陳鳳梅 程光民 曹雷 胡士林（山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院 山東 濰坊 261061 ）

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山東東部地區(qū)規(guī)?；膛鲆鹉膛：粑谰C合征的4種常見病毒血清學(xué)調(diào)查

陳鳳梅 程光民 曹雷 胡士林*（山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院 山東 濰坊 261061 ）

為了解目前山東東部地區(qū)牛病毒性腹瀉黏膜病病毒、傳染性鼻氣管炎病毒、呼吸道合胞體病毒、副流感病毒3型這4種病原的感染情況，為疫病防控提供依據(jù)，從山東濰坊、煙臺、青島、威海等地區(qū)采集牛血清樣品380份，采用ELISA方法進(jìn)行了4種病毒的抗體檢測。結(jié)果顯示，BVDV抗體陽性率為62.11%；IBRV gB抗體陽性率最低為42.63%；BRSV抗體陽性率82.11%；BPIV3抗體陽性率81.05%，BRSV和BPIV3感染情況基本持平。被調(diào)查的14個(gè)牛場有12個(gè)牛場曾發(fā)生過4種病毒的感染，4種病毒均感染過的牛的比率在83.68%(318/380)。研究表明，山東東部地區(qū)多數(shù)規(guī)模化奶牛場存在這4種病毒的感染。

目前奶牛呼吸道綜合征給在奶牛場時(shí)有發(fā)生有愈演愈烈之趨勢。其中牛傳染性鼻氣管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞體病毒(BRSV)和牛流行性腹瀉病毒(BVDV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)等病毒性病原及巴氏桿菌等細(xì)菌性病原共同感染，是主要引起牛呼吸道綜合癥(Bovine respiratory disease complex，BRDC)的原因，感染率可達(dá)到100%，死亡率可達(dá)35%或更高，給養(yǎng)牛業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[1-2]。（1）為了了解目前山東東部地區(qū)規(guī)?；膛鲞@4種病毒的感染情況，為牛場疫情預(yù)測及疫病防控提供依據(jù)，2017年8月至2018年5月，本團(tuán)隊(duì)隨機(jī)選取山東東部地區(qū)14個(gè)規(guī)?；膛鲞M(jìn)行了此次調(diào)查，所選牛場均未免疫上述4種傳染病疫苗。（2）牛病毒性腹瀉—黏膜病(bovine viral diarrhea-mucosal disease，BVD-MD)是由牛病毒性黏膜病病毒引起的一種傳染病，臨床上以發(fā)熱、腹瀉、黏膜糜爛、白細(xì)胞減少、流產(chǎn)或產(chǎn)畸型胎兒為主要特征，該病毒屬于黃病毒科、瘟病毒屬，是世界各地奶牛和肉牛發(fā)病、死亡以及造成經(jīng)濟(jì)損失的一個(gè)重要原因。病毒引起的急性疾病稱為牛病毒性腹瀉，引起的慢性持續(xù)性感染稱為黏膜病。1980年以來，我國從西德、美國、加拿大、新西蘭等10多個(gè)國家引進(jìn)奶牛和種牛，因處理不當(dāng)造成陸續(xù)在20多個(gè)省市自治區(qū)檢出此病[3]。（3）牛傳染性鼻氣管炎(Infectious bovine rhinotracheitis，IBR)又稱“壞死性鼻炎” “紅鼻病”，是牛皰疹病毒I型(BHV-1)引起的一種牛的呼吸道感染和繁殖障礙傳染病，主要表現(xiàn)為傳染性鼻氣管炎、眼結(jié)膜炎、高熱、流產(chǎn)、腦炎等。20~60日齡的犢牛、奶牛和肥育牛的易感性最高。運(yùn)輸、密飼或分娩所引起的應(yīng)激后暴發(fā)。自然病例潛伏期為2~6d。此病目前在世界范圍內(nèi)流行，對乳牛的產(chǎn)奶量、公牛的繁殖力及役用牛的使役力均有較大影響。在一些地區(qū)，IBR病毒抗體陽性率極高。（4）牛呼吸道合胞體(Bovine respiratory syncytial，BRS)是由牛呼吸道合胞體病毒(Bovine respiratory syncytial virus, BRSV)引起的牛呼吸道疾病。該病毒屬于副黏病毒科肺病毒屬。犢牛感染BRSV常導(dǎo)致嚴(yán)重的毛細(xì)支氣管炎和肺炎，嚴(yán)重者可死亡；15~18月齡牛發(fā)病率高達(dá)80%~100%；在一些牛場急性感染牛的死亡率為5%~20%[4]，給養(yǎng)牛業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[5]。1967年，該病毒在日本、比利時(shí)和瑞士首次檢出，并不久在英格蘭和美國分離到該病毒。目前已在所有品種的牛、綿羊、山羊和其他有蹄類動物中發(fā)現(xiàn)。近年來，我國分別從美國、日本、加拿大、澳大利亞等BRSV感染高發(fā)國引進(jìn)各種高產(chǎn)牛，導(dǎo)致BRSV在我國發(fā)生和流行[6]；因此了解該病在我國的流行情況，進(jìn)而做好防控至關(guān)重要。（5）牛副流行性感冒是由牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus 3，BPIV3)引起的牛的急性接觸性呼吸道傳染病，廣泛流行于世界各國。BPIV3屬于副黏病毒亞科呼吸道病毒屬，在呼吸道繼發(fā)細(xì)菌感染時(shí)發(fā)揮著重要作用，是引發(fā)運(yùn)輸熱或呼吸道綜合征的首要因素[5]。在有壓力的環(huán)境下，牛副流感病毒3型的單獨(dú)感染或混合感染(牛病毒性腹瀉黏膜病、冠狀病毒、傳染性鼻氣管炎、呼吸道合胞體病毒等)的情況下，通常會導(dǎo)致細(xì)菌感染，尤其是巴氏桿菌的感染。呼吸道內(nèi)皮細(xì)胞是BPIV3的最初靶細(xì)胞，但是2型肺細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞也會被感染，進(jìn)而擾亂肺部正常防衛(wèi)和清除機(jī)制，從而使機(jī)體更易受細(xì)菌感染導(dǎo)致肺炎。目前該病在世界范圍內(nèi)流行，尤其是美洲和亞洲，每年都給養(yǎng)牛業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[8]。我國在近期才開始研究該病毒，根據(jù)最近幾年的文獻(xiàn)報(bào)道，BPIV3己經(jīng)在我國內(nèi)蒙古、黑龍江、吉林、山東、山西和新疆等地存在[9-11]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動物 隨機(jī)選取山東東部地區(qū)14個(gè)規(guī)?；膛?，從中隨機(jī)選擇荷斯坦奶牛，TMR飼喂，2次/d擠奶。

1.1.2 儀器 （1）牛病毒性腹瀉-黏膜病抗體檢測試劑盒(美國IDEXX公司生產(chǎn))。（2）傳染性鼻氣管炎病毒gB抗體試劑盒(美國IDEXX公司生產(chǎn))。（3）牛呼吸道合胞體間接ELISA抗體檢測試劑盒(BIO-X公司生產(chǎn))。（4）牛副流感病毒3型間接ELISA抗體檢測試劑盒(BIO-X公司生產(chǎn))。

1.2 方法

1.2.1 血樣的采集 用10ml注射器隨機(jī)采取奶牛尾靜脈血大約5ml，立即將血液注入真空采血管，靜置，冷藏，盡快以3000rpm/min離心10min分離血清以備檢測。

1.2.2 檢測方法 （1）牛病毒性腹瀉-黏膜病抗體的檢測按照說明書進(jìn)行。（2）傳染性鼻氣管炎病毒gB抗體的檢測按照說明書進(jìn)行。（3）牛呼吸道合胞體抗體檢測按照說明書進(jìn)行。（4）牛副流感病毒3型抗體檢測按照說明書進(jìn)行。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 檢測結(jié)果按照陽性、陰性進(jìn)行判定，統(tǒng)計(jì)每個(gè)奶牛場牛病毒性腹瀉—黏膜病、傳鼻、呼吸道合胞體和副流感3型的血清抗體陽性率。

2 結(jié)果與分析

4種牛常見呼吸道疾病血清抗體檢查結(jié)果(見附表)。

附表 4種病毒血清抗體檢查結(jié)果 （%）

疾病BVD IBR BRSBPI3 牛場編號樣品數(shù)陽性數(shù)陽性率樣品數(shù)陽性數(shù)陽性率樣品數(shù)陽性數(shù)陽性率樣品數(shù)陽性數(shù)陽性率 1401537.50413073.1724241002424100 2393692.30322371.88322887.50322887.50 3292793.10241562.5028281002828100 419736.842328.70361233.30361233.30 53937.693200.00282485.70282485.70 618181002414.1724241002424100 7252184.0028517.8624833.3024833 8282485.713326.06282071.40282071.40 93000.002514.0024241002424100 10161593.7513861.54282485.70282485.70 1110880.0010550.00282485.70242083.30 12493163.27493673.472824100282485.70 13191789.47232191.30242485.70282485.70 14191263.16231356.5224241002424100 合計(jì)38023462.1138016242.6338031282.1138030881.05

2.1 牛病毒性腹瀉-黏膜病血清情況 依據(jù)BVDV血清抗體陽性率超過80%的牛場判定為BVDV高風(fēng)險(xiǎn)牛場(至少有一頭BVDV持續(xù)感染牛的存在)[12]，被調(diào)查的14個(gè)牛場中，有8個(gè)被判定為高風(fēng)險(xiǎn)牛場，其中1個(gè)牛場陽性率100%，4個(gè)牛場陽性率在90%以上。數(shù)據(jù)表明，被調(diào)查的牛場中有57.14%的牛場存在BVDV的持續(xù)感染；山東東部地區(qū)BVD血清抗體平均陽性率為62.11% (234/380)。

2.2 傳染性鼻氣管炎血清情況 依據(jù)曹杰等[13]提出的 IBRV血清抗體陽性率超過40%的小區(qū)和牛場判定為IBRV高風(fēng)險(xiǎn)牛場(可能出現(xiàn)明顯的臨床表現(xiàn))，被調(diào)查的14個(gè)牛場中，有9個(gè)被判定為高風(fēng)險(xiǎn)牛場，4個(gè)牛場陽性率在70%以上，1個(gè)牛場陽性率為零，2個(gè)牛場陽性率很低，綜合分析得出山東東部地區(qū)IBRV血清抗體平均陽性率為42.57%(162/380)。

2.3 牛呼吸道合胞體抗體情況 在被調(diào)查的14個(gè)牛場中，有7個(gè)牛場陽性率100%，僅有2個(gè)牛場陽性率33%，其他在71.4%~100%之間，陽性率很高。山東東部地區(qū)BRSV血清抗體平均陽性率為82.11%(312/380)。

2.4 牛副流感病毒3型抗體檢測情況 在被調(diào)查的14個(gè)牛場中，有6個(gè)牛場陽性率100%，僅有2個(gè)牛場陽性率33%，其他在80%以上，陽性率很高。山東膠東地區(qū)BPIV3血清抗體平均陽性率為81.05%(308/380)。

3 討論

3.1 牛病毒性腹瀉-黏膜病的血清 （1）BVDV感染會給奶牛養(yǎng)殖帶來巨大的損失，需引起從業(yè)者的高度重視。2006-2013年間，很多專家調(diào)查了BVDV的流行情況，奶牛血清陽性率為22.5%~94.1%[14]。本次被調(diào)查的山東膠東地區(qū)14個(gè)牛場中，BVD血清抗體陽性率為62.17%，與王淑娟等[15]調(diào)查山東陽性率83.3%相比較低。本次調(diào)查牛場中有57.14%的牛場有BVDV持續(xù)感染牛(PI牛)的存在，說明山東濰坊及膠東地區(qū)牛場BVDV感染嚴(yán)重，應(yīng)進(jìn)行BVDV清除和控制。（2）在BVD凈化策略中，BVD疫苗發(fā)揮積極的作用，通過聯(lián)合應(yīng)用滅活疫苗和弱毒疫苗，能有效防止胎兒的持續(xù)性感染和臨床感染。BVDV 持續(xù)性感染牛是重要的傳染源，目前，耳組織檢測已應(yīng)用于BVD持續(xù)性感染牛的鑒定[16]，連續(xù)一年無新生 BVD 持續(xù)性感染牛即表明牛群已經(jīng)凈化。牛群長久保持凈化狀態(tài)，仍需加強(qiáng)防疫檢疫措施，嚴(yán)格執(zhí)行新進(jìn)牲畜的隔離檢疫、消毒措施，嚴(yán)格產(chǎn)地、運(yùn)輸和交易市場及其進(jìn)出口檢疫，及時(shí)掌握牛場中BVDV的流行動態(tài)[17]。各大牛場需制定BVD清除計(jì)劃，加強(qiáng)牛群中PI牛的檢測，全群篩查淘汰PI牛，以逐步達(dá)到凈化目的。

3.2 傳染性鼻氣管炎的血清 （1）IBR被OIE列為法定報(bào)告性動物疫病我國也將其列為進(jìn)出口牛的必檢疾病。IBRV感染可引起牛群廣泛的免疫抑制，因而病畜常會繼發(fā)感染其他病毒或細(xì)菌[18]。IBRV可損傷巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，從而降低其免疫應(yīng)答能力，抑制IL-2受體表達(dá)，降低外周血單核淋巴細(xì)胞有絲分裂的速度，減少循環(huán)T淋巴細(xì)胞數(shù)[19]。單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞被感染后會導(dǎo)致吞噬能力和抗體依賴性細(xì)胞毒性作用的減弱[17]。（2）該病在美國每年至少造成5億美元的損失，我國尚未見有官方統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。據(jù)李棟梁等[23]調(diào)查北京地區(qū)IBRV陽性率在50.52%。在本次被調(diào)查的14個(gè)牛場中，總體IBR gB抗體陽性率為42.57%，該試劑盒可區(qū)分疫苗抗體和野毒感染產(chǎn)生的抗體，即本次被調(diào)查的對象牛中有42.57%的野毒感染牛。IBRV除了會引起呼吸道感染外還可也可引起流產(chǎn)，一般成母牛年流產(chǎn)率高于10%的牛場，除監(jiān)測布氏桿菌病的感染情況以外，要加強(qiáng)對IBR的檢測。（3）目前，許多發(fā)達(dá)國家正在使用基因缺失疫苗降低發(fā)病率和感染率，同時(shí)利用鑒別診斷試劑盒，檢測、篩選出野毒感染牛，進(jìn)行隔離飼養(yǎng)或直接淘汰，逐步使牛群得到凈化。我國IBR感染形勢嚴(yán)峻，應(yīng)加大力度研發(fā)疫苗和檢測方法，逐步實(shí)施IBR的控制和凈化。

3.3 牛呼吸道合胞體抗體 牛呼吸道合胞體在牛群中的隱性感染是非常普遍的[7]。本次調(diào)查牛呼吸道合胞體血清抗體陽性率在82.11%。該病毒會引起肺部器官的纖毛上皮損傷，導(dǎo)致肺清除能力下降，從而誘發(fā)繼發(fā)性細(xì)菌感染。G蛋白是及病毒蛋白中特有的，因其高度的O-linked糖基化的特性有助于逃脫免疫監(jiān)控。盡管免疫對牛的合胞體病毒感染是不完備的和短暫的，但接種疫苗仍然是控制的常用手段。美國的數(shù)據(jù)表明，接種疫苗能減少與牛合胞體病毒感染相關(guān)疾病的嚴(yán)重暴發(fā)；無論如何新疫苗的研制仍在進(jìn)行中，包括載體疫苗及其類似物。

3.4 牛副流感3型抗體 牛副流感是引起牛呼吸系統(tǒng)疾病最重要的病毒之一。因BPIV3多發(fā)生于運(yùn)輸后的牛，被認(rèn)為是導(dǎo)致運(yùn)輸熱的主要病毒[21]。但該病毒常和其他病原混合感染，很少發(fā)現(xiàn)該病毒單一致病現(xiàn)象。H gglund S等[22]對病毒引起的呼吸道系統(tǒng)疾病進(jìn)行6年的研究發(fā)現(xiàn)，BPIV3在牛群中每年都會造成感染，并且具有很高的感染水平，Solís-Calderón JJ等[23]調(diào)查發(fā)現(xiàn)墨西哥肉牛BPIV3血清陽性率為85.6%。芬蘭進(jìn)行的牛血清學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)80%的血清樣本呈BPIV3陽性[24]。我國霍志云等[25]調(diào)查BPIV3陽性率吉林97.35%，內(nèi)蒙84.31%，山西95.15%。本次調(diào)查山東膠東地區(qū)BPIV3的陽性率81.05%?？傊?，從已經(jīng)獲取的調(diào)查資料得出BPIV3陽性率都很高。而目前我國尚未找到控制牛副流感病毒3型的相關(guān)疫苗，僅通過提高牛免疫力等途徑控制牛呼吸道疾病綜合征，應(yīng)積極借鑒國外的防控機(jī)制，防止牛群病情加重。

3.5 牛場混合感染情況 所調(diào)查的引起奶牛呼吸道綜合征的4種病毒病中，IBR平均陽性率最低為42.63%；BRSV抗體陽性率82.11%；BPIV3抗體陽性率81.05%，，BRSV和BPIV3陽性率很高，感染情況基本持平。被調(diào)查的14個(gè)牛場有12個(gè)牛場曾經(jīng)發(fā)生過4種病毒的感染，4種病毒均感染過的牛的比率在83.68%(318/380)，有1個(gè)牛場BVD陰性，1個(gè)牛場IBR 陰性。經(jīng)咨詢，BVD陰性的牛場已經(jīng)做過牛群中PI牛的凈化?，F(xiàn)在部分牛場已經(jīng)意識到BVD所帶來的弊端，開始實(shí)施凈化，而其他3種病毒的重視程度還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠?？傊?，在山東東部地區(qū)，4種病毒的感染情況不容樂觀，需要各部門配合做好相應(yīng)的防控措施，以減少奶農(nóng)經(jīng)濟(jì)損失。

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（2019–03–26）

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系牛產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)項(xiàng)目(SDAIT-09-05)

S858.23

A

1007-1733(2019)05-0046-04