魏利清，郝全英，俞 寅

(山西糧食質(zhì)量監(jiān)測(cè)中心，太原030024)

多環(huán)芳烴是一類廣泛存在于環(huán)境、食品和生物體內(nèi)的污染物。苯并(a)芘是多環(huán)芳烴中毒性最大的一種，是一種強(qiáng)致癌物，其對(duì)食用植物油的污染已引起世界各國(guó)的廣泛關(guān)注[1-2]。許多國(guó)家和組織都對(duì)油脂中苯并(a)芘的安全限量做了嚴(yán)格規(guī)定，歐盟法規(guī)No 835/2011規(guī)定食用油中苯并(a)芘的最大限量為2 μg/kg，我國(guó)國(guó)標(biāo)GB 2762—2017《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中污染物限量》規(guī)定油脂及其制品中苯并(a)芘的限量為10 μg/kg。

近年來(lái)，我國(guó)已將食用植物油列入食品質(zhì)量安全監(jiān)督抽檢和風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)重點(diǎn)監(jiān)控食品目錄，苯并(a)芘作為油脂的一項(xiàng)重要安全監(jiān)測(cè)指標(biāo)已被納入檢測(cè)計(jì)劃。在國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局對(duì)食用油及其制品的監(jiān)督抽查信息中顯示，在胡麻油、菜籽油、芝麻香油、棉籽油、花生油、茶油、葵花籽油中檢出苯并(a)芘超標(biāo)[3]。食用植物油中苯并(a)芘或源自原料在產(chǎn)前、產(chǎn)中、產(chǎn)后受大氣、汽車(chē)尾氣、土壤、水質(zhì)、公路瀝青和包裝材料或容器的污染，或受到生產(chǎn)、輸送設(shè)備中機(jī)油和石油加工成分的污染，或油料油脂中有機(jī)物在高溫生產(chǎn)環(huán)節(jié)裂解產(chǎn)生[1]。苯并(a)芘污染嚴(yán)重的油料生產(chǎn)的植物油中苯并(a)芘含量可能會(huì)超標(biāo)[4]。因此，研究油料中苯并(a)芘的污染狀況對(duì)保障食用植物油衛(wèi)生安全具有十分重要的意義。

目前，大多數(shù)的研究主要關(guān)注植物油中苯并(a)芘含量的檢測(cè)，而對(duì)油料中苯并(a)芘含量檢測(cè)的研究較少。為此，本文參照GB 5009.27—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中苯并(a)芘的測(cè)定》建立油料中苯并(a)芘含量的測(cè)定方法，為收集油料苯并(a)芘含量數(shù)據(jù)及制定油料中苯并(a)芘安全限量值提供技術(shù)支持，從而更好地為油脂加工企業(yè)降低和控制食用植物油中苯并(a)芘含量提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

花生、大豆、胡麻：市售。正己烷、二氯甲烷、乙腈：色譜級(jí)，美國(guó)Grace公司。苯并(a)芘溶液標(biāo)準(zhǔn)樣品：20 μg/mL±0.038 μg/mL，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所。

L-2000高效液相色譜儀(配自動(dòng)進(jìn)樣器，熒光檢測(cè)器)，日本日立有限公司；MS 204S分析天平，瑞士梅特勒-托利多天平；CG-7120粉碎機(jī)，中山市長(zhǎng)柏電器實(shí)業(yè)有限公司；AH-30全自動(dòng)均質(zhì)器(配100 mL玻璃樣品管)、Fotector Plus高通量全自動(dòng)固相萃取儀，?？苾x器有限公司；SPT-16氮吹儀，北京斯伯特科技有限公司；QL-866旋渦混合儀，海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司；苯并(a)芘分子印跡柱(500 mg，6 mL)，博納艾杰爾科技有限公司；0.45 μm有機(jī)系微孔濾膜。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品預(yù)處理、提取及凈化

預(yù)處理：將油料去除雜質(zhì)，用粉碎機(jī)粗磨碎成2 mm以下的樣品，儲(chǔ)于潔凈的樣品瓶中，并標(biāo)記，于室溫下保存?zhèn)溆谩?/p>

提?。悍Q取1.000 g粗磨碎油料試樣，置于100 mL玻璃樣品管中，加入40 mL正己烷，用全自動(dòng)均質(zhì)器于10 000 r/min提取2 min，靜置分層，將上清液轉(zhuǎn)入60 mL玻璃樣品管中，待凈化。

凈化：采用苯并(a)芘分子印跡柱，用高通量全自動(dòng)固相萃取儀對(duì)提取液進(jìn)行凈化處理，具體凈化條件見(jiàn)表1。

表1 全自動(dòng)固相萃取儀凈化條件

將凈化液在40℃下氮?dú)獯蹈?，?zhǔn)確吸取1 mL乙腈旋渦復(fù)溶0.5 min，過(guò)0.45 μm有機(jī)系微孔濾膜后供高效液相色譜測(cè)定。

1.2.2 高效液相色譜條件

色譜柱，Eclipse PAH(4.6 mm×250 mm，5 μm，安捷倫科技有限公司)；流動(dòng)相，乙腈-水(體積比88∶12)；流速0.9 mL/min；熒光檢測(cè)器，激發(fā)波長(zhǎng)384 nm、發(fā)射波長(zhǎng)406 nm；柱溫35℃；進(jìn)樣量50 μL。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

用乙腈逐級(jí)稀釋苯并(a)芘溶液標(biāo)準(zhǔn)樣品(20 μg/mL±0.038 μg/mL)，配制成質(zhì)量濃度分別為0.5、1.0、5.0、10.0、20.0 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，按1.2.2儀器條件進(jìn)行高效液相色譜測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液中的苯并(a)芘質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4 方法的檢出限和定量限

配制1份濃度接近于空白值的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.2.2儀器條件平行測(cè)定20次得到測(cè)量信號(hào)，求得測(cè)量信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差(S)，分別按式(1)、式(2)計(jì)算方法的檢出限和定量限。

檢出限=3S/b

(1)

定量限=10S/b

(2)

式中：S為測(cè)量信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差；b為方法校準(zhǔn)曲線斜率。

1.2.5 樣品測(cè)定和加標(biāo)回收率、精密度實(shí)驗(yàn)

按照1.2.1和1.2.2分別測(cè)定胡麻、大豆和花生樣品中苯并(a)芘的含量。

在大豆、胡麻和花生樣品中添加苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)溶液，其添加水平分別為2.5、5.0 μg/kg和10.0 μg/kg，按照1.2.1和1.2.2進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，每個(gè)加標(biāo)水平平行進(jìn)行6次測(cè)定，計(jì)算加標(biāo)回收率和精密度。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

按照1.2.3的方法對(duì)標(biāo)準(zhǔn)系列工作液進(jìn)行高效液相色譜測(cè)定，得到苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖及苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別見(jiàn)圖1和圖2。

圖1 苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

圖2 苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)曲線

由圖2可知，苯并(a)芘質(zhì)量濃度(x)在0.5～20.0 ng/mL范圍內(nèi)與響應(yīng)值(y)線性關(guān)系良好，線性方程為y=287 979x-7 022.9，相關(guān)系數(shù)R2為1.000 0，滿足檢測(cè)要求。

2.2 方法的檢出限和定量限

按照1.2.4的方法進(jìn)行測(cè)定，得到20次測(cè)量信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)偏差(S)、方法的檢出限和定量限見(jiàn)表2。

表2 方法的檢出限和定量限

由表2可知，苯并(a)芘的檢出限為0.05 μg/kg，定量限為0.18 μg/kg。

2.3 實(shí)際樣品測(cè)定和方法的回收率、精密度

按照1.2.5的方法對(duì)樣品及加標(biāo)樣品進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算加標(biāo)回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品中苯并(a)芘的加標(biāo)回收率及RSD(n=6)

由表3可知，大豆、胡麻和花生樣品中均含有一定量的苯并(a)芘，樣品加標(biāo)回收率為71.9%～88.0%，RSD為1.24%～10.11%，滿足含量在μg/kg級(jí)別的檢測(cè)要求。

3 結(jié) 論

樣品經(jīng)全自動(dòng)均質(zhì)器用正己烷提取，提取液經(jīng)全自動(dòng)固相萃取儀用苯并(a)芘分子印跡柱凈化，用高效液相色譜熒光檢測(cè)器測(cè)定，建立了油料中苯并(a)芘的測(cè)定方法。方法的線性范圍為0.5～20.0 ng/mL，檢出限為0.05 μg/kg，定量限為0.18 μg/kg，加標(biāo)回收率為71.9%～88.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.24%～10.11%。

本方法使用全自動(dòng)均質(zhì)器和全自動(dòng)固相萃取儀對(duì)樣品進(jìn)行提取和凈化，樣品前處理簡(jiǎn)單，無(wú)需專人守候，既節(jié)省人力又減少對(duì)人體的傷害。同時(shí)方法的準(zhǔn)確度較高，重復(fù)性好，可用于油料中苯并(a)芘含量的測(cè)定。