黃傘多糖對(duì)競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員抵抗能力的作用機(jī)理

袁 峰

（中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)（北京）體育與藝術(shù)教學(xué)部，北京 100193）

運(yùn)動(dòng)抵抗能力相關(guān)研究已經(jīng)表明，長(zhǎng)期從事高強(qiáng)度訓(xùn)練的競(jìng)技運(yùn)動(dòng)會(huì)形成顯著的運(yùn)動(dòng)型抵抗抑制現(xiàn)象，造成運(yùn)動(dòng)員抵抗能力明顯低下，對(duì)不同感染性疾病的抵抗能力顯著降低。不但會(huì)對(duì)運(yùn)動(dòng)能力與比賽成績(jī)產(chǎn)生影響，還會(huì)影響運(yùn)動(dòng)壽命與身體健康[1,2］。所以對(duì)競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員抵抗能力作用機(jī)理進(jìn)行研究，為特別關(guān)鍵且亟需解決的重要課題[3］。

造成競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)性免疫抑制的原因較為復(fù)雜，涉及神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)以及免疫系統(tǒng)，還和免疫增強(qiáng)類信息物以及免疫抑制類信息物的平衡相關(guān)[4］。當(dāng)前常用的調(diào)整競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員抵抗能力的方法，主要有補(bǔ)充免疫細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、攝入抗氧化劑及微量元素等[5,6］。然而這些方法的效果通常不理想。黃傘屬于食用菌，主要生長(zhǎng)在楊樹、柳樹和樺樹上。藥用價(jià)值很高，能夠抑菌抗癌、降血脂、調(diào)節(jié)抵抗力以及抗氧化。

本研究將黃傘作為實(shí)驗(yàn)材料，通過多糖提取工藝對(duì)黃傘多糖進(jìn)行提取，研究提取的黃傘多糖對(duì)競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員抵抗能力的作用機(jī)理，旨在提高競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員抵抗能力。

1 研究對(duì)象和方法

1.1 研究對(duì)象

選擇專業(yè)男子籃球運(yùn)動(dòng)員20人，其中一級(jí)運(yùn)動(dòng)員8人，二級(jí)運(yùn)動(dòng)員12人。所有研究對(duì)象都沒有代謝和免疫系統(tǒng)疾病史，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前1個(gè)月無患病，同時(shí)志愿參與實(shí)驗(yàn)。將研究對(duì)象任意劃分成實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組，每組10人，詳細(xì)情況用表1進(jìn)行描述。

表1 研究對(duì)象詳細(xì)情況Tab.1 Details of the research subjects

1.2 黃傘多糖提取

提取黃傘多糖時(shí)，將子實(shí)體粉作為基礎(chǔ)材料，粗多糖提取過程如下。對(duì)子實(shí)體干粉進(jìn)行稱量，添加25倍體積蒸餾水，搖勻后，進(jìn)行冷凝回流處理，提取1 h；經(jīng)離心處理獲取上清液，對(duì)其進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，將其濃縮到原體積的20%；在常溫下冷卻，在攪拌的同時(shí)添加3倍體積的乙醇，進(jìn)行密封，醇析15 h；離心將上清液濾除，獲取沉淀物，經(jīng)洗滌、沉淀、干燥處理，得到粗多糖。

得到粗多糖后，對(duì)其進(jìn)行提純，詳細(xì)過程如下。通過Sevage法將黃傘粗多糖中的蛋白進(jìn)行濾除，對(duì)子實(shí)體粗多糖進(jìn)行稱量，配置為16 mg·mL-1的多糖溶液；取一定量溶液置于分液漏斗，添加相同體積的Sevage試劑[7］，搖勻后靜置，離心濾除沉淀物，得到上層多糖溶液；在高溫環(huán)境下干燥到恒重，獲取純化多糖，制成黃傘多糖膠囊。

1.3 研究方法

1.3.1 服用黃傘多糖膠囊方法

實(shí)驗(yàn)選擇雙盲法，實(shí)驗(yàn)組運(yùn)動(dòng)員在實(shí)驗(yàn)期間每天早晚服用黃傘多糖膠囊，每次2粒，共服用35 d。對(duì)照組運(yùn)動(dòng)員除不服用黃傘多糖膠囊外，其余與實(shí)驗(yàn)組運(yùn)動(dòng)員相同。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組運(yùn)動(dòng)員都進(jìn)行心率每分鐘180次～190次強(qiáng)度的運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，飲食正常。

1.3.2 取樣時(shí)間和指標(biāo)測(cè)試

實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組運(yùn)動(dòng)員在訓(xùn)練前與訓(xùn)練結(jié)束后第2天清晨在安靜狀態(tài)下取肘靜脈血5 mL，經(jīng)肝素抗凝后待檢測(cè)。

血清免疫球蛋白IgA、IgG以及IgM通過免疫比濁法，采用半自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測(cè)試[8,9］。

T淋巴細(xì)胞亞型CD4＋、CD8＋百分比計(jì)數(shù)和CD4＋/CD8＋值通過Annexin V染色法，利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行測(cè)試[10］。

NK細(xì)胞活性檢測(cè)通過免疫組化染色法，利用流式細(xì)胞儀測(cè)試。IL-2通過放射免疫分析法進(jìn)行測(cè)試[11,12］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

全部實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均通過SPSS 12.0軟件進(jìn)行處理分析，通過均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式進(jìn)行描述，組間通過t檢驗(yàn)比較，P＜0.05代表差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[13］。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 黃傘多糖對(duì)免疫球蛋白的作用機(jī)理

IgA、IgG和IgM代表3種不同的免疫球蛋白，依次為粘膜免疫中的主要分泌抗體、免疫反應(yīng)抗體以及初次免疫抗體，3種免疫球蛋白和運(yùn)動(dòng)員抵抗能力有密切關(guān)系，訓(xùn)練前后實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組3種免疫球蛋白變化情況用表2進(jìn)行描述。

表2 訓(xùn)練前后2組競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員免疫球蛋白變化情況Table 2 Changes of immunoglobulin in athletes of two groups before and after Training

分析表1可以看出，競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員訓(xùn)練后，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組IgA、IgG以及IgM變化顯著，和訓(xùn)練前相比，實(shí)驗(yàn)組IgA、IgG以及IgM明顯增加，對(duì)照組IgA、IgG以及IgM明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），實(shí)驗(yàn)組IgA、IgG以及IgM非常顯著性高于對(duì)照組 （P＜0.01）。

2.2 黃傘多糖對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群的作用機(jī)理

訓(xùn)練前后實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群變化情況用表3進(jìn)行描述。

分析表3可知，對(duì)照組運(yùn)動(dòng)員訓(xùn)練后CD4＋百分比計(jì)數(shù)和CD4＋/CD8＋值有所降低，CD8＋百分比有所升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），實(shí)驗(yàn)組運(yùn)動(dòng)員訓(xùn)練后CD4＋百分和CD4＋/CD8＋值相比顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），CD8＋百分比在一定程度上有所降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。訓(xùn)練后實(shí)驗(yàn)組運(yùn)動(dòng)員CD4＋百分和CD4＋/CD8＋值顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），CD8＋百分比顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表3 訓(xùn)練前后2組競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員T淋巴細(xì)胞亞群變化情況Table 3 Changes of T lymphocyte subsets in two groups of athletes before and after training

2.3 黃傘多糖對(duì)NK細(xì)胞活性和IL-2水平的作用機(jī)理

訓(xùn)練前后實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組NK細(xì)胞活性和IL-2水平變化情況用表4進(jìn)行描述。

分析表4可知，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組NK水平訓(xùn)練后較訓(xùn)練前均有顯著變化，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），訓(xùn)練后實(shí)驗(yàn)組較實(shí)驗(yàn)前有顯著變化，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而IL-2水平在實(shí)驗(yàn)過程中一直無顯著變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表4 訓(xùn)練前后2組競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員NK細(xì)胞活性和IL-2水平變化情況Table 4 Changes of NK cell activity and IL-2 level in two groups of athletes before and after training

3 討論

競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員在高強(qiáng)度訓(xùn)練工程中，會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞免疫抑制，導(dǎo)致機(jī)體對(duì)病原微生物易感性提高，容易感染疾病。黃傘多糖是一種可提高機(jī)體抵杭能力的物質(zhì)，本研究探索黃傘多糖對(duì)競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員抵抗能力的作用機(jī)理。

免疫球蛋白為人體重要的免疫因素，其升高或下降和競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員身體疲勞、疾病以及營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)均存在關(guān)系，所以在實(shí)際應(yīng)用中，通常通過IgA、IgG以及IgM含量變化對(duì)競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員免疫機(jī)能狀態(tài)進(jìn)行評(píng)價(jià)，從而得到經(jīng)濟(jì)運(yùn)動(dòng)員抵抗能力的評(píng)價(jià)結(jié)果。

經(jīng)35 d實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組IgA、IgG以及IgM均出現(xiàn)顯著改變，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中實(shí)驗(yàn)組運(yùn)動(dòng)員IgA、IgG以及IgM顯著升高，對(duì)照組運(yùn)動(dòng)員IgA、IgG以及IgM顯著降低。因?yàn)辄S傘多糖中含有的多糖成分可有助于刺激吞噬細(xì)胞與胸腺細(xì)胞等的活化，在存在外界細(xì)菌與病毒入侵的情況下，可增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)員體抵抗能力。有研究表明，黃傘多糖可促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，為機(jī)體提供營(yíng)養(yǎng)，增強(qiáng)抵抗能力，同時(shí)可提高機(jī)體抗氧化能力，延緩器官衰老。

本研究結(jié)果說明，在35 d大強(qiáng)度訓(xùn)練過程中，服用黃傘多糖膠囊可促進(jìn)IgA、IgG以及IgM的合成，幫助增強(qiáng)競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員的抵抗能力，以達(dá)到防治免疫抑制，降低干擾疾病風(fēng)險(xiǎn)的目的。

經(jīng)大量研究表明，T淋巴細(xì)胞及其亞群與運(yùn)動(dòng)員抵抗能力有重要關(guān)系，如高強(qiáng)度訓(xùn)練后期CD4＋/CD8＋值顯著降低，代表運(yùn)動(dòng)員免疫功能出現(xiàn)紊亂。

T淋巴細(xì)胞是一種非常關(guān)鍵的免疫活性細(xì)胞，按照表面標(biāo)志CD分子的差異可將其劃分成CD4＋T細(xì)胞與CD8＋T細(xì)胞2種亞群，依據(jù)功能差異可將其劃分成輔助性T細(xì)胞、抑制性T細(xì)胞以及細(xì)胞毒性T細(xì)胞。T淋巴細(xì)胞為免疫應(yīng)答中細(xì)胞免疫的重要執(zhí)行者，是體現(xiàn)機(jī)體抵抗能力的關(guān)鍵指標(biāo)。CD4＋/CD8＋值升高代表免疫應(yīng)答的正調(diào)節(jié)占優(yōu)勢(shì)，若其值低于1，則認(rèn)為機(jī)體抵抗能力很差。有研究表明，經(jīng)長(zhǎng)期高強(qiáng)度訓(xùn)練，運(yùn)動(dòng)員抵抗力會(huì)下降，表現(xiàn)為CD8＋T細(xì)胞過度激活以及CD4＋T細(xì)胞過度抑制。

本研究表明，對(duì)照組訓(xùn)練后CD4＋百分比和CD4＋/CD8＋值顯著降低，CD4＋/CD8＋值趨近于 1，說明高強(qiáng)度訓(xùn)練令運(yùn)動(dòng)員抵抗能力降低。實(shí)驗(yàn)組訓(xùn)練后CD4＋百分比較訓(xùn)練前增加，說明實(shí)驗(yàn)組運(yùn)動(dòng)員訓(xùn)練后抵抗能力提高，訓(xùn)練后CD4＋百分比和CD4＋/CD8＋值顯著升高，說明實(shí)驗(yàn)組運(yùn)動(dòng)員抵抗能力較對(duì)照組顯著提高，這主要是因?yàn)辄S傘多糖對(duì)競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員抵抗能力有積極作用。

NK細(xì)胞為免疫系統(tǒng)的重要效應(yīng)細(xì)胞，可有效調(diào)節(jié)免疫功能，改善機(jī)體抵抗力。大部分研究人員認(rèn)為，短期高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)能夠令NK細(xì)胞活性提升，但長(zhǎng)期高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)會(huì)令NK細(xì)胞活性降低。本研究表明，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組運(yùn)動(dòng)員訓(xùn)練后NK細(xì)胞活性都顯著降低（P＜0.05），但實(shí)驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），說明黃傘多糖能夠提高NK細(xì)胞活性。IL-2由輔助性淋巴細(xì)胞分泌的重要細(xì)胞因子，在大部分免疫反應(yīng)中起到了調(diào)節(jié)的作用，能夠增強(qiáng)免疫應(yīng)答反應(yīng)，提升NK細(xì)胞活性。本研究表明，訓(xùn)練前后IL-2水平無顯著差異（P＞0.05），訓(xùn)練后對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組IL-2水平也無顯著差異。

綜上可知，35 d高強(qiáng)度訓(xùn)練能令競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員抵抗能力降低，黃傘多糖可有效提高競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員抵抗能力，調(diào)節(jié)免疫力，其作用機(jī)理為提高CD4＋百分和CD4＋/CD8＋值、T淋巴細(xì)胞亞群水平以及NK細(xì)胞活性。