賈良梁

摘 要：本文是《非洲豬瘟——威脅全球豬業(yè)的重要疾病重現(xiàn)江湖》的第二部分，主要介紹非洲豬瘟病毒東歐分離株的試驗(yàn)性發(fā)病機(jī)制和疫苗研發(fā)情況。

關(guān)鍵詞：非洲豬瘟；流行病學(xué)；免疫應(yīng)答；免疫接種

在非洲豬瘟已經(jīng)呈地方流行的地區(qū)，持續(xù)感染的帶毒豬在維持非洲豬瘟病毒在該地區(qū)的長期感染上起著一定的作用。業(yè)已證明，豬在感染I型非洲豬瘟病毒減毒株后會(huì)長期維持感染狀態(tài)。試驗(yàn)性感染已經(jīng)證明，感染會(huì)從持續(xù)感染低毒力I型NH/P68毒株的豬傳染給接觸該豬的豬。

1 Ⅱ型非洲豬瘟病毒東歐分離株的試驗(yàn)性發(fā)病機(jī)制

一些研究已經(jīng)探討了目前在歐洲流行的Ⅱ型非洲豬瘟病毒毒株的毒力。雖然，自非洲豬瘟首次在伊比利亞半島出現(xiàn)后，由高毒力和中等毒力的非洲豬瘟病毒毒株造成的疾病已得到了廣泛的研究，但是人們對非洲豬瘟在野豬中的流行情況知之甚少，目前只知道野豬在疾病傳播上有重要意義，它們對疾病高度易感以及可能作為病毒攜帶者在歐洲的病情蔓延中起一定的作用。仔豬、青年豬和成年野豬經(jīng)口和肌肉試驗(yàn)性感染中等劑量和高劑量的來自高加索地區(qū)的Ⅱ型非洲豬瘟病毒毒株后會(huì)造成野豬暴發(fā)急性型非洲豬瘟，并且12 d以內(nèi)的死亡率達(dá)100%。另外，研究人員并未在血清樣本中檢測到抗體。雖然非洲豬瘟病毒通過發(fā)病豬的鼻涕或糞便排出的數(shù)量似乎有限，但是病毒能夠有效傳播給作為接觸對照組的家豬和野豬，并且還能導(dǎo)致這些接觸者暴發(fā)急性型非洲豬瘟。血液被證明具有高度感染性，其可能是接觸豬受到感染的主要來源。

在另一項(xiàng)使用相似非洲豬瘟病毒毒株的研究中，家豬肌肉注射102的50%血紅素吸附量（50% Haemadsorbing Doses，HAD50），接觸傳播造成所有豬都暴發(fā)急性型非洲豬瘟。一頭攻毒豬存活到攻毒后第12天，其他豬均在第9天安樂死，所有接觸豬均在接觸后第14～18天安樂死。僅活到攻毒后第12天的攻毒豬出現(xiàn)可檢測的非洲豬瘟病毒特異性抗體。攻毒豬通過鼻腔和直腸低水平地排出非洲豬瘟病毒。該研究表明，流行早期（2007—2009年）的Ⅱ型非洲豬瘟病毒毒株造成豬群持續(xù)感染的潛力有限。

在感染非洲豬瘟病毒期間，潛伏期、間歇期和傳染期與感染動(dòng)物的排毒量和排毒途徑有關(guān)系，這反過來可能與感染的劑量和毒株有關(guān)。Pietschmann等研究了感染低劑量的Ⅱ型非洲豬瘟病毒延長疾病的潛伏期和引發(fā)慢性疾病或者造成帶毒狀態(tài)的可能性。研究人員用美國非洲豬瘟病毒的08毒株低劑量經(jīng)口鼻感染家豬和歐洲野豬。這種分離毒株在極低劑量（3或25凝血單位，Haemagglutinating Units，HAU）下就足以通過口鼻感染動(dòng)物，尤其在動(dòng)物體質(zhì)虛弱無力時(shí)。在這些低劑量感染病例中，臨床癥狀出現(xiàn)的時(shí)間推遲，但是感染的病程和后果沒有改變，受到感染的豬經(jīng)過11天到4周的潛伏期后會(huì)出現(xiàn)急性型和亞急性型非洲豬瘟，并會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的血管病變。

從2014年起，家豬肌肉注射低劑量（10 HAD50）的非洲豬瘟病毒立陶宛毒株（LT14/1490）會(huì)暴發(fā)急性致死型非洲豬瘟，要求在7 DPI～9 DPI安樂死7（或8）頭豬。與接觸豬相似，一頭攻毒豬開始出現(xiàn)臨床癥狀的時(shí)間推遲，該豬可能通過與其他受感染豬接觸已經(jīng)事先感染了非洲豬瘟病毒。除了一頭豬外，其他所有接觸豬都出現(xiàn)急性非洲豬瘟典型癥狀，并在14 DPI～ 22 DPI進(jìn)行了安樂死。一頭接觸豬保持不感染，直到試驗(yàn)進(jìn)行到61 DPI，研究人員間歇性地檢測到極低水平的病毒序列，檢測不到抗體應(yīng)答，在組織樣本中檢測到低水平的病毒序列。

家豬試驗(yàn)性經(jīng)鼻或肌肉注射低劑量 （50 HAD50）和高劑量（5 000 HAD50）2013年的非洲豬瘟病毒俄羅斯毒株從家豬和野豬上分離到，結(jié)果造成接種和接觸的家豬出現(xiàn)急性型非洲豬瘟。高劑量肌肉注射的家豬潛伏期和感染期最短，低劑量經(jīng)鼻感染的家豬則最長。在該試驗(yàn)中，Mur等在3.7%的血清樣本中檢測到非洲豬瘟病毒抗體。

Nurmoja等利用動(dòng)物傳代方法從PCR陽性組織樣本中分離到了非洲豬瘟病毒毒株，該組織樣本來自2015年發(fā)生在愛沙尼亞東北部、死亡率明顯低的野豬非洲豬瘟病例。在歐洲，研究人員經(jīng)口鼻途徑讓野豬感染非洲豬瘟病毒104.5 HAU，結(jié)果除了一頭野豬外，其他所有野豬均在 7 DPI～13 DPI發(fā)生嚴(yán)重的急性型非洲豬瘟，幸存野豬具有高水平的非洲豬瘟病毒抗體，這表明病毒已經(jīng)復(fù)制。然而，當(dāng)幸存豬與其他豬在50 DPI～90 DPI混群飼養(yǎng)時(shí)，研究人員未發(fā)現(xiàn)從幸存豬到接觸豬之間的傳播。這些結(jié)果表明，并不是所有幸存豬均能成為非洲豬瘟病毒的攜帶者。

盡管一些現(xiàn)場觀察表明非洲豬瘟病毒的某些毒株只能導(dǎo)致受感染豬出現(xiàn)低死亡率（如非洲豬瘟病毒愛沙尼亞毒株），并且存在非洲豬瘟病毒的遺傳變異型毒株，但是到目前為止研究人員尚未在東歐和歐盟不同地區(qū)的Ⅱ型非洲豬瘟病毒毒株的試驗(yàn)研究中從野豬或家豬上找到非洲豬瘟病毒毒力減弱的明確證據(jù)。在大多數(shù)病例中，由于急性型非洲豬瘟發(fā)病快，研究人員并未觀察到可檢測的抗體反應(yīng)。盡管Gallardo等和Nurmoja等觀察到了受感染豬偶有存活的情況，但大多數(shù)試驗(yàn)已經(jīng)表明Ⅱ型非洲豬瘟病毒毒株造成豬群持續(xù)感染以及進(jìn)一步產(chǎn)生非洲豬瘟病毒攜毒者的潛力有限。然而，我們?nèi)杂斜匾掷m(xù)監(jiān)測流行毒株的毒力，并且需要對非洲豬瘟病毒在野豬群中維持存在的機(jī)理進(jìn)行評估。在一項(xiàng)研究中，研究人員監(jiān)測了散養(yǎng)野豬對同類尸體的行為，沒有證據(jù)表明野豬自食。然而，該研究還表明，非洲豬瘟病毒能在尸體中存活相當(dāng)長的時(shí)間。

2 非洲豬瘟病毒疫苗的研發(fā)

免疫接種是控制傳染病最有效的方法之一，然而，由于人們對非洲豬瘟病毒感染和免疫的認(rèn)識存在著巨大的缺失，因此非洲豬瘟病毒疫苗的研發(fā)已經(jīng)受到了挑戰(zhàn)。目前，我們尚不明確動(dòng)物對非洲豬瘟病毒產(chǎn)生保護(hù)性應(yīng)答的精確機(jī)理，同時(shí)還沒有鑒定出保護(hù)性抗原，這影響了研究人員研發(fā)非洲豬瘟病毒疫苗的思路。此外，人們對非洲豬瘟病毒如何調(diào)節(jié)宿主的感染應(yīng)答也知之甚少。一旦鑒定出保護(hù)性抗原，研究人員就可以研發(fā)出針對相關(guān)非洲豬瘟病毒毒株的廣泛有效且具有交叉保護(hù)的合理疫苗（表1）。

總的來說，人們已經(jīng)能夠用失活病毒和弱化病毒生產(chǎn)出抗病毒感染的疫苗，或通過生產(chǎn)亞單位疫苗來研發(fā)疫苗。但是，Stone和Hess在40多年中并沒有成功開發(fā)出非洲豬瘟病毒的傳統(tǒng)滅活苗。與之類似，Blome等最近在給滅活非洲豬瘟病毒疫苗配制新的佐劑后進(jìn)行了重新評估，結(jié)果證實(shí)非洲豬瘟病毒的雙乙烯亞胺（Binary Ethyleneimine，BEI）滅活疫苗在用非洲豬瘟病毒攻毒的動(dòng)物上并不能產(chǎn)生免疫保護(hù)作用。因此，滅活病毒似乎不是研發(fā)非洲豬瘟病毒疫苗的一個(gè)有效方法。

弱毒疫苗可以誘導(dǎo)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈且持久的免疫反應(yīng)。非洲豬瘟病毒毒力的弱化最初是在細(xì)胞培養(yǎng)中經(jīng)連續(xù)傳代后完成的，用這些毒力弱化的病毒能夠在用同源的強(qiáng)毒力的親代毒株攻毒的動(dòng)物上誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫保護(hù)作用。用另一種無毒力自然弱毒的I型非洲豬瘟病毒OUR T88/3分離株免疫豬，結(jié)果該動(dòng)物能夠?qū)υ摶蛐拖虏煌局甑墓ザ井a(chǎn)生免疫作用，并且對非洲豬瘟病毒其他基因型的毒株感染產(chǎn)生交叉免疫作用。

研究人員已經(jīng)成功研制出非洲豬瘟病毒新一代基因缺失型突變株，該毒株能在豬體內(nèi)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)反應(yīng)。非洲豬瘟病毒的I型弱毒型毒株可以誘導(dǎo)接種豬對Ⅱ型毒株的感染產(chǎn)生交叉免疫作用，這表明生產(chǎn)交叉保護(hù)弱毒疫苗可能是可行的。非洲豬瘟病毒的SP148R基因缺失型突變株對豬的毒力下降，并在攻毒后能夠誘導(dǎo)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生高水平的保護(hù)力，即使病毒在培養(yǎng)復(fù)制時(shí)也未返強(qiáng)。然而，我們需要進(jìn)一步研究，以找出不同非洲豬瘟病毒毒株中強(qiáng)毒基因的組合，從而獲得令人滿意的安全性及效力水平。

當(dāng)找到某種能夠向動(dòng)物提供完全保護(hù)作用的病毒蛋白并找到最合適的遞送載體/條件時(shí)，我們就有可能會(huì)開發(fā)出亞單位疫苗。對于非洲豬瘟病毒，這兩個(gè)方面都遠(yuǎn)未實(shí)現(xiàn)。Gomez-Puertas等、Barderas等和Argilaguet等在利用B細(xì)胞免疫顯性的非洲豬瘟病毒亞單位重組蛋白（p30蛋白、p54蛋白和p72蛋白）進(jìn)行的早期免疫研究中獲得了時(shí)好時(shí)壞的結(jié)果。一個(gè)包含約 4 000個(gè)單個(gè)質(zhì)粒克?。ò琾30蛋白、p54蛋白和CD2v）的非洲豬瘟病毒表達(dá)文庫顯示保護(hù)力和CD8+ T細(xì)胞反應(yīng)之間有一定的關(guān)聯(lián)性。

研究人員用一個(gè)由腺病毒載體型非洲豬瘟病毒和精選抗原組成的混合物免疫豬，或利用疫苗靶標(biāo)預(yù)測的生物信息學(xué)方法，已經(jīng)獲得了強(qiáng)烈的細(xì)胞反應(yīng)和體液應(yīng)答。這些誘導(dǎo)產(chǎn)生的免疫應(yīng)答與對非洲豬瘟病毒的免疫力之間的關(guān)系有待在攻毒研究中進(jìn)一步評估?！酢?/p>

原題名：African swine fever： A re-emerging viral disease threatening the global pig industry（英文）

原作者：P. J. Sánchez-Cordón、M. Montoya、A. L. Reis和L. K. Dixon