蜂蜜中植物源性毒性成分的研究進(jìn)展

鄭亞杰，劉秀斌，林 莉，鄒超蘭，吳曉翠，王 峻,*，曾建國(guó),*

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝園林學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128；2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 獸用中藥資源與中獸藥創(chuàng)制國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心，湖南 長(zhǎng)沙 410128；3.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128；4.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410208；5.湖北省獸藥監(jiān)察所，湖北 武漢 430000）

蜂蜜是廣受歡迎的天然甜味劑，富含果糖和葡萄糖[1]，同時(shí)其含有多種酶、氨基酸和礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，也是老少皆宜的天然膳食補(bǔ)充劑[2]。此外，蜂蜜還可以作為藥用，用于治療呼吸道感染疾病、消化道潰瘍，還能促進(jìn)傷口和燒傷面的愈合，甚至可用于癌癥的防治[3-7]。野生蜂蜜是我國(guó)食物中毒事件中的主要致病因子[8-9]，隨著人們對(duì)天然食品及野生食材的崇尚程度日趨增強(qiáng)，特別對(duì)原蜜或野生蜂蜜的消費(fèi)意愿大大增加，蜂蜜的消費(fèi)量呈逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)，這也增加了食用蜂蜜中毒的可能性。

我國(guó)現(xiàn)行的GB 14963ü2011《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)蜂蜜》中，除規(guī)定了對(duì)污染物、獸藥殘留和農(nóng)藥殘留等進(jìn)行限量檢測(cè)外，還明確了博落回、雷公藤和狼毒為有毒蜜源植物，但沒(méi)有將其列入蜂蜜中的植物源毒性成分及相關(guān)的質(zhì)量控制方法[10]?，F(xiàn)行的《中國(guó)藥典》2015年版一部?jī)H對(duì)5-羥甲基糠醛（5-hydroxymethylfurfural，5-HMF）進(jìn)行限量檢測(cè)。當(dāng)前我國(guó)關(guān)于蜂蜜的質(zhì)量控制及安全研究以獸藥抗生素、農(nóng)藥殘留、重金屬殘留、真實(shí)性分析和活性成分分析等工作為主，其中農(nóng)獸藥殘留和重金屬殘留檢測(cè)為關(guān)注重點(diǎn)[11-29]。僅少數(shù)文獻(xiàn)對(duì)有毒蜜源植物雷公藤、昆明山海棠和博落回中毒性成分及其分析方法進(jìn)行了報(bào)道[30-33]。相比之下，國(guó)外對(duì)蜂蜜中吡咯里西啶類(lèi)生物堿（pyrrolizidine alkaloids，PAs）、木藜蘆毒烷類(lèi)（grayanotoxanes，GTXs）、羥基馬桑毒素（tutin）等植物源性毒性成分的來(lái)源、中毒機(jī)制、中毒癥狀和臨床治療等進(jìn)行了全面且細(xì)致的研究工作。本文對(duì)1963ü2017年間發(fā)表的與蜂蜜中毒相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行系統(tǒng)梳理，對(duì)國(guó)內(nèi)食用蜂蜜中毒事件、臨床毒性癥狀、中毒原因、植物源毒性成分等進(jìn)行綜述，為開(kāi)展蜂蜜中植物源性毒性成分研究及提升蜂蜜安全標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 我國(guó)食用蜂蜜中毒事件梳理

蜂蜜食用中毒在我國(guó)早有記載，唐代孫思邈所著《要方?食治?鳥(niǎo)獸第五》中就有記載“七月勿食生蜜，令人暴下，發(fā)霍亂”，明確地提出食用生蜂蜜有中毒的潛在風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)我國(guó)食用蜂蜜中毒事件的文獻(xiàn)報(bào)道進(jìn)行系統(tǒng)梳理，發(fā)現(xiàn)我國(guó)食用野蜂蜜中毒事件的公開(kāi)報(bào)道主要集中在2000年以后（表1）。

從表1數(shù)據(jù)可知，野蜂蜜中毒的死亡率相對(duì)偏高，多數(shù)在20%以上。食用野蜂蜜中毒具有明顯的地域性，中毒事件主要集中在南方地區(qū)，包括云南省、廣西壯族自治區(qū)、湖北省、福建省、重慶市等，其中以云南省和廣西壯族自治區(qū)最多。

食用蜂蜜中毒事件存在一定的偶發(fā)性，比如2005ü2013年云南發(fā)生的中毒事件數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)中，2005、2007年和2012年各報(bào)道中毒3 起，2009年、2010年和2013年各報(bào)道中毒1 起，而2006年、2008年和2011年并沒(méi)有中毒事件的報(bào)道[44]，這給我國(guó)食用蜂蜜中毒事件原因的進(jìn)一步查明帶來(lái)了很大的困難。

表1 國(guó)內(nèi)食用蜂蜜中毒事件匯總Table1 Summary of honey poisoning incidents in China

2 食用蜂蜜中毒癥狀

食用有毒蜂蜜后食用者會(huì)出現(xiàn)一系列中毒癥狀，中毒初期有惡心、嘔吐、腹瀉、腹痛等消化道癥狀，伴有乏力、頭暈、眼花、低熱、四肢麻木等，輕度中毒者僅有口干、口苦、唇舌發(fā)麻、食欲減退等癥狀；較重中毒除有腹瀉伴柏油便、血便癥狀外，還可能出現(xiàn)肝臟損害癥狀，但無(wú)黃疸；嚴(yán)重的中毒病人會(huì)出現(xiàn)腎功能損害的表現(xiàn)，如少尿、血尿、蛋白尿，還出現(xiàn)寒戰(zhàn)、高熱、尿閉、血壓下降、休克、昏迷、心律不齊，有典型的心肌炎表現(xiàn)，最后可因循環(huán)中樞和呼吸中樞麻痹難救治而死亡[52-53]。

貴州省銅仁地區(qū)村民采食樹(shù)洞或巖洞蜂蜜，部分蜂蜜呈綠色、味苦澀且有刺舌感覺(jué)，在食用后數(shù)小時(shí)產(chǎn)生頭昏眼花、嘔吐腹瀉、胸悶?zāi)蝾l、全身乏力、便血及泡泡樣排泄物、過(guò)敏氣喘和皮膚出疹等癥狀；食用量超過(guò)500 g蜂蜜的村民46 h后醫(yī)治無(wú)效死亡[36]。云南省蘭坪縣多起食用蜂蜜中毒事件主要臨床表現(xiàn)為消化道、神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)臟受損癥狀與體征[39]。重慶市秀山縣受害人食用有毒蜂蜜后出現(xiàn)頭痛、惡心、嘔吐、腹瀉等中毒癥狀，甚至死亡[48]。

湖北省鶴峰縣五里鄉(xiāng)瓦屋村村民食用自己飼養(yǎng)的中華蜜蜂蜂蜜后，出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹痛和腹瀉等癥狀，嚴(yán)重者出現(xiàn)呼吸苦難、疲勞無(wú)力，乃至死亡[54]。同年在湖北省恩施州利川市發(fā)生食用西方蜜蜂發(fā)生中毒事件，受害人在食用有毒蜂蜜后不久發(fā)現(xiàn)中毒，在送醫(yī)途中死亡，一同食用該蜂蜜的受害人于兩日后感覺(jué)不適就醫(yī)，該中毒事件的中毒癥狀以嘔吐、腹瀉為主；在該市的另一起中毒事件中，受害人在食用有毒蜂蜜后約5 h出現(xiàn)不適，于次日就醫(yī)醫(yī)治無(wú)效死亡[52]。

廣東韶關(guān)市湞江區(qū)新韶鎮(zhèn)鐘屋村村民自行采食廢棄泥磚屋內(nèi)巢脾內(nèi)蜂蜜，半小時(shí)后陸續(xù)出現(xiàn)發(fā)困、視覺(jué)模糊、頭暈等不適癥狀。大部分村民意識(shí)到中毒后自行催吐并緊急就醫(yī)脫離險(xiǎn)境，但仍有受害人誤以為夜間犯困需要休息，因耽誤治療導(dǎo)致死亡[51]。

福建省村民食用野蜂蜜后發(fā)病時(shí)間集中在一天內(nèi)，最早在食用蜂蜜后5 h感覺(jué)不適，發(fā)生包括消化系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和心源性等多個(gè)系統(tǒng)的中毒癥狀，如腹痛、腹瀉、嘔吐、頭暈、惡心、頭痛、胸悶、乏力、氣促等，以消化道癥狀和心源性癥狀為主。中毒造成多臟器損害，臨床指標(biāo)檢測(cè)體現(xiàn)在肝功能、心肌功能、血常規(guī)指標(biāo)異常，凝血時(shí)間和電解質(zhì)異常等。輕癥患者采用保肝、營(yíng)養(yǎng)心肌、激素等處理取得一定療效，重癥患者采用強(qiáng)心、利尿，乃至氣管插管進(jìn)行治療，但因病情惡化較快，效果不明顯[49]。

廣西環(huán)江縣長(zhǎng)美鄉(xiāng)村民食用有毒蜂蜜2 h后出現(xiàn)頭痛、頭暈、眼花、視力模糊、口干、惡心、嘔吐、腹痛等中毒癥狀，其中進(jìn)食約300 g的受害人7 h后醫(yī)治無(wú)效死亡；大才鄉(xiāng)村民食用有毒蜂蜜3～30 g約1 h后出現(xiàn)不同程度惡心、眼花、嗜睡、嘔吐等癥狀，經(jīng)醫(yī)治康復(fù)；穿山鎮(zhèn)村民食用有毒蜂蜜約1 h后出現(xiàn)頭暈、眼花、胸悶等癥狀，食用量較多者（約100 g）出現(xiàn)嘔吐、昏迷，經(jīng)醫(yī)治無(wú)效死亡。城南社區(qū)居民食用有毒蜂蜜2 h后出現(xiàn)頭暈、眼花、四肢無(wú)力等癥狀，重癥者（食用量約75 g）出現(xiàn)嘔吐、呼吸困難，經(jīng)搶救無(wú)效死亡[46]。貴港市港北區(qū)受害人食用蜂蜜中毒潛伏期在0.5～7 h，中毒者出現(xiàn)惡心、嘔吐、乏力、頭暈等癥狀，重者出現(xiàn)視物模糊、眼瞼下垂、呼吸困難，其中因夜間休息死亡病例癥狀不詳[47]。

歐洲黑海地區(qū)尤其是土耳其多次發(fā)生食用蜂蜜中毒的“狂蜜病”事件，初期中毒癥狀包括流涎、嘔吐、頭暈、四肢無(wú)力、緩慢性心律失常、出汗和低血壓等癥狀[55-56]，高劑量攝入有毒蜂蜜會(huì)引起機(jī)體動(dòng)作協(xié)調(diào)性喪失、進(jìn)行性肌無(wú)力及心肌缺血導(dǎo)致的束支分支和/或ST段抬高的心電圖改變等癥狀，最終因四肢和膈肌麻痹致死；比較少見(jiàn)的中毒癥狀有暈厥、視力模糊、驚厥、心房顫動(dòng)、心搏停止和心肌梗塞等[55,57-61]?！翱衩鄄　蓖ǔＴ谑秤煤?0 min到3 h后出現(xiàn)中毒癥狀，癥狀維持1～2 d，中毒癥狀和體征通常會(huì)令人擔(dān)憂，甚至危及生命，但是及時(shí)的心電圖監(jiān)測(cè)、生理鹽水輸注和靜脈阿托品的支持治療通常足以確保患者恢復(fù)[56]，危重病例的緊急救治通常會(huì)采取阿托品（0.5 mg/次，或者對(duì)于血壓和心率不反應(yīng)患者使用兩次，2 mg/次）和生理鹽水（100 mL/h）的救治措施[55]。

新西蘭發(fā)生的多起食用蜂蜜中毒事件，臨床癥狀或體征的發(fā)作時(shí)間為0.5～17 h，中位時(shí)間為7.5 h，患者具有惡心、頭痛、嘔吐、頭暈，嚴(yán)重時(shí)會(huì)出現(xiàn)癲癇和昏迷等神經(jīng)系統(tǒng)癥狀[62]；但是臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究過(guò)程中僅發(fā)現(xiàn)具有輕度、短暫性頭痛，沒(méi)有出現(xiàn)其他中毒癥狀[63]。

食用有毒蜂蜜呈現(xiàn)的臨床癥狀不盡相同，但通常中毒潛伏期較短，最短潛伏期僅有半小時(shí)，多數(shù)中毒事件在幾小時(shí)內(nèi)發(fā)病。中毒程度與有毒蜂蜜食用量具有正相關(guān)性，食用量大的患者病程長(zhǎng)、病情嚴(yán)重，甚至危及生命。蜂蜜中毒癥狀的變化與蜂蜜中所含毒素有關(guān)，通常包括頭暈、惡心、嘔吐、抽搐、頭痛、心悸和死亡，比如狂蜜病雖然病情初期病人情況危及，但通過(guò)適當(dāng)?shù)呐R床護(hù)理愈后良好[64]。

3 國(guó)內(nèi)外蜂蜜中毒原因研究對(duì)比

食用蜂蜜中毒事件在許多國(guó)家都有報(bào)道，比如土耳其[65]、美國(guó)[66-67]、日本[66,68]、新西蘭[63,69-70]等。但食用蜂蜜中毒的產(chǎn)生原因不同，在土耳其東部黑海地區(qū)是由于蜂蜜中含有的GTXs神經(jīng)毒素阻斷了細(xì)胞膜上的鈉離子通道，對(duì)動(dòng)作電位的傳遞造成干擾，從而引發(fā)骨胳肌、心肌、神經(jīng)系統(tǒng)等的臨床中毒反應(yīng)[58]。在美國(guó)和日本嬰兒食用蜂蜜中毒是由于1 歲內(nèi)嬰兒的腸道發(fā)育不夠完善，食用被肉毒桿菌孢子污染的蜂蜜導(dǎo)致嬰兒中毒[66]。新西蘭的中毒事件與蜜蜂采集當(dāng)?shù)伛R桑屬植物葉子上澳洲廣翅蠟蟬分泌的含有羥基馬桑毒素的蜜露，因而產(chǎn)出毒蜜蜂有緊密聯(lián)系[62]。

相比之下，表1所示我國(guó)絕大多數(shù)蜂蜜中毒事件的具體原因并不清楚，僅限作初步探究。比如對(duì)云南省蘭坪縣飼養(yǎng)的蜂群、有毒蜜源植物分布和營(yíng)養(yǎng)生態(tài)位進(jìn)行比較系統(tǒng)研究，發(fā)現(xiàn)當(dāng)?shù)匾灾腥A蜜蜂為主，該蜜蜂對(duì)當(dāng)?shù)胤植嫉闹饕卸久墼粗参锢ッ魃胶Ｌ暮湍蠣T植物都有采集行為，所收集的蜂蜜樣本中發(fā)現(xiàn)了兩種植物花粉，并且部分樣本中花粉含量較高，初步認(rèn)為該地區(qū)此次中毒事件的發(fā)生與昆明山海棠和南燭植物有關(guān)[39]。

對(duì)福建省中毒事件的剩余有毒蜂蜜和周?chē)卸久墼粗参镞M(jìn)行色譜對(duì)比分析和顯微鏡檢測(cè)，在有毒蜂蜜樣本中發(fā)現(xiàn)有雷公藤和博落回花粉，但色譜只定性發(fā)現(xiàn)有雷公藤甲素，沒(méi)有定量結(jié)果報(bào)告，據(jù)此認(rèn)為中毒事件與雷公藤、博落回植物有關(guān)，但難以判斷以哪種植物為主[49]。

在韶關(guān)蜂蜜中毒事件調(diào)查中，研究人員對(duì)中毒者的提取物樣品進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其中含有事發(fā)地周?chē)植即蟛杷幍亩拘猿煞帚^吻堿等，但是對(duì)分布有大茶藥的蜂場(chǎng)取蜜檢測(cè)并未檢出該成分；在調(diào)查中還發(fā)現(xiàn)被毀蜂巢有不同于華南蜜蜂的體色偏黑蜜蜂飛繞，該中毒事件原因不明，提示應(yīng)加強(qiáng)防范[51]。

在對(duì)湖北省恩施州鶴峰縣中毒事件調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)?shù)仫曫B(yǎng)蜜蜂以中華蜜蜂為主，當(dāng)?shù)胤植加写罅坷坠俸筒┞浠氐扔卸久墼粗参?，?duì)樣品檢測(cè)發(fā)現(xiàn)疑似有毒蜂蜜中有博落回花粉且含有雷公藤甲素等毒性成分；在對(duì)利川市中毒事件走訪調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，該地區(qū)分布有大量昆明山海棠，中毒蜂蜜中檢測(cè)出雷公藤甲素，但是部分食用疑似有毒蜂蜜的人并未發(fā)生中毒癥狀，該地區(qū)中毒事件原因不明[52]。

廣西省貴港市發(fā)生的食野蜂蜂蜜中毒事件，根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查、現(xiàn)場(chǎng)衛(wèi)生學(xué)調(diào)查及臨床資料分析，認(rèn)為此次食野蜂蜂蜜中毒是由斷腸草中鉤吻堿引起的[47]。還有重慶秀山縣中毒事件中，作者結(jié)合文獻(xiàn)推測(cè)引發(fā)中毒的成分為雷公藤堿[48]。

對(duì)比國(guó)內(nèi)外對(duì)食用蜂蜜中毒原因的研究現(xiàn)狀，相比歐美、日本和新西蘭等國(guó)家，我國(guó)在食用蜂蜜中毒原因的研究工作上還存在很大的差距。迄今為止，僅云南、福建、廣東、湖北和重慶等對(duì)事發(fā)地周?chē)挠卸久墼粗参?、蜂群種類(lèi)及采蜜習(xí)性等進(jìn)行了考察，對(duì)植物、蜂蜜中的花粉和毒性成分進(jìn)行了分析檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)中毒與有毒蜜源植物有著一定的聯(lián)系，認(rèn)定昆明山海棠、雷公藤等有毒蜜源植物及中華蜜蜂的采蜜習(xí)性等是食用蜂蜜中毒的主要因素，但更深入系統(tǒng)地對(duì)中毒原因研究及毒性成分闡明工作還亟待開(kāi)展。

4 蜂蜜中植物源性毒性成分及其毒性

蜂蜜中約80%是糖類(lèi)物質(zhì)，15%左右是水分，所含的氨基酸、無(wú)機(jī)鹽和多種次生代謝物（如生物堿、脂類(lèi)、萜類(lèi)、酚類(lèi)及其糖苷類(lèi)成分等）所占比例很低[71-73]。這些微量組分的含量會(huì)隨蜜源植物種類(lèi)不同而有所差異，尤其所含的生物堿類(lèi)、萜類(lèi)、非蛋白氨基酸和有害金屬等會(huì)對(duì)人類(lèi)健康帶來(lái)不良影響[64,73]。對(duì)蜂蜜中毒性成分進(jìn)行梳理和分類(lèi)匯總，發(fā)現(xiàn)毒性成分的來(lái)源主要有以下幾種途徑：一是蜜蜂采食花蜜或蜜露過(guò)程中經(jīng)有毒蜜源植物引入的毒性次生代謝產(chǎn)物，如PAs、GTXs、羥基馬桑毒素和生物堿等；另一種是在蜂蜜的加工、貯藏過(guò)程中通過(guò)化學(xué)變化或微生物污染產(chǎn)生的毒素，如5-羥基甲基呋喃、肉毒毒素、黃曲霉毒素等。此外，蜂蜜中殘留的抗生素、殺蟲(chóng)劑和重金屬等也會(huì)給食用蜂蜜帶來(lái)潛在的安全隱患[74]。

通常情況下蜜蜂主要采食蜜源植物花蜜或蜜露，當(dāng)蜜源植物花期過(guò)后或者氣候干旱導(dǎo)致植物蜜露分泌下降，蜜蜂會(huì)采集有毒蜜源植物花蜜或蜜露生成含有毒性次生代謝產(chǎn)物的蜂蜜[75-76]。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中報(bào)道的蜂蜜中植物源毒性成分主要包括生物堿和萜類(lèi)化合物兩大類(lèi)，本文對(duì)這兩類(lèi)毒性成分的來(lái)源、毒性機(jī)制及毒性大小進(jìn)行了總結(jié)，并通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)（https://chem.nlm.nih.gov/chemidplus/和http://www.drugfuture.com/toxic/）對(duì)毒性成分的急性毒性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)半數(shù)致死量（median lethal dose，LD50）進(jìn)行查詢(xún)并歸納。

4.1 生物堿

4.1.1 二萜類(lèi)生物堿

該類(lèi)生物堿主要分布在毛茛科的烏頭屬、飛燕草屬和翠雀屬等有毒蜜源植物中（如烏頭），具有多巴胺神經(jīng)元毒性，并通過(guò)影響調(diào)控Ca2＋濃度的蛋白產(chǎn)生心臟毒性[77-78]，其中以雙酯型二萜類(lèi)生物堿經(jīng)口服用具有較高的毒性[79-80]。小鼠毒性實(shí)驗(yàn)中，小鼠食用含有烏頭堿蜂蜜后的中毒癥狀與受害者相似，顯微觀察有毒蜂蜜發(fā)現(xiàn)烏頭花粉比例高達(dá)68.3%，利用薄層色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法和高效液相色譜法檢測(cè)有毒蜂蜜時(shí)均檢測(cè)到烏頭堿，其含量約10 mg/kg（圖1）[68]。

圖1 烏頭堿及其LD[80]50Fig.1 Aconitine and its LD[80]50

4.1.2 異喹啉類(lèi)生物堿

該類(lèi)生物堿主要存在于罌粟科有毒蜜源植物，如博落回、白屈菜、血水草等中，能夠影響Na＋-K＋-ATP酶對(duì)K＋的轉(zhuǎn)運(yùn)，并能破壞細(xì)胞生物膜結(jié)構(gòu)的完整性，產(chǎn)生心、肝、腦和腎毒性[81-82]。利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（liquid chromatograph-tandem mass spectrometer，LC-MS/MS）方法從蜂蜜或花粉中檢測(cè)出的該類(lèi)生物堿包括小檗堿、原阿片堿和別隱品堿（圖2）[33,49]。

圖2 異喹啉類(lèi)生物堿類(lèi)化合物及其LD[83-84]50Fig.2 Representative isoquinoline alkaloids and their LD[83-84]50

4.1.3 吡咯里西啶類(lèi)生物堿

該類(lèi)生物堿是一類(lèi)分布廣泛的植物性毒素，主要集中在菊科（如千里光屬和澤蘭屬）、夾竹桃科、紫草科和豆科（如豬屎豆屬），全世界約有3%的有花植物（約6 000 種）含有PAs[85]。如菊科植物千里光（Senecio jacobaea）的花粉中PAs的含量高達(dá)0.8 mg/g，而來(lái)自歐洲的紫草科藍(lán)薊（Echium vulgare）植物花粉中的PAs含量甚至高達(dá)14 mg/g[87-88]。這些植物花粉或花蜜所含的PAs會(huì)通過(guò)蜜蜂傳遞到蜂蜜等蜂產(chǎn)品中產(chǎn)生有毒蜂蜜，在一些有毒蜂蜜中PAs的含量可達(dá)到3.9 μg/g[86-87]。除了肝毒性，PAs還具有潛在的致癌、致突變、致畸性，對(duì)人類(lèi)的健康造成極大危害[88-89]。

分子結(jié)構(gòu)中具有1,2-雙鍵的環(huán)狀雙內(nèi)酯的PAs毒性最強(qiáng)，其中Helitridine和Retronecine兩種類(lèi)型的雙酯類(lèi)化合物的毒性較其單酯化合物毒性強(qiáng)4 倍，Helitridine酯類(lèi)成分的毒性是Retornecine酯類(lèi)成分的2～4 倍[90]。利用LC-MS/MS從大批量蜂蜜樣品和花粉樣品中同時(shí)檢測(cè)出千里光寧堿、千里光菲林生物堿、倒千里光堿、克氏千里光寧等多個(gè)PAs及其糖苷結(jié)合物或氮氧化物（圖3）[31,86,91-94]。

圖3 PAS代表化合物及其LD50Fig.3 Representative pyrrolidines alkaloids and their LD50

4.1.4 吲哚類(lèi)生物堿

該類(lèi)生物堿主要分布在馬錢(qián)科胡蔓藤屬有毒蜜源植物中，該類(lèi)成分通過(guò)拮抗γ-氨基丁酸反應(yīng)，產(chǎn)生劇烈的陣攣性驚厥，導(dǎo)致呼吸衰竭[95]。在蜂蜜中檢出含有鉤吻（又稱(chēng)大茶藥）中的毒性成分鉤吻堿（又稱(chēng)鉤吻素甲）、鉤吻素己（又稱(chēng)胡蔓藤堿甲）、胡蔓藤堿丙（又稱(chēng)常綠鉤藤堿）和胡蔓藤堿丁，其中以鉤吻素己的毒性最強(qiáng)（圖4）[51]。

圖4 吲哚類(lèi)生物堿代表化合物及其LD50Fig.4 Representative indole alkaloids and their LD50

4.2 萜類(lèi)化合物

4.2.1 雙環(huán)倍半萜內(nèi)酯類(lèi)化合物

該類(lèi)毒素分布在馬桑屬蜜源植物中，具有神經(jīng)毒作用，是一類(lèi)γ-氨基丁酸受體拮抗劑，干擾中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)抑制性突觸傳導(dǎo)過(guò)程，阻斷腦和脊髓中γ-氨基丁酸對(duì)受體的作用，導(dǎo)致大腦皮層等興奮及脊髓反射增強(qiáng)，引起強(qiáng)制性抽搐、心跳減慢、呼吸加快等癥狀[96]。新西蘭食品安全局規(guī)定蜂蜜中所含羥基馬桑毒素不超過(guò)0.7 mg/kg[70]。新西蘭進(jìn)口的麥盧卡蜂蜜中檢出羥基馬桑毒素含量為0.3 mg/kg[97]；研究還發(fā)現(xiàn)蜂蜜中不僅含有羥基馬桑毒素（（3.6f0.1）μg/g蜂蜜），還有其代謝物南非野葛素（hyenanchin，（19.3f0.5）μg/g蜂蜜）以及羥基馬桑毒素的糖苷結(jié)合物（tutin glycoside，即2-(β-D-glucopyranosyl)tutin，（4.9f0.4）μg/g蜂蜜）和二糖苷結(jié)合物（tutin diglycoside，即2-(6’-(α-D-glucopyranosyl)-β-D-glucopyranosyl)tutin，（4.9f0.1）μg/g蜂蜜）[98]，分析認(rèn)為糖苷類(lèi)結(jié)合物具有更高毒性（圖5）[63,99]。

圖5 雙環(huán)倍半萜內(nèi)酯類(lèi)化合物及其LD50Fig.5 Representative bicyclic sesquiterpene lactones and their LD50

4.2.2 二萜醇（酯）類(lèi)成分

GTXs屬于該類(lèi)毒性成分，是杜鵑花科杜鵑屬、山月桂屬和馬醉木屬等植物的主要毒性成分，具有較強(qiáng)的心臟毒性、胃腸道反應(yīng)和肌肉麻痹作用等[61,100]。該類(lèi)毒素以神經(jīng)毒素發(fā)揮作用，通過(guò)阻斷細(xì)胞膜上鈉離子通道干擾動(dòng)作電位的傳導(dǎo)，輕度中毒癥狀不超過(guò)24 h且很少致死，重度中毒會(huì)危及生命。該類(lèi)成分是引發(fā)狂蜜病的毒性成分，主要是GTX I～GTX IV，以GTX III毒性最強(qiáng)（圖6）[101]。

圖6 二萜醇酯類(lèi)代表化合物及其LD50Fig.6 Representative diterpenoid esters and their LD50

4.2.3 二萜類(lèi)成分

以雷公藤甲素為代表的該類(lèi)成分，通過(guò)引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)或激活凋亡途徑誘導(dǎo)正常細(xì)胞過(guò)渡凋亡等引發(fā)損傷，對(duì)人體的多個(gè)系統(tǒng)產(chǎn)生毒害作用[102]。在有毒蜂蜜中檢出的雷公藤甲素含量約0.3 mg/kg，定性分析檢測(cè)到雷公藤紅素[52]（圖7）。

圖7 雷公藤屬植物二萜類(lèi)代表化合物及其LD[103-105]50Fig.7 Representative diterpenoids from tripterygium plants and their LD[103-105]50

5 結(jié) 語(yǔ)

作為一種天然多功能食品，蜂蜜由蜜蜂從花的花蜜或植物的蜜腺中取食后存在蜜囊中，經(jīng)收集、轉(zhuǎn)化和與適當(dāng)?shù)奈镔|(zhì)混合后被儲(chǔ)存于蜂窩中逐漸變成熟蜜[106]。從蜂箱或蜂窩割取的蜂蜜既能直接食用，又可以在經(jīng)過(guò)加工后作為商品蜂蜜進(jìn)行銷(xiāo)售。在蜜蜂采食、生物加工、存貯和人工加工等諸多環(huán)節(jié)中，不可避免地會(huì)引入各種各樣的污染物。

除了上述植物源性毒性成分，蜂蜜中尚還有其他外源性毒性成分，比如蜂蜜加工過(guò)程中因加熱或滅菌處理通過(guò)化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的糖降解產(chǎn)物HMF[64]、被肉毒梭菌污染后的蜂蜜產(chǎn)生肉毒毒素[66]、黃曲霉毒素[107]、殘留藥物[24]和有害金屬元素[108]等。這些污染物的存在不僅會(huì)直接影響蜂蜜口感和品質(zhì)，還會(huì)給消費(fèi)者食用蜂蜜帶來(lái)安全隱患。

有的植物源性毒性成分在商品蜂蜜加工過(guò)程中可能被降解或因其他原因被部分或全部去除，從而降低了因殘留或蓄積帶來(lái)的潛在中毒風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)因蜂蜜多來(lái)自不同養(yǎng)蜂場(chǎng)，在商品蜂蜜生產(chǎn)過(guò)程中存在天然的稀釋過(guò)程，降低了商品蜂蜜中潛在毒素的濃度[92,109]。所以食用蜂蜜中毒事件更多與個(gè)體養(yǎng)殖或食用野生蜂蜜有關(guān)，商品蜂蜜鮮有食用中毒的報(bào)道。

通常植物中化學(xué)成分分布具有組織特異性，花中毒性成分種類(lèi)、數(shù)量或含量與植物其他部位不盡相同，比如鉤吻花中所含吲哚類(lèi)生物堿與其他部位所含化學(xué)成分存在一定差異[110]。目前有毒蜜源植物中毒性成分主要是從根、莖、葉和果等部位提取分離獲得，再通過(guò)急性毒性實(shí)驗(yàn)對(duì)其毒性進(jìn)行評(píng)價(jià)，基于此研究方法對(duì)植物毒性的評(píng)價(jià)不能完全代表該植物花蜜或蜜露中毒性成分含量及其毒性。因此開(kāi)展有毒蜜源植物花中化學(xué)成分研究具有十分重要的意義，有利于闡明蜂蜜中植物源性毒性成分的毒性，為食用蜂蜜中毒溯源以及快速查對(duì)提供科學(xué)依據(jù)，為提升蜂蜜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及品質(zhì)評(píng)價(jià)提供技術(shù)支撐。