P＞0.05）。

受試藥物高、中劑量組奶牛產(chǎn)犢后分別僅有1例和2例大腸桿菌新增感染，低劑量組有1例金葡菌和2例大腸桿菌新增感染，而對照藥物組有1例無乳鏈球菌、2例葡萄球菌和2例大腸桿菌新增感染。說明高、中劑量組與低劑量組及對照藥物相比，在控制產(chǎn)后奶牛乳房炎主要致病菌新增感染方面有更優(yōu)效果。

3 討論

國內(nèi)外多篇文獻(xiàn)報(bào)道在奶牛干乳期乳房注入頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期），能夠有效治療由金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、乳房鏈球菌和大腸桿菌等細(xì)菌引起的乳房炎并預(yù)防乳房內(nèi)新增感染。

李維靜[8]進(jìn)行了頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）防治奶牛干乳期乳房炎的藥效學(xué)研究。試驗(yàn)隨機(jī)選擇60頭即將進(jìn)入干乳期的奶牛，在最后一次擠奶后每頭牛的每個(gè)乳區(qū)分別注入一支頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）。對入選的每頭奶牛分別在干奶前以及產(chǎn)后1、3、5d，采集每個(gè)乳區(qū)的乳樣進(jìn)行體細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)菌學(xué)檢查。給藥后至產(chǎn)后14d內(nèi)，每天對受試動物進(jìn)行臨床型乳房炎檢查。研究結(jié)果顯示，頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）對干乳期奶牛乳房炎具有良好的防治效果，能夠有效治療干乳期隱性乳房炎和預(yù)防新的乳房炎感染。

Petzer等[9]研究了包括頭孢洛寧在內(nèi)的6種乳房注入劑產(chǎn)品治療奶牛乳房內(nèi)細(xì)菌感染的療效。研究顯示，頭孢洛寧對奶牛乳房炎的治愈率最高，達(dá)93.9%，同時(shí)頭孢洛寧能夠明顯降低乳區(qū)的新增感染，新增感染率僅為13.4%，這表明頭孢洛寧能夠有效治療奶牛干乳期乳房內(nèi)細(xì)菌感染并能有效預(yù)防新增感染。

Owens等[10]研究了頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）治療乳房內(nèi)主要病原菌的療效。研究顯示，頭孢洛寧對乳房內(nèi)感染金黃色葡萄球菌的治愈率為100%，對葡萄球菌屬細(xì)菌的治愈率為85%，研究表明在干乳期使用頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）能夠有效治療乳房中的金黃色葡萄球菌等感染菌。

本試驗(yàn)中，頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）對引起奶牛乳房炎的病原菌具有明顯的清除作用，用藥后奶牛各乳區(qū)新增感染的病原菌減少。高、中劑量組奶牛產(chǎn)犢后分別僅有1例和2例大腸桿菌新增感染，低劑量組有1例金葡菌和2例大腸桿菌新增感染?？梢?，頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）能夠有效治療奶牛干乳期因敏感菌引起的乳房炎，并能有效預(yù)防乳房內(nèi)新增感染。

4 結(jié)論

頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期）能夠有效治療奶牛干乳期因敏感菌引起的乳房炎，并能有效預(yù)防乳房內(nèi)新增感染，可作為臨床上治療奶牛由金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、乳房鏈球菌和大腸桿菌等細(xì)菌引起的干乳期乳房炎以及預(yù)防干乳期奶牛乳房內(nèi)新增菌感染的優(yōu)選藥物使用。臨床使用方案為在最后一次擠奶后，排空乳房，乳管注入頭孢洛寧乳房注入劑（干乳期），每個(gè)乳室注入1支。