廖繼武， 楊海華， 王絲絲， 馬萍， 潘集陽

暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院精神醫(yī)學(xué)科(廣東廣州 510632)

廣泛性焦慮障礙(generalized anxiety disorder，GAD)是一常見精神障礙，終生患病率約為6%，以持續(xù)無明確對象或固定內(nèi)容的緊張不安及過度擔(dān)憂為特征，給患者社會功能造成嚴(yán)重影響并帶來沉重經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[1]，其確切病因及病理機(jī)制尚不明了。神經(jīng)肽類物質(zhì)神經(jīng)肽Y(neuropeptide Y，NPY)及P物質(zhì)(substance P，SP)主要分布于情感調(diào)節(jié)腦區(qū)及交感神經(jīng)末梢，與多巴胺、5-羥色胺及去甲腎上腺素等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)相互協(xié)調(diào)，共同調(diào)節(jié)情感、行為及應(yīng)激反應(yīng)[2]。動物研究發(fā)現(xiàn)NPY具有抗焦慮、抗抑郁作用[3]，而SP則與之相反，具有致焦慮、致抑郁作用[4]；遺傳學(xué)研究發(fā)現(xiàn)NPY單核基因rs16147多態(tài)性與GAD的發(fā)病有關(guān)[5]。據(jù)此可推測NPY與SP可能與GAD的病理機(jī)制有關(guān)，但迄今為止鮮見有關(guān)外周NPY、SP與GAD的關(guān)聯(lián)研究報(bào)道。本研究擬采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測GAD患者血漿NPY及SP水平并分析相關(guān)影響因素，以探討外周 NPY及SP能神經(jīng)元功能異常是否與GAD的發(fā)病有關(guān)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 GAD組 GAD組來源于2016年5月至2017年12月在暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院精神醫(yī)學(xué)科就診的門診及住院患者。入組標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)簡明國際神經(jīng)精神障礙訪談-中文版5.0.0(Mini-International Neuropsychiatric interview，MINI)結(jié)構(gòu)化臨床會晤符合《疾病和有關(guān)健康問題的國際統(tǒng)計(jì)分類》第10版(International Classification of Diseases，ICD-10)之GAD診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)18～65歲；(3)17項(xiàng)-漢密爾頓抑郁量表(17-item Hamilton rating scale for depression，HAMD-17)≤17分；(4)漢密爾頓焦慮量表(Hamilton Anxiety Scale，HAMA)≥14分；(5)小學(xué)以上文化者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)共病神經(jīng)系統(tǒng)器質(zhì)性疾病及其他軀體疾?。?2)共病其他精神障礙；(3)停用抗抑郁藥物、抗焦慮藥物、抗精神病藥物及鎮(zhèn)靜催眠藥物時(shí)間未超過該藥物5個(gè)半衰期；(4)妊娠和哺乳期婦女。共納入受試者50例，其中男22例，女28例，年齡18～60歲，平均(41.23±7.25)歲，首發(fā)12例，復(fù)發(fā)38例，發(fā)作次數(shù)1～5次，平均(2.73±0.46)次，總病程0.7～17年，平均(6.32±3.58)年。HAMD-17總分(11.43±4.67)分，HAMA總分(26.28±4.79)分。

1.1.2 正常對照組 正常對照組為同期社區(qū)招募的健康志愿者。入組標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)MINI臨床會晤不符合ICD-10任一精神障礙的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)無神經(jīng)系統(tǒng)器質(zhì)性疾病及其他軀體疾??；(3)18～65歲；(4)HAMD-17<7分；(5)HAMA<7分；(6)小學(xué)以上文化。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)近2周從事倒班工作及作息時(shí)間不規(guī)律；(2)妊娠或哺乳期婦女；(3)與GAD組存在血緣關(guān)系者。共有48例志愿者參加研究，其中男21例，女27例，年齡19～62歲，平均(40.18±6.56)歲。GAD組與正常對照組間性別分布(2=0.18，P=0.83)、年齡(t=0.24，P=0.61)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

本研究經(jīng)暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院倫理委員會審批，所有參研者均對本研究知情同意，并簽訂知情同意書。

1.2 研究方法 所有受試者在入組前2 d行肝功能、腎功能、甲狀腺功能及心肌酶等血液生化檢查及心電圖、頭顱CT檢查排除腦器質(zhì)性疾病及其他軀體疾病。

1.2.1 診斷工具 MINI為一簡單、可靠的定式訪談工具，與ICD-10診斷配套，主要用于篩查、診斷16種精神疾病和一種人格障礙，本研究以MINI作為診斷工具，所有被試由兩名精神科主治醫(yī)師分別進(jìn)行診斷，診斷一致者入組。

1.2.2 一般資料收集 自制一般狀況量表收集被試的社會人口學(xué)資料和臨床特征，包括姓名、性別、年齡、文化程度、婚姻狀況、總病程、家族史等。對照組僅填寫社會人口學(xué)資料。

1.2.3 臨床癥狀評估 以HAMD-17、HAMA評估被試的抑郁、焦慮癥狀的嚴(yán)重程度，依據(jù)HAMA總分將GAD組分為兩個(gè)亞組，HAMA≥29分者為重度焦慮組，14分≤HAMA≤28分為中度焦慮組。以上量表的評測由同一名精神科醫(yī)師在入組當(dāng)天或次日上午完成。

1.2.4 標(biāo)本采集及檢測 所有被試在入組后第2天上午8:00空腹采取靜脈血2 mL，置于EDTA抗凝試管中(抗凝管中預(yù)先加入抑酞酶40 μL)，靜置30 min，3 000 r/min 4℃離心10 min，取上清置于-80℃的冰箱中保存，分批采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血漿NPY及SP濃度。標(biāo)本檢測由第三方公司完成(檢測方不清楚具體分組狀況)，NPY及SP試劑盒靈敏度及批間差異均為0.01 ng/mL。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。性別分布比較采用2檢驗(yàn)；年齡、NPY、SP水平等正態(tài)分布資料兩組間比較采用兩樣本t檢驗(yàn)，多組間比較運(yùn)用單因素方差分析，兩兩比較采用Student-Newman-Keuls法。血漿NPY、SP水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，雙側(cè)檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 GAD組及不同亞組與對照組血漿NPY、SP水平比較 GAD組與正常對照組間血漿NPY、SP水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，較之正常對照組，GAD組血漿NPY水平降低(t=6.58，P<0.01)，而SP水平增高(t=4.79，P<0.01)。中度焦慮組、重度焦慮組與正常對照組間血漿NPY和SP水平差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=27.21，P<0.01；F=10.13，P<0.01)，與正常對照組比較，中度焦慮組、重度焦慮組NPY水平降低(P<0.01)，SP水平增高(P<0.01)，但中度焦慮與重度焦慮組間NPY及SP水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

組別例數(shù)NPYSP正常對照組488.27±2.185.38±1.94GAD組505.04±1.45?7.24±2.17? 中度焦慮組225.27±1.93?6.97±2.09? 重度焦慮組284.93±2.15?7.33±2.42?

*與正常對照組比較P<0.01

2.2 GAD組血漿NPY、SP水平與各臨床指標(biāo)的相關(guān)分析 分別以GAD患者血漿NPY、SP水平為應(yīng)變量，年齡、病程、HAMD總分及HAMA總分為自變量進(jìn)行Pearson相關(guān)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)NPY水平與HAMA總分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.41，P=0.03)，SP水平與HAMA總分呈正相關(guān)(r=0.58，P=0.02)，而NPY、SP水平與其他各指標(biāo)之間未發(fā)現(xiàn)明顯相關(guān)性(均P>0.05)，見表2。

表2 GAD組血漿NPY、SP水平與各臨床指標(biāo)的相關(guān)分析

3 討論

NPY及SP是哺乳動物及人體內(nèi)含量最為豐富、分布最為廣泛的神經(jīng)肽類物質(zhì)，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，兩者主要分布于下丘腦、杏仁核、海馬、紋狀體等情感調(diào)節(jié)相關(guān)腦區(qū)，外周主要分布于交感神經(jīng)末梢，與單胺類神經(jīng)遞質(zhì)、谷氨酸、γ-氨基丁酸等相互協(xié)調(diào)，共同參與情感、行為、應(yīng)激反應(yīng)及晝夜生物節(jié)律調(diào)節(jié)。NPY具有抗焦慮、抑郁作用，并且其作用主要通過Y1受體介導(dǎo)[2-3]，而SP則具有致焦慮、抑郁作用[4]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)GAD患者血漿NPY水平較對照組降低，而血漿SP水平較對照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但不同嚴(yán)重程度的GAD亞組血漿NPY、SP水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明GAD患者存在NPY能神經(jīng)元功能降低，而SP能神經(jīng)元功能增強(qiáng)，不同嚴(yán)重程度的GAD患者NPY能、SP能神經(jīng)元功能紊亂程度基本類似，提示NPY能、SP能神經(jīng)元功能紊亂可能與GAD的病理機(jī)制有關(guān)。本研究結(jié)果與動物研究結(jié)果具有一致性，動物研究發(fā)現(xiàn)低NPY水平的小鼠表現(xiàn)出更為明顯的焦慮樣行為[6]，高焦慮水平的小鼠對NPY的抗焦慮作用更為敏感[7]；小鼠鼻腔內(nèi)給予NPY后，小鼠探究行為增加，焦慮、抑郁樣行為明顯減少[8]；同時(shí)NPY能夠減輕腦室內(nèi)注射促腎上腺皮質(zhì)素釋放因子所誘導(dǎo)的焦慮及回避行為[9]。遺傳學(xué)動物模型研究也發(fā)現(xiàn)選擇性Y1受體敲除小鼠焦慮樣行為表現(xiàn)明顯增多[3]，杏仁核、海馬等腦區(qū)NPY高表達(dá)的大鼠在高架十字迷宮及開放實(shí)驗(yàn)中焦慮樣行為減少[10]。關(guān)于SP的動物研究也發(fā)現(xiàn)大鼠處于不同類型應(yīng)激模式(母嬰分離、足底電刺激等)下，特定腦區(qū)SP表達(dá)水平增高[11-12]，SP受體拮抗劑可減輕焦慮抑郁樣行為[4]。目前關(guān)于NPY、SP與焦慮障礙的臨床研究主要集中于創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙，早期遺傳學(xué)研究發(fā)現(xiàn)NPY單核基因rs16147多態(tài)性與GAD的發(fā)病有關(guān)，當(dāng)個(gè)體面臨應(yīng)激事件時(shí)，GAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加[5]。Y5受體基因的遺傳變異與驚恐障礙的發(fā)病有關(guān)[13]，并且驚恐障礙患者發(fā)病期血清NPY水平明顯增高，NPY水平的增高可緩沖異常增高的交感神經(jīng)活性[14]。較早的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，SP受體拮抗劑在人體內(nèi)也具有抗抑郁、抗焦慮作用[15]。本研究從外周角度證明GAD患者存在NPY能及SP能神經(jīng)元功能紊亂，間接支持上述臨床研究，并為GAD病理機(jī)制研究及治療提供了新思路與靶點(diǎn)。

相關(guān)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)GAD患者NPY水平與HAMA總分呈負(fù)相關(guān)，SP水平與HAMA總分呈正相關(guān)，而NPY 、SP水平與其他各指標(biāo)之間未發(fā)現(xiàn)明顯相關(guān)性。表明外周NPY水平越低，焦慮癥狀越嚴(yán)重，也SP水平越高，焦慮癥狀越明顯。目前尚未見有關(guān)GAD患者外周NPY、SP水平相關(guān)影響因素的研究報(bào)道。本研究相關(guān)分析結(jié)果與既往有關(guān)抑郁障礙的研究結(jié)果有一致性，Nikischa[16]的研究發(fā)現(xiàn)抑郁障礙患者NPY水平與焦慮癥狀嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)，與其他因子不相關(guān)。在亞組分析中我們雖然發(fā)現(xiàn)重度焦慮組NPY水平低于中度焦慮組[(4.93±2.15)μg/mLvs(5.27±1.93)μg/mL]，SP水平高于中度焦慮組[(7.33±2.42)μg/mLvs(6.97±2.09)μg/mL]，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與相關(guān)分析的結(jié)果似乎不一致，存在這一差異的原因首先可能與每個(gè)亞組的樣本量偏少，導(dǎo)致檢驗(yàn)效能不足有關(guān)；其次可能與GAD臨床癥狀較復(fù)雜，參與GAD病理機(jī)制的神經(jīng)遞質(zhì)較多，并且相互之間存在協(xié)調(diào)作用有關(guān)，但確切原因有待以后大樣本研究進(jìn)一步證實(shí)。

本研究僅為橫斷面研究，對研究對象沒有進(jìn)行隨訪，不能進(jìn)一步體現(xiàn)在GAD的病程變化過程 (如心理治療、藥物治療及物理治療等)中，血漿NPY和SP水平是否會伴隨焦慮癥狀的緩解而出現(xiàn)相應(yīng)變化；其次，外周NPY、SP水平是否可以反映中樞神經(jīng)系統(tǒng)的變化尚無定論；再次，參與GAD病理機(jī)制的神經(jīng)遞質(zhì)較多，NPY、SP是否與其他神經(jīng)遞質(zhì)具有相互作用，尚難得出一般性結(jié)論，這有待以后的研究進(jìn)一步證實(shí)。