陳海倫，宏小翠，羅幸波，易智君 （. 廣東省惠州市中心人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東惠州 5600；. 廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤中心，廣東湛江 5400；. 廣東省惠州市中心人民醫(yī)院病理科，廣東惠州5600）

宮頸癌在全球女性腫瘤中的發(fā)病率占第三位、 死亡率占第四位。細(xì)胞凋亡抑制因子及抑癌基因異常在人類多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中占有十分重要的地位[1-3]。生存素(Survivin)是目前發(fā)現(xiàn)的作用功能最強(qiáng)的凋亡抑制因子，是凋亡抑制蛋白 (inhibitors of apoptotic protein，IAP)家族成員之一，在人類大多數(shù)常見(jiàn)的惡性腫瘤中均有高表達(dá)[4]。Maspin(Mammary-serpin)基因?qū)儆诮z氨酸蛋白酶抑制基因，是一種腫瘤抑制基因產(chǎn)物，在多種人類腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要的作用[5]。我們采用免疫組化法檢測(cè)Survivin和Maspin在宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)和正常宮頸組織中的表達(dá)情況，旨在探討兩者在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中所起的作用。

1 材料和方法

1.1 材料來(lái)源

收集惠州市中心人民醫(yī)院和廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院2014年1月至2017年12月住院手術(shù)和門(mén)診活檢病理標(biāo)本135例，其中宮頸癌組織65例，CIN組織35例，正常宮頸組織35例。宮頸癌按FIGO制定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行相應(yīng)分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期20例，Ⅲ期25例，Ⅳ期10例；中分化25例，低分化21例，高分化19例。所有入選者均未行放化療或免疫靶向治療，各組年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 主要試劑及方法

即用型免疫組化試劑盒由中國(guó)福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司生產(chǎn)出品；兔抗人單克隆抗體Survivin和山羊抗人Maspin單克隆抗體均由美國(guó)Santa Cruz公司生產(chǎn)出品，稀釋濃度為1：50。采用免疫組織化學(xué)SP方法檢測(cè)，DAB染色液顯色，具體操作嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。采用PBS代替一抗方式作為陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)，采用該生物公司提供的陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

Survivin和Maspin分別以胞核和(或)胞漿中出現(xiàn)棕黃色或棕色顆粒視之為陽(yáng)性細(xì)胞。按照半定量積分法判斷兩者的具體表達(dá)情況，根據(jù)染色強(qiáng)度深淺和陽(yáng)性細(xì)胞所占的比例分別標(biāo)記為0～3分。染色強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)：未著色的標(biāo)記為0分、著色淺的標(biāo)記為1分、中度著色的標(biāo)記為2分、著色深的標(biāo)記為3分[6]。陽(yáng)性細(xì)胞百分率結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：高倍鏡(×400)下隨機(jī)選取10個(gè)視野，每個(gè)視野共計(jì)算100個(gè)細(xì)胞。計(jì)算其平均陽(yáng)性細(xì)胞百分率。根據(jù)平均陽(yáng)性細(xì)胞百分率標(biāo)記：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤5%的標(biāo)記為0分、6%～25%的標(biāo)記為1分，26%～49%的標(biāo)記為2分，≥50%的標(biāo)記為3分。兩項(xiàng)評(píng)分結(jié)果相加判定，0～1分標(biāo)記為(-)，2分 標(biāo) 記 為 (+)， 3～4分 標(biāo) 記 為 (++)， 5～6分 標(biāo) 記 為(+++)，(+)～(+++)均表示為陽(yáng)性[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行分析，各組間比較選用χ2分割法檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Survivin在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中的表達(dá)情況

Survivin在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為0.00%、51.43%和73.85%。其中宮頸癌和CIN組織中Survivin陽(yáng)性表達(dá)率均高于正常宮頸組織，且宮頸癌組織中Survivin陽(yáng)性表達(dá)更顯著，3組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或0.01)。詳見(jiàn)表1。

表1 Survivin在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中的表達(dá)情況

2.2 Survivin在宮頸癌組織中的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系

Survivin表達(dá)水平與宮頸癌組織學(xué)分化程度、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2 Survivin的表達(dá)與宮頸癌臨床病理因素的關(guān)系

2.3 Maspin在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中的表達(dá)情況

Maspin在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率分別為80.00%、57.14%和27.69%。宮頸癌組織中Maspin的陽(yáng)性表達(dá)率低于CIN組織和正常宮頸組織，且CIN組織中Maspin的陽(yáng)性表達(dá)率亦低于正常宮頸組織，3組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或0.01)。詳見(jiàn)表3。

表3 Maspin在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中的表達(dá)情況

2.4 Maspin在宮頸癌組織中的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系

Maspin的表達(dá)與宮頸癌FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05或0.01)。詳見(jiàn)表4。

表4 Maspin的表達(dá)與宮頸癌臨床病理因素的關(guān)系

3 討論

Survivin基因定位于人17q25染色體上，全長(zhǎng)14.7 kb，由3個(gè)內(nèi)顯子及4個(gè)外顯子構(gòu)成，編碼分子量為16.5 kDa的蛋白質(zhì)。Survivin在參與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)腫瘤血管形成等方面發(fā)揮十分重要的作用[7]。 Wang等[8]研究210例非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織標(biāo)本中Survivin和VEGF-A表達(dá)水平與患者生存率之間的關(guān)系，結(jié)果表明：NSCLC組織中Survivin的陽(yáng)性表達(dá)率為53.33%(112/210)，Survivin的表達(dá)水平與NSCLC臨床分期呈正相關(guān)。本研究結(jié)果表明，在正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組織和宮頸癌組織中，Survivin的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸上升；Survivin在宮頸癌組織中的表達(dá)水平與宮頸癌FIGO分期、組織學(xué)分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，說(shuō)明Survivin作為功能最強(qiáng)的凋亡抑制因子，在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。

Maspin基因定位于18q21.3，由4個(gè)內(nèi)含子和7個(gè)外顯子構(gòu)成，編碼一種含375個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì)，分子量為42 kDa，為絲氨酸蛋白酶抑制劑(serine protease inhibitor，Serpin)超家族的重要成員之一，可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、粘附、侵襲及轉(zhuǎn)移[9]。梁?jiǎn)⒘萚10]應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)102例胃癌患者手術(shù)切除的癌組織和癌周正常組織中Maspin的表達(dá)水平，結(jié)果提示Maspin在胃癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度明顯低于在正常組織中的表達(dá)，且癌組織中Maspin表達(dá)強(qiáng)度與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、漿膜浸潤(rùn)和5年生存率等明顯相關(guān)，提示Maspin表達(dá)與胃癌的生物學(xué)行為有關(guān)，可作為判斷胃癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移潛能和預(yù)后的參考指標(biāo)。本研究結(jié)果表明，隨著FIGO分期的增高，Maspin陽(yáng)性表達(dá)率依次降低(P＜0.01)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者M(jìn)aspin陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者(P＜0.05)，與王珍[11]的研究結(jié)論相似。

綜上所述，Survivin和Maspin在宮頸癌組織中異常表達(dá)，參與了宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程，其表達(dá)水平的檢測(cè)對(duì)分析、判斷宮頸癌的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移潛能、生物學(xué)行為和預(yù)后具有十分重要的意義。