吳暢　劉海玲　劉薇薇　王俊普　文繼舫

【摘要】 目的：探討HepPar-1、GPC3、AFP及Ki-67蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系。方法：應(yīng)用免疫組化Envision法檢測(cè)，79例HCC組織分別進(jìn)行HepPar-1、GPC3、AFP及Ki-67的表達(dá);進(jìn)一步分析其表達(dá)特點(diǎn)及與臨床病理特征的相關(guān)性。結(jié)果：患者HepPar-1、GPC3、AFP表達(dá)陽(yáng)性率分別為68.3%（54/79）、86.0%（68/79）、31.6%（25/79）;Ki-67增殖指數(shù)為（33±25）%。HepPar-1陽(yáng)性率在低分化腫瘤中最低，GPC3、AFP和Ki-67陽(yáng)性率在低分化腫瘤中最高。HepPar1的表達(dá)在分化程度、是否合并肝硬化等臨床病理特征方面存在差異（P<0.05）。AFP的表達(dá)在組織分化程度、微血管侵犯（MVI）、衛(wèi)星結(jié)節(jié)等臨床病理特征方面存在差異（P<0.05）。Ki-67的表達(dá)在組織分化程度、微血管侵犯（MVI）、肝被膜侵犯、衛(wèi)星結(jié)節(jié)、腫瘤性壞死和性別等臨床病理特征方面存在差異（P<0.05）。結(jié)論：HepPar-1、GPC3、AFP及Ki-67在肝細(xì)胞肝癌的臨床病理診斷中有重要參考價(jià)值。GPC3、AFP及Ki-67與肝細(xì)胞肝癌的臨床病理特征關(guān)系密切，對(duì)該疾病的預(yù)測(cè)及惡性程度的評(píng)估具有重要的參考價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 肝細(xì)胞肝癌; HepPar-1; GPC3; AFP; Ki-67; 免疫組織化學(xué)

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.09.002 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1674-6805（2019）09-000-05

Cliniccopathological Significance and Correlation of HepPar-1，GPC3，AFP and Ki-67 Levels in Human Hepatocellular Carcinoma/WU Chang，LIU Hailing，LIU Weiwei，et al.//Chinese and Foreign Medical Research，2019，17（9）：-7

【Abstract】 Objective：To analyze the expression of HepPar-1，GPC3，AFP and Ki-67 proteins in primary hepatocellular carcinoma and the clinicopathological characteristics.Method：Immunohistochemical study（Envision method） for HepPar-1，GPC3，AFP and Ki-67 was carried out in 79 cases of HCC tissues.The relationship between expression of HepPar-1，GPC3，AFP and Ki-67 and clinicopathologic features in HCC were also analyzed.Result：The positive expression rates of HepPar-1，GPC3 and AFP were 68.3%（54/79），86.0%（68/79） and 31.6%（25/79），respectively，and the proliferation index of Ki-67 was （33±25）%.The positive rate of HepPar-1 was the lowest in poorly differentiated tumors，and the positive rates of GPC3，AFP and Ki-67 were the highest in poorly differentiated tumors.There were differences in the expression of HepPar1 in the degree of differentiation，whether HepPar1 was associated with liver cirrhosis（P<0.05）.There were differences in the expression of AFP in tissue differentiation，microvascular invasion（MVI），satellite nodules（P<0.05）.The expression of Ki-67 showed differences in the degree of tissue differentiation，microvascular invasion（MVI），hepatic capsule invasion，satellite nodules，tumor necrosis，gender（P<0.05）.Conclusion：HepPar-1，GPC3，AFP and Ki-67 have important reference value in the clinicopathological diagnosis of hepatocellular carcinoma.GPC3，AFP and Ki-67 are closely related to the clinicopathological characteristics of hepatocellular carcinoma，which has important reference value for the prediction of this disease and the evaluation of the degree of malignancy.

【Key words】 Hepatocellular carcinoma; HepPar-1; GPC3; AFP; Ki-67; Immunohistochemistry

First-authors address：Shenzhen Sixth Peoples Hospital，Shenzhen 518052，China

肝細(xì)胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是全球第六大常見(jiàn)的癌癥，也是高居癌癥相關(guān)死亡率的第三大原因，據(jù)統(tǒng)計(jì)全球每年新發(fā)肝癌病例超過(guò)50萬(wàn)例[1]。HCC的發(fā)病率和死亡率最高的是中國(guó)，全球50%以上的肝癌發(fā)生在中國(guó)[2-3]。隨著HCC患病率的逐年增加，為全社會(huì)帶來(lái)重大經(jīng)濟(jì)和醫(yī)療保健負(fù)擔(dān)。HCC的主要治療方法是手術(shù)切除、移植、放療、化療和射頻。但早期肝癌的癥狀不明顯，診斷率較低，且肝癌病情進(jìn)展較快，確診時(shí)多數(shù)進(jìn)展至中晚期，已經(jīng)發(fā)生遠(yuǎn)處的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。近幾十年來(lái)，全球?qū)Ω伟┑呐R床和基礎(chǔ)研究都取得了不小的進(jìn)步。但其診療效果仍有待于進(jìn)一步提高。本研究采用免疫組化Envision法檢測(cè)HepPar-1、GPC3、AFP及Ki-67蛋白表達(dá)情況，探討其與肝細(xì)胞肝癌的臨床病理特征的關(guān)系，為肝細(xì)胞肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后判斷提供客觀指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究中的所有標(biāo)本取自2017年1月-2018年12月在中南大學(xué)附屬湘雅醫(yī)院確診并進(jìn)行手術(shù)治療的肝細(xì)胞肝癌患者，總例數(shù)79例。納入標(biāo)準(zhǔn)：按照2010版WHO標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)病理檢查確診為原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌，均經(jīng)病理檢查確診;術(shù)前未進(jìn)行放化療。排除標(biāo)準(zhǔn)：活檢標(biāo)本;免疫組化的資料不完整者。其中男58例，女21例;年齡26～74歲，平均50歲;≥45歲58例，<45歲21例;肝癌直徑<5 cm 36例;≥5 cm 43例;組織學(xué)分化程度：高分化13例，中分化36例，低分化30例;微血管侵犯（MVI）的分組：M0：未發(fā)現(xiàn)MVI;M1（低危組）：≤5個(gè)MVI，且發(fā)生于近癌旁肝組織區(qū)域（≤1 cm）;M2（高危組）：>5個(gè)MVI，或MVI發(fā)生于遠(yuǎn)癌旁肝組織區(qū)域（>1 cm）。M0組33例，M1組42例，M2組4例。合并肝硬化70例，無(wú)肝硬化9例。有肝被膜侵犯36例，無(wú)肝被膜侵犯43例。有衛(wèi)星結(jié)節(jié)23例，無(wú)衛(wèi)星結(jié)節(jié)56例。有腫瘤性壞死31例，無(wú)腫瘤性壞死48例。該研究已經(jīng)倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，患者知情同意。

1.2 方法

送檢組織經(jīng)4%中性甲醛液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，

3 μm厚度切片，HE染色，光鏡觀察。選取腫瘤與正常組織同時(shí)存在的蠟塊，4 μm厚度切片行免疫組化，采用Envision法，一抗為HepPar-1、GPC3、AFP及Ki67，抗體及所用免疫組化試劑均購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，操作步驟按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。以上操作均用已知陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗作陰性對(duì)照，每例都有HE切片作對(duì)照觀察。

1.3 結(jié)果判定

陽(yáng)性結(jié)果明確，陽(yáng)性信號(hào)的位置正確且染色特征正確。HepPar1（Hep）、glypican-3（GPC3）和AFP均明確定位于細(xì)胞質(zhì)，陽(yáng)性為出現(xiàn)均勻棕黃色顆粒。Ki67定位于細(xì)胞核。HepPar1（Hep）、glypican-3（GPC3）和AFP先根據(jù)染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分：無(wú)染色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分，棕褐色為4分;然后根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行判斷，當(dāng)陽(yáng)性細(xì)胞<10%為局灶（+），≥10%為彌漫（+）。只有當(dāng)染色強(qiáng)度≥2分且為彌漫陽(yáng)性時(shí)才判斷為陽(yáng)性。計(jì)算腫瘤細(xì)胞中Ki-67增殖指數(shù)，即Ki-67陽(yáng)性的百分比，<10%為陰性（-），10%～50%為低表達(dá)（+）;>50%為高表達(dá)（++）[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)SPSS 24.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HepPar1表達(dá)與肝細(xì)胞肝癌臨床病理特征的關(guān)系

（1）HepPar1在HCC中的陽(yáng)性率68.3%。（2）HepPar1陽(yáng)性率在低分化腫瘤中最低。（3）HepPar1的表達(dá)在分化程度、是否合并肝硬化等臨床病理特征方面存在差異（P<0.05），而在性別、年齡、腫瘤直徑、微血管侵犯（MVI）、肝被膜侵犯、衛(wèi)星結(jié)節(jié)和腫瘤性壞死等方面均無(wú)明顯差異（P>0.05），見(jiàn)表1。

2.2 GPC3表達(dá)與肝細(xì)胞肝癌臨床病理特征的關(guān)系

（1）GPC3在HCC中的陽(yáng)性率86.0%。（2）GPC3陽(yáng)性率在低分化腫瘤中最高。（3）GPC3的表達(dá)在性別、年齡、腫瘤直徑、分化程度、是否合并肝硬化、微血管侵犯（MVI）、肝被膜侵犯、衛(wèi)星結(jié)節(jié)和腫瘤性壞死等方面均無(wú)明顯差異（P>0.05），見(jiàn)表2。

2.3 AFP表達(dá)與肝細(xì)胞肝癌臨床病理特征的關(guān)系

（1）AFP在HCC中的陽(yáng)性率31.6%。（2）AFP陽(yáng)性率在低分化腫瘤中最高。（3）AFP的表達(dá)在組織分化程度、微血管侵犯（MVI）、衛(wèi)星結(jié)節(jié)等臨床病理特征方面存在差異（P<0.05），而在性別、年齡、腫瘤直徑、是否合并肝硬化、肝被膜侵犯和腫瘤性壞死等方面均無(wú)明顯差異（P>0.05），見(jiàn)表3。

2.4 Ki-67表達(dá)與肝細(xì)胞肝癌臨床病理特征的關(guān)系

Ki-67增殖指數(shù)為（33±25）%（最低值3%，最高值90%）。Ki-67的表達(dá)在組織分化程度、微血管侵犯（MVI）、肝被膜侵犯、衛(wèi)星結(jié)節(jié)、腫瘤性壞死和性別等臨床病理特征方面存在差異（P<0.05），而在年齡、腫瘤直徑、是否合并肝硬化等方面均無(wú)明顯差異（P>0.05），見(jiàn)表4。