鐘 建胡 芳董驥馳程蛟文崔竣杰胡開林*
(1華南農業(yè)大學園藝學院,廣東廣州 510642;2佛山科學技術學院食品科學與工程學院,廣東佛山
528000)
卷須是瓜類蔬菜及其他攀援類植物具有的一種線狀結構的特殊器官,通過螺旋狀生長纏繞到其他物體上,為植株提供攀援的能力(Sousa-Baena et al.,2018),從而使攀援植物能生長到更廣泛的地方,以獲得更多的生存空間,提高光合作用效率,促進傳花授粉等(Hofer et al.,2009)。
植物卷須的研究可以追溯到達爾文時代。達爾文認為,植物卷須可能來源于各種各樣的器官結構(Darwin,1875)。例如在豌豆中,卷須是由葉片進化而來的,它是葉片的形態(tài)同源物,TI基因是控制豌豆生成卷須的關鍵因素(Hofer et al.,2009);在葡萄中,卷須一般有2~3個分叉,它作為花序的形態(tài)同源物,是潛在的生殖器官,同時它也是為葡萄植株攀爬提供支持的營養(yǎng)附屬器(張彥蘋 等,2013);黃瓜卷須的同源器官是側枝,調控黃瓜卷須發(fā)育的關鍵基因TEN編碼黃瓜中保守的TCP轉錄因子,它只在卷須中特異表達(Wang et al.,2015)。
瓜類蔬菜卷須的初始發(fā)生是植株從幼苗期轉入抽蔓期的重要標志,研究其初始發(fā)生節(jié)位的遺傳規(guī)律對于瓜類蔬菜高效栽培管理以及熟性育種具有重要參考意義。關于葫蘆科蔬菜作物卷須是否分叉,前人認為,黃瓜(Cucumis sativus L.)、南瓜〔Cucurbita moschata(Duch. ex Lam.)Duch. ex Poiret〕、絲瓜〔Luffa cylindrica(L.)Roem.〕和紅瓜〔Coccinia grandis(L.)Voigt〕是分叉的,馬交兒〔Zehneria japonica(Thunberg)H. Y. Liu〕是不分叉的(Amonwu & Okoli,2013)??喙希∕omordica charantia L.)屬于葫蘆科苦瓜屬攀援性草本植物,起源于非洲熱帶地區(qū)(Schaefer & Renner,2010),其卷須存在分叉和不分叉2種類型,且后者較前者更普遍發(fā)生(Amonwu & Okoli,2013;Sidhu &Pathak,2016),關于苦瓜植株卷須發(fā)生的初始節(jié)位(簡稱卷須初始節(jié)位)及其分叉的遺傳規(guī)律鮮見報道。
通過對廣泛收集的苦瓜種質資源進行觀察和篩選,選擇卷須初始節(jié)位及分叉存在顯著差異的4份苦瓜自交系為材料,通過構建遺傳分離群體,對2個性狀分別進行遺傳分析,旨在為揭示苦瓜植株卷須發(fā)生及發(fā)育的遺傳機制奠定基礎。
以卷須初始節(jié)位存在顯著差異的栽培苦瓜自交系佛瀝112為母本和野生苦瓜自交系THMC170為父本,通過人工隔離雜交及其后代自交相繼獲得F1和F2材料,對苦瓜卷須初始節(jié)位進行遺傳分析。以卷須分叉的栽培苦瓜自交系佛瀝734為母本和卷須不分叉的半野生苦瓜自交系AVBG1602為父本,同樣通過人工隔離雜交及其后代自交相繼獲得F1和F2材料,對苦瓜卷須分叉性進行遺傳分析。
2套4世代材料(P1、P2、F1、F2)均于2018年3月14日種植于華南農業(yè)大學躍進北試驗基地大棚內,常規(guī)栽培管理。8月10日,重復種植栽培苦瓜自交系佛瀝734和半野生苦瓜自交系AVBG1602及其F1和F2材料于華南農業(yè)大學增城教學科研基地,常規(guī)栽培管理,用于驗證苦瓜卷須分叉遺傳規(guī)律。
苦瓜種子萌發(fā)后,最初形成的2片真葉為對生葉,以后形成的為互生葉。以第1片互生葉作為苦瓜植株的第1節(jié),當苦瓜植株長至抽蔓期開始形成卷須時,統(tǒng)計苦瓜卷須初始節(jié)位。
苦瓜植株(包括卷須分叉和卷須不分叉2種類型)最初形成的卷須絕大多數(shù)是不分叉的。但是,對于卷須分叉類型的植株而言,當植株生長至20~30片葉時就會形成分叉的卷須,而對于卷須不分叉類型的植株而言,則仍然產生不分叉的卷須。為了準確統(tǒng)計苦瓜植株卷須分叉的有無,本試驗調查了每株植株40節(jié)以內主莖的卷須分叉情況,以40節(jié)內卷須存在分叉的記為卷須分叉,均不分叉的記為卷須不分叉。
使用Excel和SPSS軟件對佛瀝112和THMC170及其F1、F24個世代的卷須初始節(jié)位進行統(tǒng)計和分析。運用Shapiro-Wilk(W檢驗)對分離世代F2進行正態(tài)分布檢驗,當P>0.05時,表示符合正態(tài)分布。再根據(jù)偏度(Skewness)和峰度(Kurtosis)值判斷正態(tài)分布的具體情況或類型,當Sk=0,Ku=0時,表示分布呈正態(tài),即眾數(shù)等于算術平均數(shù);當Sk>0時,表示分布呈正偏態(tài),即眾數(shù)位于算術平均數(shù)的左側;當Sk<0時,表示分布呈負偏態(tài),即眾數(shù)位于算術平均數(shù)的右側。
采用植物數(shù)量性狀主基因+多基因混合遺傳模型(蓋鈞鎰 等,2003),對4個世代的苦瓜卷須初始節(jié)位進行聯(lián)合分析,通過極大似然法和IECM(iterated expectation and conditional maximization)算法對混合分布中的有關成分分布參數(shù)做出估計,然后利用AIC(Akaike’s information criterion)準則和一組適合性測驗,選擇最優(yōu)遺傳模型,并估計主基因和多基因遺傳率、方差等遺傳參數(shù)。在適合性測驗的5個統(tǒng)計量(U12、U22、U32、nW2和Dn)中,U12、U22和U32為均勻性檢驗,nW2為Smirnov檢驗,Dn為Kolmogorov檢驗;前三者是對分布的某一數(shù)字特征進行檢驗,即檢驗分布的平均數(shù)、二階原點矩和二階中心矩;后兩者是對分布整體進行檢驗。分析軟件由南京農業(yè)大學國家大豆改良中心提供。
卷須分叉的遺傳分析采用卡方檢驗。
統(tǒng)計分析結果表明(表1),佛瀝112(P1)的卷須初始節(jié)位為(3.64±0.50)節(jié),THMC170(P2)的卷須初始節(jié)位為(4.62±0.65)節(jié),兩者之間存在顯著差異(P<0.05),并且F1卷須初始節(jié)位為(3.39±0.70)節(jié),略低于佛瀝112(P1),但是差異不顯著(P>0.05),而F1與THMC170(P2)差異顯著(P<0.05)。說明苦瓜植株卷須發(fā)生的初始節(jié)位低對初始節(jié)位高符合完全顯性遺傳。
表1 佛瀝112(P1)、THMC170(P2)及其F1的卷須初始節(jié)位統(tǒng)計
對佛瀝112(P1)和THMC170(P2)的F2群體(n=119)卷須初始節(jié)位進行統(tǒng)計。結果表明(圖1),卷須初始節(jié)位在F2群體中呈現(xiàn)連續(xù)分布,符合數(shù)量性狀遺傳特征。W檢驗結果表明,卷須初始節(jié)位在F2群體中呈正偏態(tài)分布,即偏向于低值親本。
對佛瀝112(P1)和THMC170(P2)及其F1、F24個世代的卷須初始節(jié)位進行主基因+多基因混合遺傳模型分析,獲得1對主基因(A)、2對主基因(B)、多基因(C)、1對主基因+多基因(D)和2對主基因+多基因(E)5類24種遺傳模型的極大似然函數(shù)值和AIC值(表2)。
根據(jù)最小AIC值原則,初步判定E-3、E-4、E-5和E-6模型較為適合,進一步對此4個初選模型進行一組適合性檢驗。結果表明(表3),在4個世代的20個統(tǒng)計量中,所選4個模型的統(tǒng)計量顯著個數(shù)均為1個。經似然比檢驗,E-6模型與E-3模型(χ2=0.01,P>0.05)、E-6模型與E-4模型(χ2=0.01,P>0.05)、E-6模型與E-5模型(χ2=0,P>0.05)之間沒有顯著差異。由于E-6模型的AIC值最小,因此認為苦瓜的卷須初始節(jié)位遺傳符合E-6模型,即符合2對等顯性主基因+加性-顯性多基因混合遺傳模型。
圖1 苦瓜植株卷須初始節(jié)位在F2群體中的頻次分布
表2 苦瓜卷須初始節(jié)位遺傳模型的極大似然函數(shù)值和AIC值
表3 苦瓜卷須初始節(jié)位遺傳模型的適合性檢驗
根據(jù)苦瓜卷須初始節(jié)位遺傳模型參數(shù)的極大似然估計值,估計最適遺傳模型的遺傳參數(shù)。結果表明(表4),苦瓜卷須初始節(jié)位遺傳由主基因和多基因共同控制,其中主基因遺傳率為15.81%,多基因遺傳率為7.83%。說明環(huán)境對苦瓜卷須初始節(jié)位的影響較大。2對主基因的加性和顯性效應均相等(h1=h2=d1=d2=-0.21),h1/d1=h2/d2=1,表現(xiàn)為完全顯性;多基因的顯性效應[h]為-0.25,加性效應[d]為-0.01,[h]/[d]>1,表現(xiàn)為正超顯性。說明苦瓜卷須初始節(jié)位低對卷須初始節(jié)位高為顯性,且存在超顯性現(xiàn)象,與F1(表1)和F2(圖1)表型統(tǒng)計結果一致。
表4 苦瓜卷須初始節(jié)位的遺傳參數(shù)估計值
經統(tǒng)計,2018年春種植的母本佛瀝734所有單株主蔓在40節(jié)以內均有卷須分叉,父本AVBG1602均為卷須不分叉單株,F(xiàn)1世代中的所有單株在40節(jié)以內都有卷須分叉(圖2)。在F2分離世代的287個單株中,有208株表現(xiàn)為卷須分叉,79株表現(xiàn)為卷須不分叉。經卡平方檢驗,χ2=0.85(P>0.05),表明在F2分離世代中卷須分叉與卷須不分叉符合3∶1的分離規(guī)律。
對2018年秋種植的佛瀝734與AVBG1602及其F1、F2材料進行統(tǒng)計分析的結果同樣表明,母本佛瀝734與父本AVBG1602及其F1植株的卷須分叉表現(xiàn)與2018年春一致;在F2分離世代的88個單株中,有63株表現(xiàn)為卷須分叉,25株表現(xiàn)為卷須不分叉,經卡平方檢驗,χ2=0.55(P>0.05)。同樣驗證了在F2世代中植株卷須分叉與卷須不分叉的遺傳符合3∶1的分離規(guī)律。因此,認為苦瓜植株卷須的分叉對不分叉受1對顯性基因控制,其中卷須分叉表現(xiàn)為顯性,卷須不分叉表現(xiàn)為隱性。
圖2 苦瓜植株卷須分叉與不分叉
苦瓜屬于無限生長類型的攀援性植物,其植株卷須發(fā)生的時間與抽蔓期的早晚有關,其卷須分叉的有無可能會影響植株的攀援能力。根據(jù)筆者對眾多苦瓜種質資源觀察統(tǒng)計的結果表明,苦瓜植株卷須發(fā)生的早晚存在顯著差異,不同材料之間存在卷須分叉有無的差別。因此,本試驗選擇了4份苦瓜材料為親本構建遺傳分離群體,對苦瓜植株卷須相關的2個性狀進行遺傳分析。結果表明,苦瓜植株的卷須初始節(jié)位符合2對等顯性主基因+加性-顯性多基因混合遺傳模型(E-6模型),F(xiàn)1偏向卷須初始節(jié)位低的親本,存在超親優(yōu)勢。這在苦瓜雜種優(yōu)勢中可以加以利用,即在選配親本時,選擇卷須初始節(jié)位低的親本將有可能配制獲得抽蔓期更早的一代雜種。另一方面,由于多基因效應以顯性效應為主,因此,對于苦瓜植株卷須初始節(jié)位的選擇應在高世代進行。本試驗還對苦瓜植株主蔓40節(jié)以內卷須分叉有無進行了遺傳分析,結果表明,卷須的分叉對不分叉受1對顯性基因控制。本試驗結果為進一步揭示苦瓜植株卷須發(fā)育的遺傳機制奠定了基礎。