葉 寧，程朝平，楊德衛(wèi)，葉新福，鄭向華

（福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水稻研究所，福建福州350018）

中國幅員遼闊，水稻種植歷史悠久，習(xí)慣食用稻米。近年來，隨著中國人民生活水平的提高，越來越注重稻米中的營養(yǎng)品質(zhì)。研究分析有色稻米的營養(yǎng)成分也成為育種工作者工作的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。黃酮是廣泛存在于植物界的一大類物質(zhì)，它們是色原烷或色原酮的衍生物。在稻谷中也含有黃酮類物質(zhì)，尤其是有色稻（黑米和紅米）中含量更高。黃酮具有廣泛的藥理活性，具有抗菌、抗肝炎、抗氧化、抗腫瘤以及治療心腦血管疾病的作用。稻米黃酮具有清除自由基、延緩衰老、增強(qiáng)抗應(yīng)激反應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)機(jī)能等生理功能［1-3］。黃酮類可溶于極性強(qiáng)的甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑中，這些有機(jī)溶劑可以回收再利用，因?yàn)橐掖级拘暂^小本試驗(yàn)以乙醇作為浸提劑［4，5］，以紫糯1號(hào)為試驗(yàn)材料，對浸提溫度、浸提時(shí)間、料液比和恒溫?fù)u床震蕩頻率進(jìn)行研究，確定紫糯1號(hào)米黃酮提取的最佳工藝，以期為測定有色稻米的黃酮含量和篩選鑒定稻米富含黃酮的種質(zhì)資源提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原料稻谷 以福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水稻研究所選育的，當(dāng)季種植的黑米品種“紫糯1號(hào)”為原料（曬干放置3個(gè)月后→礱成糙米→粉碎→40目過篩→備用）。

1.1.2 試劑 三氯化鋁、乙醇、 乙酸鉀（以上試劑均為分析純）、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品等。

1.1.3 主要儀器及設(shè)備 T6新世紀(jì)（紫外-可見光分光光度計(jì)）、恒溫?fù)u床、離心機(jī)、FA2004電子分析天平（上海恒平科學(xué)儀器有限公司）、粉碎機(jī)、礱谷機(jī)、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、循環(huán)水多用真空泵等。

1.2 方法

1.2.1 測定方法 參照蕎麥及其制品中總黃酮含量的測定（中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) NY/1295-2007）方法測定［6］。

在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，選擇乙醇濃度、提取溫度、提取時(shí)間、液固比、搖床頻率進(jìn)行正交試驗(yàn)，每個(gè)因素選取4個(gè)水平（表1）。取樣品溶液1.0 mL于10 mL容量瓶中，以空白試劑為參比，在波長420 nm處測定吸光度值。將其代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算出總黃酮的濃度。

表1 正交實(shí)驗(yàn)因素設(shè)計(jì)

1.2.2 總黃酮提取的工藝流程

糙米粉→乙醇浸提→過濾→合并濾液→減壓濃縮→真空干燥→總黃酮粗品。

1.2.3 計(jì)算公式 總黃酮提取得率的計(jì)算公式為：總黃酮提取得率（%）=（C×V×100）/（1000×v×m ）。式中C為黃酮濃度（mg/mL），V為提取液定容體積（mL），v為測定液體積（mL），m為糙米粉質(zhì)量（g）。

2 結(jié)果與分析

2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

用移液管分別吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1、0.5、1、2、3、4 mL置于10 mL容量瓶中，加入三氯化鋁溶液2 mL，乙酸鉀溶液3 mL，用乙醇溶液定容至刻度線，搖勻，室溫下放置30 min。標(biāo)準(zhǔn)曲線中蘆丁含量分別 為 0.002、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08 mg/mL。于420 nm處測定吸光度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析

從正交試驗(yàn)結(jié)果可以看出（表2），乙醇濃度70%，提取時(shí)間60 min，提取溫度50℃，料液比1∶25，搖床頻率100 r/min時(shí)總黃酮提取率最高，為4.25%。還可看出該試驗(yàn)方法各因素的影響順序是：料液比＞提取時(shí)間＞乙醇濃度＞提取溫度＞搖床頻率。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

試驗(yàn)以乙醇溶液為溶劑，對影響有色稻中總黃酮提取的5個(gè)因素進(jìn)行了研究，確定了較優(yōu)的提取工藝條件是乙醇濃度70%，提取時(shí)間60 min，提取溫度50℃，料液比1∶25，搖床頻率100 r/min，此時(shí)總黃酮提取率最高為4.25%。還可看出該試驗(yàn)方法各因素的影響順序是：料液比＞提取時(shí)間＞乙醇濃度＞提取溫度＞搖床頻率。此試驗(yàn)確定了有色稻米總黃酮提取的最佳工藝，可用于測定不同品種有色稻的總黃酮含量，為篩選鑒定稻米富含黃酮的種質(zhì)資源提供有效手段。