• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

      酶法輔助提取小米多酚的工藝研究

      2019-02-15 09:30:40魏春紅何麗娜丁聞浩鹿保鑫曹龍奎
      中國糧油學(xué)報 2019年1期
      關(guān)鍵詞:酶法液料小米

      魏春紅 何麗娜 丁聞浩 鹿保鑫 曹龍奎

      (黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)食品學(xué)院1,大慶 163319)(國家雜糧工程技術(shù)研究中心2,大慶 163319)

      小米(Setariaitalica),亦稱作谷子,是一類小種可食用禾本科植物的總稱,主要種植于干燥帶邊緣、溫帶、亞熱帶和熱帶地區(qū),是全球第六大重要谷物[1]。小米是我國一種主要食用的雜糧,產(chǎn)于東北、華北地區(qū)。小米富含蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素及優(yōu)質(zhì)的不飽和脂肪酸,具有防止動脈硬化、減少心腦血管疾病、降血壓和抗癌等重要作用[2],這些功能主要是由許多微量營養(yǎng)元素和小米中的植物化學(xué)物質(zhì),包括抗性淀粉、抗氧化劑如酚酸和類黃酮,以及激素活性化合物,如木脂素和植物甾醇[3],相比于其他的雜糧物質(zhì),小米中多酚的含量與種類更加的豐富[4]。

      近年來,多酚類物質(zhì)成為國內(nèi)外食品界研究的重點之一,大量的實驗與研究表明多酚類物質(zhì)具有獨特的生理功效與藥用價值,市場前景廣闊。其可以廣泛應(yīng)用于食品的抗氧化、防腐與澄清等方面;在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中,可與多種微量元素螯合物處理蘋果樹和銀杏樹,使蘋果增產(chǎn)19.8%~25.4%,銀杏葉增產(chǎn)25.5%[5];而在醫(yī)藥領(lǐng)域,還可作為抗菌、抗病毒、抗癌的天然藥物[6]。盡管多酚有諸多作用,但國內(nèi)多酚的提取率相對較低[7],而且提取方法的差異對提取率的影響非常大。為了有效獲取小米中的多酚,研究者們已通過多種途徑提取。最常用的方法是溶劑提取法[8],此法處理時間長、提取效率低,雖然通過一些輔助的提取方法如微波[9]、超聲波[10]等可以適當(dāng)?shù)奶岣叨喾拥牡寐蔥11-12],但始終無法避免大量有機試劑如乙醇的使用,造成了不可避免的環(huán)境污染和能源浪費。近幾年,一些研究人員利用酶法來輔助多酚的提取,取得了理想的效果[13-15],如利用木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白產(chǎn)物[16],利用α-淀粉酶水解制備銀杏抗性淀粉[17]。與其他方法相比,酶處理方法具有快速、高效、溫和、專一性強等諸多優(yōu)點,并且在成本和使用上更加簡便,對設(shè)備和工藝的要求也較少[18]。但目前,利用酶法提取小米多酚還鮮見報道。

      本研究利用小米作為原料,采取單因素與響應(yīng)面為研究手段,將酶法引入到小米中多酚的提取工藝中,以期提高小米中多酚的得率,為小米資源的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

      1 材料與方法

      1.1 原料

      武安小米:產(chǎn)于河北省邯鄲市武安市,蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)約為9.2%~14.3%,粗脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)3.0%~4.6%。

      沒食子酸:上海一研生物科技有限公司;福林酚:北京華邁科生物技術(shù)有限責(zé)任公司;木瓜蛋白酶(6 000 U/g):滕州市天水生物科技有限公司;α-淀粉酶(40 000 U/g):邢臺萬達(dá)生物工程有限公司;DPPH、TPTZ:美國Sigma公司。

      1.2 主要儀器設(shè)備

      WKF-20BZ高速萬能粉碎機:北京格瑞德曼儀器設(shè)備有限公司; SP-752/752PC紫外可見分光光度計:上海光譜儀器有限公司; CTK120C離心機:湘儀離心機儀器有限公司。

      1.3 方法

      1.3.1 酶法輔助提取工藝流程及操作要點

      小米→40 ℃烘箱處理5 h→粉碎篩分→稱取定量樣品按0.8%添加酶液→設(shè)定酶解條件→過濾→離心→上清液→定容→檢測多酚含量。

      將小米去雜、磨碎、過篩,準(zhǔn)確稱取一定量的小米粉,加入石油醚索式抽提得到小米脫脂產(chǎn)物,4 ℃下儲藏備用。精密稱取一定質(zhì)量脫脂小米粉放入錐形瓶中,調(diào)整其pH至5.0,隨后加入1%的木瓜蛋白酶與α-淀粉酶,二者比例為1∶1(m/m),分別調(diào)整不同的酶的添加量、酶解時間跟酶解溫度,過濾,收集濾液,將濾液離心得到上清液,減壓蒸餾得到濃縮液,取濃縮液1 mL定容至10 mL,測吸光度并計算多酚得率。

      1.3.2 多酚含量測定方法

      1.3.2.1 總酚標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

      精確稱取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品25 mg,去離子水溶解后定容于250 mL容量瓶中,得0.1 mg/mL的對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取對照樣品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL于10 mL容量瓶中,再加入1 mL Folin-Cio-calteau試劑,搖勻后加入2 mL 15%Na2CO3溶液定容10 mL,常溫下讓其反應(yīng)2 h,在760 nm處測定其吸光值。得回歸方程為:y=12.861x+0.0829,R2=0.999 0。Y為吸光度值,X為沒食子酸含量(mg)。

      1.3.2.2 總多酚含量的測定

      以Foiri-Ciocalteu法[19]測定總多酚含量,以沒食子酸作為標(biāo)準(zhǔn)物。

      用移液槍移取1mL待測樣品,添加Foiri-Ciocalteu溶液,隨后,添加2 mL 15%的Na2CO3溶液,將其充分搖勻后,常溫放置2 h,隨后在760 nm處測定其吸光值。

      1.3.3 抗氧化性測定

      1.3.3.1 DPPH自由基消除能力測定

      取0.5 mL樣品,加入2.5 mL含100 μmol/L DPPH的乙醇溶液,混勻,室溫放置30 min后,5 000 r/min離心5 min,在517 nm處測定吸光值(A樣),以5 000 r/min離心5 min過后的上清液調(diào)儀器零點;同時檢測2.5 mL含 100 μmol/L DPPH 的乙醇溶液與0.5 mL蒸餾水的吸光值(A0)。對DPPH自由基的清除率=[(A0-A樣)/A0]×100%。

      1.3.3.2 FRAP法測定抗氧化能力

      配制不同質(zhì)量濃度的FeSO4溶液50 μL,各加入3.0 mL TPTZ工作液,37 ℃水浴30 min,測定595 nm處的吸光度。以蒸餾水為空白樣調(diào)零。以吸光度為縱坐標(biāo),F(xiàn)eSO4質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取1.0 mL樣品,以蒸餾水定容到10 mL,準(zhǔn)確吸取稀釋液50 μL,加入3.0 mL TPTZ工作液,37 ℃水浴30 min,測定595 nm處的吸光度??寡趸芰τ肍eSO4標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度來表示。

      1.3.4 單因素實驗

      為獲得小米中的多酚含量,分別對液料比10 ∶1、12∶1、14∶1、16∶1、18∶1(V/m)、雙酶添加量為0.3%、0.6%、0.9%、1.2%、1.5%,酶解時間1、1.5、2、2.5、3 h,酶解溫度20、30、40、50、60 ℃做單因素實驗,以確定各因素的最佳水平。

      1.3.5 響應(yīng)面優(yōu)化工藝參數(shù)

      為了確定最優(yōu)酶法輔助提取小米多酚工藝條件,以單因素實驗為基礎(chǔ),利用響應(yīng)曲面法對其進(jìn)行優(yōu)化處理,即以液料比、雙酶添加量、酶解時間、酶解溫度為自變量,多酚得率為響應(yīng)值,設(shè)計四因素三水平優(yōu)化實驗。其實驗因素水平如表1所示。

      表1 Box-Behnken 實驗因素水平表

      1.4 數(shù)據(jù)處理

      所有數(shù)據(jù)通過3次測定后取得平均值,用Origin9.1作圖,SPSS V19.0分析其顯著性,響應(yīng)面分析采用Box-Behnken模型。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 單因素實驗結(jié)果與分析

      2.1.1 液料比對小米多酚得率的影響

      由圖1可見,隨著料液比的不斷上升,小米中的多酚得率呈現(xiàn)出先快速上升,后緩慢下降的趨勢。在液料比為14∶1時,其多酚的得率最高,為4.80 mg/g。這是因為伴隨著液料比的不斷增加,溶劑和小米之間的接觸面增大,從而有利于小米多酚的溶出[20],但當(dāng)液料比的比值過高時,由于酶與底物的接觸會由于稀釋過度而受限,酶的作用受到抑制,進(jìn)而影響了多酚的提取率。不僅如此,過大的料液比在實際的生產(chǎn)過程中不僅增加了水的消耗,并且增加后續(xù)的濃縮成本,對后續(xù)加工造成困難因此,選擇液料比為14∶1做為最適宜液料比。

      2.1.2 雙酶添加量對小米多酚得率的影響

      從圖1中可以發(fā)現(xiàn),隨著復(fù)合酶用量增加,多酚含量明顯上升。這是因為淀粉酶在適宜的介質(zhì)中可以水解小米中的淀粉,有助于與淀粉結(jié)合的部分多酚釋放,這與呂俊麗等[21]研究莜麥中多酚的提取的結(jié)果相一致,但當(dāng)雙酶的添加量超過0.9%時,多酚的含量卻呈現(xiàn)出下降的趨勢。雖然適量木瓜蛋白酶可以通過破壁改變細(xì)胞壁的通透性,使得細(xì)胞壁破裂增加有效成分的溶出,提高多酚的提取率,但是多酚的分子可以與蛋白質(zhì)和氨基酸發(fā)生很強的絡(luò)合反應(yīng),而酶是具有催化活性的蛋白質(zhì),當(dāng)酶過量時就會與多酚絡(luò)合[22],而且當(dāng)繼續(xù)增加酶量,酶與底物的接觸面積過剩,會降低反應(yīng)速率,不僅總酚溶出會降低,而且會增加投入,進(jìn)而減少了溶液中可提取的多酚的含量。

      2.1.3 酶解時間對小米多酚得率的影響

      從圖1能發(fā)現(xiàn),伴隨著酶解時間的不斷延長,小米多酚得率也不斷的上升,在2 h時便達(dá)到最大值,隨著酶解時間的繼續(xù)延長,其多酚得率趨于穩(wěn)定。這是由于隨著酶解時間的不斷變化,小米細(xì)胞壁與細(xì)胞間層的纖維素的隔層被有效破壞,多酚便可以更容易地從細(xì)胞內(nèi)流出,但當(dāng)達(dá)到適宜的時間后,其多酚類物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)外處于平衡的狀態(tài),更長的酶解時間對其作用影響不大,反而會由于更長時間的酶解使得小米中的多酚產(chǎn)生不必要的損失,甚至于發(fā)生氧化反應(yīng),導(dǎo)致酚類的含量有所降低[23]。因此,考慮到時間與生產(chǎn)成本等因素,選擇酶解時間2 h為宜。

      2.1.4 酶解溫度對小米多酚得率的影響

      圖1中,在適宜的溫度范圍內(nèi),溫度升高,小麥中多酚得率也有所增加,在40 ℃ 時其多酚的得率達(dá)到了最大值。這是因為:一方面木瓜蛋白酶與α-淀粉酶酶解活力隨溫度升高而增強,使反應(yīng)速率加快;另一方面,在加熱過程中,淀粉本身可發(fā)生膨脹并釋放直鏈淀粉,隨著加熱的進(jìn)行,淀粉顆粒破裂,使得多酚物質(zhì)得以從籠形包含物中釋放出來,因此,多酚得率隨之增加[24]。有研究表明,酶解作用是促進(jìn)小麥粉中多酚釋放的主要原因[25]。當(dāng)溫度進(jìn)一步提高過程中,多酚得率反而降低。這是因為溫度持續(xù)升高,導(dǎo)致酶活力減弱,穩(wěn)定性降低,且高溫還可能會破壞已提取出來的多酚結(jié)構(gòu)[10],故選取40 ℃為最佳酶解溫度。

      圖1 液料比、復(fù)合酶用量、 酶解時間、 酶解溫度對小米多酚得率的影響

      2.2 響應(yīng)面法對小米多酚提取工藝的優(yōu)化

      在單因素實驗的基礎(chǔ)上,選取液料比、雙酶添加量、酶解時間、酶解溫度為4個影響因素,將響應(yīng)R值確定為多酚得率,其實驗方案與設(shè)計見表2。

      表2 實驗方案及結(jié)果

      通過統(tǒng)計分析軟件Design-Expert進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,得到關(guān)于R的方程為:

      R=4.81+0.045A+0.043B-0.022C-5.833E-003D+0.13AB+0.022AC+2.500E-003AD+0.040BC-0.14BD+5.000E-003CD-0.98A2-0.70B2-0.54C2-0.41D2

      表3 方差分析

      由回歸系數(shù)的顯著性檢驗可知,液料比與雙酶添加量、雙酶添加量與酶解溫度的交互作用達(dá)到顯著水平(P<0.05)。響應(yīng)面越陡,各因素之間的兩兩交互作用越顯著。液料比在 13∶1~15∶1、 雙酶添加量0.8%~1%的范圍內(nèi)存在極值,即兩者之間存在較好的交互作用。在液料比為13∶1~14∶1之間時,隨著雙酶添加量的增大,總多酚得率增加,在液料比為14∶1~15∶1之間時,隨著雙酶添加量的增大,總多酚得率減少。雙酶添加量在0.8%~1.0%,酶解溫度在39~41 ℃之間存在極值,在雙酶添加量0.8%~0.9%之間,隨著酶解溫度的增加,總多酚得率增加,在雙酶添加量0.9%~1.0%之間,隨著酶解溫度的增加,總多酚得率降低。

      通過模型得到的結(jié)果為:液料比為14.05∶1、雙酶添加量為0.91%、酶解時間為1.99 h、酶解溫度為39.94 ℃,所能提取到的多酚得率為4.81 mg/g。結(jié)合實際生產(chǎn)中的工藝水平,調(diào)整到:液料比為14∶1、雙酶添加量為0.9%、酶解時間為2 h、酶解溫度為40 ℃。

      為了驗證更為可靠的數(shù)據(jù),采用工藝條件進(jìn)行3次實際提取,結(jié)果見表5,所得到的多酚得率平均值為4.83 mg/g,與理論預(yù)測值相差0.02 mg/g。所以,通過本方法優(yōu)化的工藝條件準(zhǔn)確可靠。

      由表4對比實驗結(jié)果可知,在不加酶條件下提取小米中多酚得率為3.95 mg/g,比加酶提取工藝低0.88 mg/g。由此可見,在小米多酚的提取工藝中,通過添加木瓜蛋白酶與α-淀粉酶可以調(diào)高小米多酚的含量。

      表4 驗證和對比實驗結(jié)果

      2.3 抗氧化能力的對比

      由表5可見,在木瓜蛋白酶與α-淀粉酶作用后,樣品的自由基消除能力有所增加,從未處理樣品的76.51%提高到83.42%,提升了9.03%,抗氧化能力也有所提高,未處理樣品為2.96,處理后樣品為3.67,提升力23.99%,因此,通過雙酶法提取小米多酚不僅可以提升其多酚的含量,也可以提升小米的抗氧化能力。

      表5 抗氧化能力的對比

      3 結(jié)論

      以單因素實驗為基礎(chǔ),考察了液料比、雙酶添加量、酶解時間、酶解溫度對小米多酚得率的影響。由響應(yīng)面分析實驗得出,液料比、雙酶添加量是影響小米多酚得率的主要因素,其中液料比的影響最為顯著。通過回歸分析確定小米多酚提取的最佳工藝液料比為14∶1、雙酶添加量為0.9%、酶解時間為2 h、酶解溫度為40 ℃。這種處理條件下,小米多酚得率可達(dá)4.83 mg/g,比未添加酶處理的樣品高0.95 mg/g。不僅如此,還可以提升小米的抗氧化能力。由驗證實驗結(jié)果可以發(fā)現(xiàn),利用響應(yīng)曲面優(yōu)化小米多酚的提取工藝條件在實踐上具有可操作性。而酶法輔助提取小米多酚具有條件簡便、耗時較短、反應(yīng)條件溫和、經(jīng)濟成本低與高效率的優(yōu)勢,其研究價值值得肯定。

      猜你喜歡
      酶法液料小米
      傳遞
      杜小米的夏天
      新型多功能飲品復(fù)合調(diào)配分離瓶的研發(fā)
      科技視界(2018年22期)2018-10-08 01:41:38
      讀《幸福的小米啦:小米啦發(fā)脾氣》有感
      可愛的小米
      α-生育酚琥珀酸酯的酶法合成研究進(jìn)展
      酶法制備大豆多肽及在醬油發(fā)酵中的應(yīng)用
      中國釀造(2016年12期)2016-03-01 03:08:07
      Sn-2二十二碳六烯酸甘油單酯的酶法合成
      酶法降解白及粗多糖
      中成藥(2014年11期)2014-02-28 22:29:50
      混砂機液料流量的精確控制
      景宁| 鹤庆县| 洪江市| 广宗县| 胶南市| 云梦县| 南丰县| 阳谷县| 汝阳县| 佛冈县| 开封市| 贺州市| 渭南市| 剑川县| 阜康市| 彭阳县| 扶绥县| 涟水县| 鄂托克前旗| 启东市| 财经| 三穗县| 德州市| 潍坊市| 山西省| 合阳县| 凤城市| 思茅市| 宝应县| 华阴市| 前郭尔| 富锦市| 大邑县| 东乌珠穆沁旗| 娄烦县| 砀山县| 龙陵县| 孙吴县| 秭归县| 抚远县| 额尔古纳市|