黃海燕

摘要：隨著我國國民經(jīng)濟(jì)的良好發(fā)展和人民生活水平的顯著提高，人們?nèi)找嬷匾暭訌?qiáng)蔬菜農(nóng)殘檢測(cè)，以確保蔬菜農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全。當(dāng)前，酶抑制率法在普洱市思茅區(qū)蔬菜農(nóng)殘檢測(cè)中得到了日漸廣泛的應(yīng)用。本文簡(jiǎn)述了酶抑制率法的技術(shù)原理，淺析了酶抑制率法在普洱市思茅區(qū)蔬菜農(nóng)殘檢測(cè)中的具體操作方法，以期為酶抑制率法在蔬菜農(nóng)殘檢測(cè)中的應(yīng)用提供借鑒。

關(guān)鍵詞：酶抑制率法;蔬菜;農(nóng)殘檢測(cè)

普洱市思茅區(qū)地處云南省南部，位于瀾滄江下游。普洱市思茅區(qū)為保障農(nóng)產(chǎn)品安全，加強(qiáng)了對(duì)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)，嚴(yán)禁農(nóng)殘超標(biāo)的農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)入農(nóng)產(chǎn)品交易市場(chǎng)。普洱市思茅區(qū)加強(qiáng)了酶抑制率法在蔬菜農(nóng)殘檢測(cè)中的有效應(yīng)用。

一、酶抑制率法原理

酶抑制率法在普洱市思茅區(qū)蔬菜農(nóng)殘檢測(cè)中的應(yīng)用，主要是對(duì)蔬菜所含的有機(jī)磷類以及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)。酶抑制率法的原理如下：在特定條件下，有機(jī)磷類農(nóng)藥以及氨基甲酸酯類農(nóng)藥會(huì)抑制膽堿酯酶相應(yīng)的正常功能，且抑制率與上述兩類農(nóng)藥的實(shí)際濃度呈現(xiàn)出正相關(guān)關(guān)系。通常，酶對(duì)乙酞膽堿進(jìn)行催化，并使之水解，水解產(chǎn)物能和顯色劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)生成黃色物質(zhì)，在412nm處，借助分光光度計(jì)對(duì)吸光度隨時(shí)間變化呈現(xiàn)的相應(yīng)值進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定，進(jìn)而對(duì)抑制率進(jìn)行訓(xùn)算，借助抑制率即可對(duì)蔬菜樣品中所含的有機(jī)磷類農(nóng)殘以及氨基甲酸酯類農(nóng)殘進(jìn)行準(zhǔn)確判斷。以酶的抑制率表示農(nóng)殘檢測(cè)的結(jié)果判定。

二、酶抑制率法在普洱市思茅區(qū)蔬菜農(nóng)殘檢測(cè)中的具體操作方法

1.機(jī)型選擇。酶抑制率法相應(yīng)的農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀器生產(chǎn)廠家，基于單批次同一時(shí)間實(shí)施檢測(cè)的樣品不同數(shù)量，設(shè)計(jì)出相應(yīng)的各類通道類型，常見的通道類型有8通道、12通道以及%通道等。其中，8通道可對(duì)1到7個(gè)樣品實(shí)施同時(shí)檢測(cè);12通道可對(duì)1到12個(gè)樣品實(shí)施同時(shí)檢測(cè);96通道最多可對(duì)92個(gè)樣品實(shí)施同時(shí)檢測(cè)。其他通道類型的農(nóng)殘檢測(cè)儀器可對(duì)相應(yīng)數(shù)量的樣品實(shí)施同時(shí)檢測(cè)。要基于普洱市思茅區(qū)農(nóng)殘檢測(cè)的實(shí)際需要，對(duì)檢測(cè)機(jī)型進(jìn)行選擇，按照單批次農(nóng)殘檢測(cè)相應(yīng)的樣品實(shí)際數(shù)量對(duì)相應(yīng)的通道類m的檢測(cè)儀進(jìn)行選擇。對(duì)通道數(shù)呈現(xiàn)懸殊相差的農(nóng)殘檢測(cè)儀進(jìn)行使用，在對(duì)八道移液器進(jìn)行利用時(shí)，操作不慎極易影響檢測(cè)精準(zhǔn)度，且會(huì)浪費(fèi)檢測(cè)試劑。單批次農(nóng)殘檢測(cè)相應(yīng)的樣品數(shù)量較多時(shí)，選用通道數(shù)較少的農(nóng)殘檢測(cè)儀，極易延長(zhǎng)批次內(nèi)農(nóng)殘檢測(cè)操作時(shí)間而造成檢測(cè)誤差。

2.試劑配制

（1）PH8.0緩沖液。取重量為11.9g的無水磷酸氫二鉀，同時(shí)取重量為3.23g的磷酸二氫鉀，采用容積為1000ml的蒸餾水對(duì)之進(jìn)行溶解。

（2）顯色劑。取重量為160g的二硫代二硝基苯甲酸，同時(shí)取重量為15.6mg的碳酸氫鈉，采用容積為20ml的緩沖溶液對(duì)之進(jìn)行溶解，并將冰箱溫度設(shè)定為4℃對(duì)溶劑進(jìn)行保存。

（3）底物。取重量為25.0mg的硫代乙酸膽堿。采用容積為3.0m的蒸餾水對(duì)之進(jìn)行溶解，搖晃均勻后，將之放置于設(shè)定溫度為4℃的冰箱內(nèi)進(jìn)行保存?zhèn)溆?，但要確保保存期在兩周以下。

（4）乙酞膽堿酯酶。基于酶固有的活性情況，采用緩沖液對(duì)之進(jìn)行溶解，對(duì)3min相應(yīng)的吸光度變化值進(jìn)行控制，使之超過0.3。搖晃均勻后，將之放置在設(shè)定溫度為4℃的冰箱內(nèi)進(jìn)行保存?zhèn)溆?，要確保保存期在4天之內(nèi)。在實(shí)際農(nóng)殘檢測(cè)中，通常采用農(nóng)殘檢測(cè)儀器相應(yīng)生產(chǎn)廠家所提供的配套檢測(cè)試劑，遵循試劑說明書實(shí)施操作使用即可。

3.檢測(cè)步驟

（1）樣液制備。①樣品處理。對(duì)普洱市思茅區(qū)代表性較強(qiáng)的蔬菜樣品進(jìn)行選取，將蔬菜表面泥土清除干凈。對(duì)于葉菜類蔬菜，將之剪成1cm見方大小的碎片，取大約2g;對(duì)于塊莖類以及瓜果類蔬菜，削除其表皮，取大約2g;將上述經(jīng)過處理的蔬菜樣品放置在提取瓶中，通過可調(diào)移液器向提取瓶中加入容積為10ml的緩沖液。將提取瓶放置于多用可調(diào)速振蕩器中，對(duì)之進(jìn)行時(shí)長(zhǎng)兩分鐘的振蕩提取，然后進(jìn)行時(shí)長(zhǎng)3到5分鐘的靜置。②若浸提液呈現(xiàn)出較淺顏色，或者無色，借助移液管將浸提液對(duì)離心管進(jìn)行轉(zhuǎn)移，將之作為待測(cè)液;若浸提液相對(duì)較為渾濁，則借助移液管將浸提液吸取至離心管相應(yīng)的0.5ml刻度線位置，將之放置于微型離心機(jī)內(nèi)實(shí)施離心處理，使上層液實(shí)現(xiàn)澄清，將之取出后，放置于離心管架上，將之作為樣液。缺乏離心機(jī)設(shè)備時(shí)，可對(duì)浸提液實(shí)施過濾處理。③若浸提液存在較為嚴(yán)重的色素干擾狀況，則將浸提液對(duì)另一提取瓶進(jìn)行轉(zhuǎn)移，并將重量為0.1g到0.5g的活性炭加入該提取瓶中，將之放置于多用可調(diào)速振蕩器中，對(duì)之實(shí)施時(shí)長(zhǎng)5分鐘到6分鐘的振蕩處理（可基于脫色實(shí)際情況，適當(dāng)對(duì)脫色時(shí)間進(jìn)行延長(zhǎng)或者縮短），將經(jīng)過振蕩的浸提液取出，對(duì)之進(jìn)行時(shí)長(zhǎng)5分鐘到10分鐘的靜置，借助移液管將上層液進(jìn)行吸取至離心管相應(yīng)的0.5ml刻度線位置，將之放置于微型離心機(jī)內(nèi)實(shí)施離心處理，使上層液實(shí)現(xiàn)澄清，將之取出后，放置于離心管架上，將之作為樣液（要避免活性炭在樣液中存在殘留，對(duì)于含有活性炭殘留的樣液，要再次實(shí)施離心處理）。④蔥、蒜、韭菜、茭白等汁液中，含有影響酶的植物此生物質(zhì)，極易造成假陽性現(xiàn)象。對(duì)此類樣品進(jìn)行處理，可整株浸提，避免此生物質(zhì)發(fā)生干擾。⑤采用各類儀器，在樣液配置實(shí)際過程中會(huì)略微呈現(xiàn)出不同，例如，有的取樣品重量為1g，有的取樣品重量為2e，所需添加的緩沖液容積與之對(duì)應(yīng)為5ml和10ml，保持相同的比例。

4.配置對(duì)照液。配置對(duì)照液極為簡(jiǎn)易，僅需將緩沖液直接移取，即可將之作為對(duì)照液。

5.測(cè)試

（1）對(duì)照液測(cè)試：先將容積為2.5ml的緩沖液加入試管中，再將容積為0.1ml的酶液以及容積為0.1ml的顯色劑加入試管中，搖勻，將試管在37℃環(huán)境下進(jìn)行時(shí)長(zhǎng)為超過巧分鐘的放置。將容積為0.1ml的底物加入試管中并搖勻，此時(shí)，檢液即呈現(xiàn)出顯色反應(yīng)，應(yīng)立即將試管放置于儀器比色池內(nèi)，并對(duì)反應(yīng)3分鐘的吸光度實(shí)際變化值進(jìn)行記錄。（2）樣品溶液測(cè)試：先將容積為2.5ml的樣品提取液加入試管中，再實(shí)施與對(duì)照液測(cè)試相同的操作，最后對(duì)反應(yīng)3分鐘的吸光度實(shí)際變化值進(jìn)行記錄。（3）借助多通道移液器對(duì)酶試劑、顯色劑以及底物進(jìn)行移取，應(yīng)在Ⅴ型槽中倒入試劑，并對(duì)試劑進(jìn)行取用。借助移液器將容積我20u的酶加入微孔板孔內(nèi)，再借助移液器將容積為250ul的對(duì)照緩沖液加入其中。將微孔板放置于儀器內(nèi)部，按動(dòng)上下鍵對(duì)“啟動(dòng)振板”進(jìn)行選擇，之后按動(dòng)“確認(rèn)鍵”，對(duì)振板進(jìn)行啟動(dòng)，將酶和樣品有效混勻。完成板振后，對(duì)之進(jìn)行時(shí)長(zhǎng)10分鐘的靜置。然后，將10ul顯色劑以及10ul底物加入微板孔內(nèi)，立即將之放置于儀器內(nèi)，實(shí)施測(cè)量。

三、結(jié)語

綜上所述，酶抑制率法成本低廉，且靈敏準(zhǔn)確，在蔬菜農(nóng)殘檢測(cè)中的應(yīng)用日漸廣泛。在普洱市思茅區(qū)蔬菜農(nóng)殘檢測(cè)中，對(duì)酶抑制率法進(jìn)行應(yīng)用，要深入了解酶抑制率法原理，并遵循機(jī)型選擇、試劑配制、樣液制備、對(duì)照液制備以及測(cè)試的具體操作方法，有效保障酶抑制率法對(duì)蔬菜農(nóng)殘檢測(cè)的有效性。

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