肖艷景，白慧麗，趙紅梅，婁欣

(鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院病理科，河南 鄭州 450003)

結(jié)直腸癌在相關(guān)高危人群中的發(fā)病率明顯的上升，流行病學(xué)研究證實(shí)，結(jié)直腸癌的發(fā)病率可超過252～363/10萬人左右[1]。臨床上結(jié)直腸癌的發(fā)生，可以導(dǎo)致患者生存質(zhì)量的下降并增加患者的致殘率[2]。

腫瘤相關(guān)蛋白的表達(dá)能夠影響癌細(xì)胞的生物學(xué)特征，導(dǎo)致癌細(xì)胞的浸潤能力或者增殖特性的改變。 錯(cuò)配修復(fù)（mismatch repair，MMR）蛋白的表達(dá)能夠提高癌細(xì)胞的核DNA的增殖速度，導(dǎo)致癌細(xì)胞的擴(kuò)增速度的增快[3，4]；分化抑制因子ID－2能夠抑制癌細(xì)胞的分化成熟，導(dǎo)致癌細(xì)胞的分化成熟障礙，并能夠促進(jìn)低分化或者中分化的形成，導(dǎo)致患者細(xì)胞病理學(xué)的改變[5]；轉(zhuǎn)錄抑制因子BS69的表達(dá)能夠穩(wěn)定癌細(xì)胞的生物學(xué)特性，降低癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄活性，降低癌細(xì)胞的持續(xù)性增殖的風(fēng)險(xiǎn)[6]。為了揭示 MMRP、BS69、Id－2 水平變化與結(jié)直腸癌患者病理特征的關(guān)系，從而為臨床上結(jié)直腸癌患者的病情評估或者遠(yuǎn)期預(yù)后提供參考，本次研究收集了相關(guān)生物學(xué)指標(biāo)，探討了MMRP、BS69、Id－2水平與結(jié)直腸癌的臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年3月至2017年10月我院收治的60例結(jié)直腸癌患者作為研究對象，其中男 26 例，女 34 例，平均年齡(47.16±5.29)歲，其中高分化11例，中分化35例，低分化14例；TNM分期I期11例，Ⅱ期13例，Ⅲ期24例，Ⅳ期12例。

1.2 納入排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①術(shù)前未接受放、化療者；②術(shù)后病理證實(shí)為結(jié)直腸癌的患者；③患者、家屬知情同意。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①合并惡性腫瘤或嚴(yán)重血液系統(tǒng)疾病的患者；②妊娠期、哺乳期婦女；③精神病患者。

1.3 觀察指標(biāo)及檢查方法 采用免疫組化法檢測MMRP、BS69、Id－2 蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)。將樣本連續(xù)切片后，進(jìn)行免疫組化檢測。將切片脫蠟至水，10ml 3%過氧化氫封閉，8ml檸檬酸緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)操作，反應(yīng)5min，選用10%羊血清封閉10min，一抗，4℃溫箱過夜，取出后復(fù)溫30min，二抗，反應(yīng)30min，磷酸鹽緩沖液洗滌，脫水封片，鏡檢。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 選用SPSS 18.0分析處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差描述，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MMRP、BS69、Id－2 在不同結(jié)直腸組織中表達(dá)MMRP、Id－2在結(jié)直腸癌組織中的陽性表達(dá)率（88.33% 、61.67% ） 明 顯 高 于 癌 旁 正 常 組 織（61.67%、33.33%），BS69 在結(jié)直腸癌組織中的陽性表達(dá)率 （70.00%）明顯低于癌旁正常組織（93.33%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見表 1。

2.2 癌組織中MMRP的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性分析 癌組織中MMRP的表達(dá)與性別無相關(guān)性。MMRP在年齡≥59歲、直腸部位、TNMⅢ期和Ⅳ期、中、低分化結(jié)直腸癌患者中的表達(dá)高于59歲、左右結(jié)腸部位、TNM I期和Ⅱ期、高分化的結(jié)直腸癌患(P＜0.05)。 見表 2。

2.3 癌組織中BS69的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性分析 癌組織中BS69表達(dá)在年齡、腫瘤部位、性別等方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）；BS69 在組織學(xué)分級Ⅰ、Ⅱ級、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Dukes分期A、B期患者中的表達(dá)高于組織學(xué)分級Ⅲ級、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Dukes分期C、D期的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見表 3。

2.4 癌組織中Id－2的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性分析 癌組織中Id－2陽性表達(dá)在性別、年齡、病理類型等方面差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05)，Id－2在TNMⅢ期和Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化結(jié)直腸癌患者中的表達(dá)高于TNM I期和Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高、中分化的結(jié)直腸癌患者(P＜0.05)。 見表 4。

2.5 三種蛋白在癌組織中表達(dá)的相關(guān)性 三者Spearman相關(guān)性分析顯示：MMRP與BS69和Id－2蛋白表達(dá)陽性率呈正相關(guān)關(guān)系 （r=0.429和 r=0.417，P＜0.05）。 見表 5。

表1 MMRP、BS69、Id-2在不同結(jié)直腸組織中表達(dá)

表2 癌組織中MMRP的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性分析

表3 癌組織中BS69的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性分析

表4 癌組織中Id-2的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性分析

表5 三種蛋白在癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

環(huán)境因素、遺傳因素等，均能夠影響結(jié)直腸癌的發(fā)生，促進(jìn)結(jié)直腸癌臨床病理特征的進(jìn)展[7]。作為消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，結(jié)直腸癌的無瘤生存時(shí)間不足38個(gè)月，包括手術(shù)在內(nèi)的相關(guān)綜合性治療措施治療后的3年內(nèi)病死率仍然超過35%[8，9]。另外一方面，現(xiàn)階段臨床上缺乏對于結(jié)直腸癌早期診斷的有效生物學(xué)血清分子，而本次研究通過探討揭示了腫瘤相關(guān)蛋白表達(dá)問題的研究，可以為揭示結(jié)直腸癌的發(fā)生機(jī)制提供參考，并能夠?yàn)榻Y(jié)直腸癌的免疫靶向治療提供基礎(chǔ)，為結(jié)直腸癌的早期高危人群的血清學(xué)篩查提供依據(jù)。

生物學(xué)因子的濃度波動(dòng)，能夠在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的早期核異型性的發(fā)生，或者中晚期臨床病理特征進(jìn)展過程中發(fā)揮重要的作用。其能夠調(diào)控癌細(xì)胞的生物學(xué)特性，干預(yù)癌細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移等，進(jìn)而影響患者的整體生存預(yù)后。MMRP是重要的信號通路激活因子，其對于HIPPO信號通路的激活作用，能夠提高結(jié)直腸癌上皮細(xì)胞核DNA的轉(zhuǎn)錄風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致啟動(dòng)子和增強(qiáng)子的激活，增加癌細(xì)胞的調(diào)控異常風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)MMRP的表達(dá)能夠影響癌基因的錯(cuò)配修復(fù)的能力，導(dǎo)致錯(cuò)配修復(fù)能力的下降，增加了癌基因的突變風(fēng)險(xiǎn)[10]；BS69蛋白能夠與結(jié)直腸癌細(xì)胞膜內(nèi)的轉(zhuǎn)錄基因的結(jié)合，促進(jìn)其甲基化的修飾，抑制癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄過程，降低癌相關(guān)蛋白的轉(zhuǎn)錄及翻譯的活性；Id-2能夠抑制癌細(xì)胞的分化成熟，降低癌細(xì)胞的分化成熟能力，導(dǎo)致癌細(xì)胞的低分化的形成[11]。部分研究探討了在結(jié)直腸癌患者病灶組織中MMRP的表達(dá)情況，認(rèn)為MMRP的表達(dá)陽性率的上升是促進(jìn)結(jié)直腸癌患者臨床預(yù)后惡化的重要風(fēng)險(xiǎn)因素[12]，但對于ID-2或者BS69的分析研究不足。

免疫組化分析研究發(fā)現(xiàn)，MMRP、BS69、Id-2的表達(dá)均具有明顯的差異，其中MMRP及Id-2的表達(dá)陽性率均明顯的上升，高于癌旁組織，而BS60的表達(dá)陽性率明顯低于癌旁組織，提示MMRP、BS69、Id-2均能夠影響到惡性腫瘤的發(fā)生過程。臨床病理特征的研究發(fā)現(xiàn)，MMRP在年齡≥59歲、直腸部位、TNMⅢ期和Ⅳ期、中、低分化結(jié)直腸癌患者中的表達(dá)陽性率明顯的上升，提示了MMRP蛋白對于患者腫瘤臨床分期或者癌細(xì)胞分化程度的影響，回顧國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，筆者認(rèn)為這主要考慮與下列幾個(gè)方面的因素有關(guān)：⑴MMRP的上升能夠降低癌細(xì)胞基因錯(cuò)配修復(fù)能力，導(dǎo)致癌基因突變后的切除修復(fù)或者重組修復(fù)能力的下降；⑵MMRP的表達(dá)上升還能夠影響癌細(xì)胞的增殖速度，導(dǎo)致癌細(xì)胞的浸潤能力的增加。馬賽等[13]研究者揭示了在結(jié)腸癌患者病灶組織中的MMRP蛋白的高表達(dá)現(xiàn)象，認(rèn)為MMRP的表達(dá)陽性率可平均上升20%以上，特別是在腫瘤進(jìn)展速度較快、臨床分期較晚的人群中，MMRP的表達(dá)陽性率可進(jìn)一步的上升。BS69作為轉(zhuǎn)錄抑制因子，其表達(dá)濃度的改變能夠影響到癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄活性，導(dǎo)致癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄活性的下降和增殖速度的下調(diào)，本次研究中BS69在組織學(xué)分級Ⅰ、Ⅱ級、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Dukes分期A、B期患者中的表達(dá)強(qiáng)度明顯的上升，提示了BS69與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系，這主要由于BS69能夠影響到癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子的活化程度，影響到轉(zhuǎn)錄上游增強(qiáng)子的調(diào)控效果，降低轉(zhuǎn)錄或者翻譯的活性及速度。但陳爾飛等[14]研究者并不認(rèn)為BS69與腫瘤患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有一定的關(guān)系，而本次研究的相關(guān)結(jié)論與陳爾飛等存在一定差異，考慮可能與BS69蛋白的檢測敏感性或者結(jié)直腸癌患者的淋巴結(jié)浸潤的檢出靈敏度的差異有關(guān)。最后，本次研究探討了ID-2的表達(dá)與結(jié)直腸癌患者的臨床病理特征的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)Id-2在TNMⅢ期和Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化中的表達(dá)陽性率明顯的上升，這主要由于ID-2的表達(dá)能夠影響到癌細(xì)胞的誘導(dǎo)分化成熟能力有關(guān)。相關(guān)關(guān)系分析也可見，MMRP與BS69和Id-2蛋白的表達(dá)具有密切的關(guān)系，但具體的機(jī)制不清，后續(xù)臨床研究可以進(jìn)一步探討MMRP的表達(dá)與BS69等的內(nèi)在關(guān)系[15]。

綜上所述，結(jié)直腸癌患者中MMRP、ID-2及BS69的表達(dá)與結(jié)直腸癌患者的臨床病理特征有一定相關(guān)性，且三種蛋白表達(dá)呈正相關(guān)。