彭亞君 劉倩 羅絨

【摘 要】 目的：建立黑冰片、黑冰片-10味散、十味黑冰片丸中重金屬鉛、鎘、銅、汞及砷的含量測定方法。方法：樣品經(jīng)微波消解處理后，以電感耦合等離子體質(zhì)譜儀測定砷、鉛、鎘、銅元素的含量，原子熒光光度計(jì)測定汞元素含量。結(jié)果：該檢測方法的回收率在84.87%～98.86%之間，RSD<5 %，測得黑冰片和兩種成藥中重金屬及有害元素總含量在17.65～77.82mg/kg之間。結(jié)論：參考《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，黑冰片及其成藥中四種重金屬及砷均存在超標(biāo)現(xiàn)象。該檢測方法具有較好精密度、重復(fù)性，可為黑冰片及其成藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究和臨床用藥安全提供科學(xué)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 黑冰片;黑冰片-10味散;十味黑冰片丸;微波消解;含量測定

【中圖分類號】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2019）3-0017-04

Abstract：Objective To establishthe determination method of the contents of heavy metal （Pb， Cd， Cu， Hg） and harmful element （As） in Heibingpian， heibingpian-10 wei pulvis， shiwei heibingpian pills. Method The samples were treated by microwave digestion， then the contents of Pb， Cd， Cu， As were determined by inductively coupled plasma mass spectrometry， the content of Hg was determined by atomic fluorescence spectrophotometer. Result The recovery rate of the methods were between 84.87%～98.86%， RSD<5%， The heavy metal andarsenic of contents of heibingpian and its preparations ranged from 17.648 to 77.820mg/kg. Conclusion Based to 《The Professional Import and Export Stands for Medicinal Herbs and Preparations》， the contents of Pb， Cd， Cu， Hg， As in Heibingpian and its preparations are overweighted. Totally， the methods are precise， repeatable， and suitable for the quality control of heibingpian and its preparation.

Keywords：Heibingpian; Heibingpian-10 wei pulvis; Shiwei Heibingpian Pills; Microwave Digestion; Content Determination

黑冰片為豬科動物野豬Sus Scrofa Linnaeus 的干燥糞便，顏色烏黑發(fā)亮，質(zhì)地松脆，氣微，味辛澀苦，有健胃、消食、平息“希日”的功效，用于治療消化不良，寒性膽病及其引起的胃脘腫痛、黃疸、瘟疫等病癥，最早載于《四部醫(yī)典》[1]，現(xiàn)被《中國民族藥辭典》[2]收錄。黑冰片在中醫(yī)、蒙醫(yī)和藏醫(yī)中廣泛使用，蒙醫(yī)代表方黑冰片-10味散（含黑冰片22.8%），蒙名哈日—嘎布日-10，由黑冰片、木鱉子、金訶子、止瀉子等配方而成，具有抑赫依、希拉、助消化的功效，主治消化不良、口苦、噯氣、胃脹痛等病癥[3];藏醫(yī)代表方有十味黑冰片丸（含黑冰片27.45%），藏藥名為卡那久巴日布，由黑冰片、蓽茇、波棱瓜子、熊膽等十味藥組成，具有溫胃消食、破積利膽的功效，用于龍病、食積不化、惡心、培根痞瘤、膽囊炎、膽結(jié)石、寒性膽病及黃疸等的治療[4]。

目前黑冰片及其成藥的各項(xiàng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)正在探索之中，并建立了一些質(zhì)量控制方法，如利用分光光度計(jì)測定黑冰片吸附檸檬黃的吸收度以評價(jià)其吸附性能[5]，并對黑冰片中鐵、鉛等無機(jī)元素進(jìn)行測定[6-7]，采用高效液相色譜法測定十味黑冰片丸中重要活性成分沒食子酸[8]、桂皮醛[9]等以控制其質(zhì)量。但尚無對黑冰片及其成藥中各種重金屬和有害元素砷的含量進(jìn)行研究。現(xiàn)代研究證明，鉛、鎘、銅、汞、砷五種元素的積蓄性中毒會引起人體內(nèi)各系統(tǒng)功能失調(diào)[10]。作為臨床常用藥，黑冰片及其成藥的重金屬及有害元素含量測定的研究迫在眉睫。本試驗(yàn)采用微波消解法對采集到的黑冰片及其自制成藥樣品進(jìn)行前處理，以電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）法測定鉛、鎘、銅、砷元素的含量，原子熒光光度法測定汞元素含量。為相關(guān)藥材飲片及其成藥的制備工藝和安全性評價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 材料 超純水（電導(dǎo)率為18.25MΩ.cm）、過氧化氫溶液（成都金山化學(xué)試劑有限公司，分析純級）、硝酸溶液（成都金山化學(xué)試劑有限公司，優(yōu)級純）。鎘、銅、鉛、汞、砷、鉍、鍺、銦標(biāo)準(zhǔn)溶液均購自山東省冶金科學(xué)研究院標(biāo)準(zhǔn)樣品研究院。試驗(yàn)所用黑冰片飲片樣品來源于西藏拉薩，成藥則是按照文獻(xiàn)處方制劑而成，處方中其它飲片均購于九洲大藥房。

1.2 儀器 AL104電子天平（Mettler-Toledo），DHG-9240A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），WP-UPT-10超純水機(jī)（四川沃特爾水處理設(shè)備有限公司），PF6-2非色散原子熒光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司），MD6M微波消解儀（APL），ICP-Qc型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（美國賽默飛世爾科技有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品的制備 將供試品置于恒溫60 ℃的烘箱，烘2h[11]，精密稱取供試品約0.5g，置于微波消解罐中，加硝酸-30% 過氧化氫（V/V 7∶3）的混酸溶液共10mL，密閉，置于微波消解儀中按表1消解程序進(jìn)行消解。微波消解結(jié)束后，冷卻取出，揮去濃煙，用超純水將消解液轉(zhuǎn)入50mL量瓶中，用超純水洗滌消解罐3次，洗液并入量瓶中，用超純水定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。同法制備空白溶液。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢出限 以1 %硝酸溶液稀釋配制含Pb、As、Cd為 0.2、1、5、10、20、50ng/mL，含Cu為1、5、10、20、50、100ng/mL的系列濃度混合溶液[13]，以超純水稀釋配制Bi、In、Ge 濃度均為1μg/mL的混合內(nèi)標(biāo)液[14]，并使用ICP-MS測定標(biāo)準(zhǔn)曲線;以1 %硝酸溶液稀釋配制含Hg為0.05、0.1、0.5、1、2、5ng/mL的系列濃度溶液，使用非色散原子熒光光度計(jì)測定。對試劑空白進(jìn)行11次測定[15]，以待測元素響應(yīng)值的3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差除以標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率，即可得該元素的方法檢出限，結(jié)果詳見表2。

2.3 精密度試驗(yàn) 取編號為“S1”的黑冰片樣品微波消解后，分別連續(xù)測定6次，測定各元素RSD范圍均在1.42 %～2.66 %之間。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取編號為“S1”的黑冰片樣品微波消解后，平行6份，按“2.1”項(xiàng)下前處理方法進(jìn)行消解，得到6份供試液，測定各元素RSD范圍均在1.27 %～ 4.11 %之間。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取編號為“S1”的黑冰片樣品微波消解后，每隔4h測定一次共測6次。供試品溶液中各元素RSD范圍均在0.96%～ 4.91%之間，表明消解方法所得的供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 加樣回收試驗(yàn) 對已知含量的編號為“S1”的黑冰片樣品作加樣回收試驗(yàn)。按“2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行前處理，得到6份供試液作回收率試驗(yàn)。由表3微波消解測定5種元素的回收率在84.87%～98.86%之間，RSD≤5 %， 表明方法準(zhǔn)確可靠。

2.7 ICP-MS法含量測定 精密稱取各個批次的黑冰片、黑冰片-10味散、十味黑冰片丸樣品，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按表4工作參數(shù)，平行測定3次。測得As、Pb、Cd、Cu元素的含量，測定結(jié)果見表5～7。

2.8 Hg含量測定 精密稱取各個批次的黑冰片、黑冰片-10味散、十味黑冰片丸樣品，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，用非色散原子熒光光度計(jì)平行測3次，測得Hg元素含量，測定結(jié)果見表5～7。

3 分析與討論

根據(jù)《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》[16]（WM/T22004）中規(guī)定砷（As）≤2.0mg/kg，鉛（Pb）≤5.0mg/kg，鎘（Cd）≤0.3mg/kg，汞（Hg）≤0.2mg/kg，銅（Cu）≤20.0mg/kg。對比黑冰片、黑冰片-10味散、十味黑冰片丸中重金屬及有害元素砷的含量，黑冰片中砷、鉛、汞、鎘、銅均大幅超標(biāo)，而成藥則超標(biāo)較少。藥材黑冰片在經(jīng)過正確的配伍、制劑后出現(xiàn)了重金屬及有害元素含量降低的情況，且黑冰片中重金屬及有害元素的總含量約為黑冰片-10味散總含量的四倍，這與黑冰片在該制劑中稀釋倍數(shù)基本相符。由此判斷黑冰片是制劑中引入重金屬及有害元素砷的主要因素。有研究證明，黑冰片對大鼠長期使用并無毒性作用[17]，但作為野豬糞便經(jīng)過高溫碳化所得藥材飲片，黑冰片不易采集，患者順應(yīng)性差，且具體藥理作用尚未完全確定，所以使用其它藥材替代黑冰片的必要性值得進(jìn)一步研究。

本試驗(yàn)建立了黑冰片重金屬及有害元素砷的含量測定方法，具有較好的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性，且回收率試驗(yàn)結(jié)果中RSD均小于5 %，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，滿足檢測要求，可作為黑冰片中重金屬及有害元素測定的方法。同時對黑冰片-10味散、十味黑冰片丸中重金屬的來源作了討論，基于其中重金屬和砷的含量過高，而且黑冰片資源相對匱乏、采集不便且難以控制內(nèi)在質(zhì)量，有必要對相關(guān)制劑中黑冰片替代必要性進(jìn)行研究。

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（收稿日期：2018-11-27 編輯：程鵬飛）