李希政 張 晨 夏宏志

（1吉林省生物研究所，吉林長(zhǎng)春130012；2吉林省農(nóng)業(yè)機(jī)械研究院，吉林長(zhǎng)春130012）

暗褐網(wǎng)柄牛肝菌（Phlebopus portentosus），隸屬小牛肝菌科Boletinellaceae、脈柄牛肝菌屬Phlebopus[1]。該菌在我國(guó)云南省分布較廣，常被當(dāng)?shù)厝怂追Q為“黑牛肝菌”，在國(guó)外見于泰國(guó)、越南、印尼、新西蘭等熱帶國(guó)家[2]。黑牛肝菌子實(shí)體營(yíng)養(yǎng)豐富，可增強(qiáng)人體免疫力，提高身體抗氧化作用，具有較高的食用價(jià)值和藥用價(jià)值[3]。特別是子實(shí)體中含有亞硝酸鹽還原酶，能夠?qū)⑦^量的亞硝酸鹽分解掉，應(yīng)用于罐頭、咸菜生產(chǎn)中，能夠有效降低亞硝酸鹽含量，具有較高的應(yīng)用價(jià)值。黑牛肝菌菌絲較難保存，菌絲生長(zhǎng)緩慢，極易老化失活。因此研究黑牛肝菌菌絲保存方法對(duì)延長(zhǎng)保存時(shí)間，提高菌絲活力意義重大。

1 材料與方法

1.1 菌株來(lái)源

2017年從云南引進(jìn)野生黑牛肝菌子實(shí)體分離培養(yǎng)。

1.2 培養(yǎng)基

母種培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，pH調(diào)至5.6。

1.3 保存方法

將供試菌株子實(shí)體進(jìn)行表面消毒，取菌蓋與菌柄交界無(wú)菌區(qū)切塊0.5 cm，并轉(zhuǎn)接至母種培養(yǎng)基中，27℃暗光培養(yǎng)純化菌種。

對(duì)純化的黑牛肝菌母種進(jìn)行4℃冰箱冷藏和室內(nèi)常溫保存兩個(gè)保存溫度環(huán)境對(duì)比。將母種試管用專用膠塞塞嚴(yán)并用塑料膜包裹，盡可能降低其他因素的干擾。

母種保存30 d、60 d、90 d、180 d的轉(zhuǎn)管。每次轉(zhuǎn)管，每個(gè)溫度處理轉(zhuǎn)管30管。轉(zhuǎn)管后同放在27℃培養(yǎng)箱內(nèi)暗光培養(yǎng)。

觀察菌絲萌發(fā)時(shí)間、菌絲滿管時(shí)間、菌絲生長(zhǎng)勢(shì)，測(cè)定菌絲生長(zhǎng)速度等。

2 結(jié)果與分析

2.1 黑牛肝菌母種不同保存方法保存30 d后菌絲活力比較

兩種保存方式保存母種30 d，對(duì)黑牛肝菌菌絲活力影響無(wú)顯著差異，具體結(jié)果見表1。

表1 黑牛肝菌母種不同保存方式保存30 d后菌絲活力比較

從表1可以看出，室內(nèi)常溫保存的黑牛肝菌母種菌絲萌發(fā)時(shí)間較4℃冰箱保存的黑牛肝菌菌絲萌發(fā)早，菌絲顏色暗黃，菌絲生長(zhǎng)速度快，滿管時(shí)間提前1.3 d。其他觀察因素?zé)o明顯變化和區(qū)別?？梢?，在短時(shí)間內(nèi)保存黑牛肝菌，4℃冰箱保存和常溫保存無(wú)明顯區(qū)別，黑牛肝菌的菌絲活力影響不大，菌絲活力正常，無(wú)明顯的老化失活現(xiàn)象。

2.2 黑牛肝菌母種不同保存方法保存60 d后菌絲活力比較

從表2可知，不同保存條件保存黑牛肝菌母種60 d后，黑牛肝菌菌絲活力發(fā)生了改變。常溫保存的黑牛肝菌菌絲活力正常，菌落邊緣整齊，長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，生長(zhǎng)速度較保存30 d時(shí)變化不大；4℃冰箱冷藏的黑牛肝菌菌絲活力下降較明顯，出現(xiàn)菌落邊緣參差不齊的現(xiàn)象，菌絲成活率下降3%?；盍ο陆担L(zhǎng)速度變慢。結(jié)果表明，黑牛肝菌母種4℃冰箱冷藏條件保存時(shí)間超過30 d，會(huì)導(dǎo)致其菌絲活力下降，菌絲失活率增加；室內(nèi)常溫保存的黑牛肝菌菌絲變化差異不大，菌絲活力正常。由此可知，保存超過30 d，選擇室內(nèi)常溫保存較理想。

表2 黑牛肝菌母種不同保存方式保存60 d后菌絲活力比較

2.3 黑牛肝菌母種不同保存方法保存90 d后菌絲活力比較

表3 黑牛肝菌母種不同保存方式保存90 d后菌絲活力比較

從表3可以看出，黑牛肝菌母種保存90 d后，4℃冰箱冷藏條件保存下黑牛肝菌菌絲活力下降明顯，菌絲老化嚴(yán)重，成活率下降至48%，菌絲生長(zhǎng)速度也降至3.04 mm/d。菌落邊緣不整齊成為顯著特征；室內(nèi)常溫條件保存下黑牛肝菌菌絲活力稍有下降，但仍能正常生長(zhǎng)，菌絲長(zhǎng)速下降至3.87 mm/d。由此說(shuō)明，室內(nèi)常溫保存黑牛肝菌試管母種相對(duì)于4℃冰箱冷藏是保持黑牛肝菌菌絲活力的較好方法。

2.4 黑牛肝菌母種不同保存方法保存180 d后菌絲活力比較

從表4可見，無(wú)論是室內(nèi)常溫保存還是4℃冰箱冷藏條件保存黑牛肝菌母種，都對(duì)其菌絲活力產(chǎn)生較大的影響。4℃冰箱冷藏保存下黑牛肝菌菌絲成活率僅為15%，生長(zhǎng)20 d后，菌絲生長(zhǎng)停滯不前，已經(jīng)嚴(yán)重失去活力，轉(zhuǎn)管成活率極低；室內(nèi)常溫保存下黑牛肝菌菌絲活力一般，成活率94%，轉(zhuǎn)管后成功率較高，菌絲老化失活現(xiàn)象較少。菌絲生長(zhǎng)速度有所下降，邊緣出現(xiàn)不整齊現(xiàn)象。

圖1 黑牛肝菌母種室溫保存90 d后轉(zhuǎn)管后菌絲

圖2 黑牛肝菌母種4℃冰箱保存90 d后轉(zhuǎn)管后菌絲

表4 黑牛肝菌母種不同保存方式保存180 d后菌絲活力比較

3 小結(jié)與討論

黑牛肝菌菌絲活力在低溫環(huán)境中容易下降，60 d后活力明顯下降，90 d后僅有部分活力，180 d后菌絲老化嚴(yán)重而死亡；相反，常溫保存的黑牛肝菌菌絲60 d后活力同樣下降，但活力仍較強(qiáng)，轉(zhuǎn)接試管后仍能正常萌發(fā)，90 d后和180 d后仍具有活力。因此，對(duì)黑牛肝菌母種長(zhǎng)期保存，建議應(yīng)用常溫保存方法，母種保存半年以上仍可活化、復(fù)壯。