曾青華

摘 要：為探討寧鄉(xiāng)豬遺傳多樣性，本研究以外來(lái)豬種大白豬為對(duì)照，研究了寧鄉(xiāng)豬GLP2R基因的多態(tài)性。通過(guò)限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism，PCR-RFLP）分析檢測(cè)了該基因A/G位點(diǎn)。結(jié)果表明，寧鄉(xiāng)豬全部為GG型，大圍子豬和黔邵花豬的優(yōu)勢(shì)等位基因都為G；而外來(lái)品種（大白豬）的優(yōu)勢(shì)等位基因?yàn)锳，其基因頻率為0.6433，中外品種的差異較大。本研究為寧鄉(xiāng)豬的保種和選育提供了有益的資料。

關(guān)鍵詞：豬；GLP2R基因；遺傳多態(tài)性

寧鄉(xiāng)豬是我國(guó)著名的四大地方豬品種之一，原產(chǎn)于湖南省寧鄉(xiāng)縣的流沙河及草沖一帶，其特征是“絲頸葫蘆肚，耳薄嘴筒齊，稀毛現(xiàn)薄皮，魚(yú)尾后腳直，奶子一斬齊，四腳要撒蹄”、“烏云蓋雪銀頸圈”。其體型中等，體質(zhì)疏松細(xì)致，體軀呈圓筒狀，毛色為黑白花，四肢、肋腹及頸下部為白色，頭和臀部呈黑色。GLP2R屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族[1]。GLP2R為GLP2的特異性受體，GLP2與其受體結(jié)合從而發(fā)揮作 用[2-3]。Luo等[4]認(rèn)為GLP2R基因與豬肌內(nèi)脂肪含量有關(guān)。

本研究首次檢測(cè)了寧鄉(xiāng)豬GLP2R基因的多態(tài)性，旨在為揭示豬GLP2R基因的分子遺傳機(jī)制奠定基礎(chǔ)，并為寧鄉(xiāng)豬保種和選育提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

以4個(gè)地方豬種（大圍子豬、寧鄉(xiāng)豬、沙子嶺豬、黔邵花豬）和1個(gè)外來(lái)豬種（大白豬）為試驗(yàn)材料，共計(jì)523頭，分別采取豬耳組織樣品，于-20 ℃保存。

1.2 基因組DNA提取

基因組DNA提取按常規(guī)酚-氯仿法進(jìn)行。

1.3 引物合成及聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增

用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)引物，其中正向引物：5'-ATG AGG CCG GAA CGG AGC CG-3'；反向引物：5'-CTA ATC TCA CTC TCC TCG AG-3'，由華大基因公司合成。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）體系：2×PCR Master·Mix 10 μL，雙蒸水8.0 μL，引物1.0 μL，基因組DNA 1.0 μL。PCR擴(kuò)增程序：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s；55 ℃復(fù)性30 s；72 ℃延伸30 s，共35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸 5 min；4℃保存。

2 結(jié)果與分析

2.1 基因型分型

在擴(kuò)增的746 bp的片段中，709 bp處A/G突變位點(diǎn)導(dǎo)致了限制性內(nèi)切酶BstE Ⅱ的變化。GLP2R基因的A/G位點(diǎn)存在3種基因型，分別為GG基因型（506 bp、240 bp）、AG基因型（746 bp、506 bp、240 bp）和AA基因型 （746 bp）（圖1）。

2.2 豬GLP2R基因的多態(tài)性分析

GLP2R基因A/G突變位點(diǎn)PCR-RFLP-BstEⅡ的基因和基因型頻率見(jiàn)表1。大圍子豬和黔邵花豬這兩個(gè)地方品種的優(yōu)勢(shì)等位基因都為G；而外來(lái)品種（大白豬）的優(yōu)勢(shì)等位基因?yàn)锳，基因頻率為0.6433。從基因型分布頻率看，GG型占優(yōu)勢(shì)，AA型個(gè)體較少，只在沙子嶺豬中發(fā)現(xiàn)1個(gè)，在黔邵花豬中發(fā)現(xiàn)4個(gè)，在桃源黑豬中檢出15個(gè)；但大白豬中GG型較少（41個(gè)），而AA型和AG型分別有125個(gè)和127個(gè)。

3 討論與結(jié)論

寧鄉(xiāng)豬GLP2R基因A/G位點(diǎn)基因型全部為GG型，可能的原因是該品種經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期高度近交的人工選育，此位點(diǎn)已全部純合，這也反映了該品種比較純。大圍子豬在該位點(diǎn)也是全部為GG型。沙子嶺豬和黔邵花豬G等位基因?yàn)閮?yōu)勢(shì)等位基因，而在外來(lái)品種（大白豬）中A等位基因?yàn)閮?yōu)勢(shì)等位基因，這也反映了中外品種的遺傳背景差異大。在該位點(diǎn)上的差異有望作為品種標(biāo)記的一種手段，應(yīng)用于標(biāo)記輔助選擇。□□

參考文獻(xiàn)：（4篇，略）