黃永梅

核酸檢測法(nucleic acid detection， NAT)可直接用于病毒核酸的檢測中， 對于獻(xiàn)血者乙型肝炎篩查具有非常重要的作用。實踐證明， 這種檢測法非常方便、可靠， 近年來在血液篩查中得到了廣泛應(yīng)用， 可準(zhǔn)確檢出多種因素引發(fā)的漏檢血液， 大大降低由于輸血導(dǎo)致的感染病毒發(fā)生率， 為臨床血液病毒篩查提供了重要檢測手段［1］。本次研究分別利用酶聯(lián)免疫吸附劑試驗 (enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA)、NAT檢測本站采集的血液， 重點觀察NAT用于血液標(biāo)本中乙肝肝炎病毒(hepatitis b virus， HBV)檢驗中的價值， 現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 選取2015年11月1日～2018年2月28日本血站無償獻(xiàn)血合格標(biāo)本120份作為研究對象， 均符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)［2］， 所有獻(xiàn)血者均經(jīng)干化學(xué)法行谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)檢測， 并利用金標(biāo)試紙法檢測乙型肝炎表面抗原(HBsAg)， 得到結(jié)果均合格。

1.2 血液采集方法 保留ELISA與ALT、離心NAT樣管,速率3000 r/min, 離心力1600 g, 時間為20 min, 于4℃下儲存?zhèn)溆? 48 h內(nèi)行檢測。準(zhǔn)確記錄好血液采集日期、樣品編碼等信息資料。獲得標(biāo)本需在2 h內(nèi)進(jìn)行處理, 并轉(zhuǎn)至冰箱內(nèi),確保冰箱溫度在2～8℃, 2～3 h內(nèi)轉(zhuǎn)至離心保存, 在24 h內(nèi)行血清學(xué)篩查, 并進(jìn)行NAT檢測。

1.3 檢測方法 全部嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行各項操作，所有試劑均確保在有效期內(nèi)使用， 儀器設(shè)備有瑞士哈美頓STAR全自動樣儀、BEHRING全自動酶免后處理機(jī)、Cobas s 201核酸檢測系統(tǒng)、COBAS AmpliPrep 核酸提取儀及COBAS Taqman核酸擴(kuò)增檢測儀)。①ELISA檢測：每份血液標(biāo)本進(jìn)行HBsAg檢測時均給予2種ELISA試劑， 并在每批實驗中設(shè)置陰性對照組、陽性對照組、室內(nèi)質(zhì)控品組與空白對照組。檢測結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：樣本光密度值與臨界值的比值(S/CO)≥1為陽性， 該狀態(tài)下血液檢測結(jié)果不符合標(biāo)準(zhǔn)；0.5＜S/CO＜1為灰區(qū)， 該狀態(tài)下血液檢測結(jié)果不符合標(biāo)準(zhǔn)；S/CO＜0.5為陰性， 該狀態(tài)下血液檢測結(jié)果符合標(biāo)準(zhǔn)。②NAT檢測：利用混樣方法檢測核酸。在每級混樣中設(shè)置6個標(biāo)本，設(shè)定內(nèi)對照， 設(shè)定混合測定陰性為陰性， 對混合測定陽性者進(jìn)行拆分， 如拆分檢測呈陰性則為NAT陰性， 如拆分測定呈陽性， 則為NAT陽性。③追蹤隨訪：NAT呈陽性標(biāo)本中， 核酸確認(rèn)為陽性， 但“二對半”檢測結(jié)果為陰性和核酸確認(rèn)陰性獻(xiàn)血者應(yīng)進(jìn)行追蹤隨訪， 2個月后重新采樣。

2 結(jié)果

2.1 ELISA檢測結(jié)果 120份血液標(biāo)本中, ELISA檢測單試劑陽性2份, 雙試劑陰性118份。見表1。

2.2 NAT檢測結(jié)果 120份血液標(biāo)本中, NAT檢測陰性105份, 陽性15份, 經(jīng)NAT確認(rèn)陽性12份, ELISA確認(rèn)陽性1份。最終確認(rèn)陽性的13份標(biāo)本中, 僅2份ELISA檢測為單試劑陽性, 而NAT檢測均為陽性。見表1。

2.3 追蹤隨訪結(jié)果 NAT檢測呈陽性的15份標(biāo)本中, 對符合條件的獻(xiàn)血者進(jìn)行追蹤隨訪, ELISA檢測陰性轉(zhuǎn)化為陽性2例, 該血樣于ELISA窗口期NAT檢測發(fā)現(xiàn), NAT檢測有1例隱匿性HBV感染。見表1。

表1 120份血液標(biāo)本ELISA檢測與NAT檢測結(jié)果(份)

3 討論

HBV病毒、丙型肝炎病毒、艾滋病病毒均可經(jīng)過血液傳播， 對人類身體健康存在嚴(yán)重威脅， 相關(guān)資料顯示， 發(fā)展中國家采集的血液中， 約5%～20%的血液中包含上述3種病毒［3］， 同時， 每年經(jīng)輸血與非安全性注射引發(fā)的感染HBV的人數(shù)高達(dá)1600萬人， 并且丙型肝炎感染人數(shù)也高達(dá)470萬人 ， 艾滋病毒的感染人數(shù)也非常高 ， 約為 16 萬人［4］， 嚴(yán)重阻礙著我國經(jīng)濟(jì)與社會發(fā)展。

HBV是一種通過血液傳播的病毒性傳染病， 對獻(xiàn)血人群進(jìn)行血液篩查是預(yù)防HBV傳播的一條重要途徑。ELISA是臨床診斷HBV使用頻率最高的一種方法， 通常性檢驗指標(biāo)為HBsAg， 該檢測方法具有便宜、快捷等優(yōu)點， 因此在血液篩查工作中占據(jù)著非常重要的地位［5］。但是因為隱匿性HBV、HBV感染窗口期等問題存在， 臨床檢測中存在較大的HBV漏檢風(fēng)險。NAT可以為血清學(xué)診斷方法提供補(bǔ)充， 該檢測方法是一種新型分子生物學(xué)診斷方法， 主要通過對HBVDNA含量測定， 快速、直接的反映出HBV感染的具體情況，其檢測結(jié)果具有較高的靈敏性， 現(xiàn)在已經(jīng)在獻(xiàn)血者血液病毒感染篩查工作中得到了廣泛應(yīng)用。

輸血是否存在安全性， 其風(fēng)險主要在于被篩查病毒的“窗口期”， 相關(guān)資料顯示， 經(jīng)NAT檢測可有效減少HBV等“窗口期”， 其減少率可達(dá)40%～75%， 大大降低病毒通過輸血傳播的風(fēng)險［6］。本次研究NAT呈陽性標(biāo)本中， 核酸確認(rèn)為陽性，但“二對半”檢測結(jié)果為陰性和核酸確認(rèn)陰性獻(xiàn)血者進(jìn)行追蹤隨訪， ELISA測定陰性轉(zhuǎn)化為陽性2例， 該血樣于ELISA窗口期NAT檢測發(fā)現(xiàn)， NAT測定共有1例隱匿性HBV感染者，可見NAT檢測在血液篩查中具有非常重要的價值。在NAT檢測中， 所用的試劑必須具有比較高的靈敏性和特異性， 并且對實驗環(huán)境也提出了比較高的要求， 比其他檢測方法要求更為嚴(yán)格， 檢查過程中使用的設(shè)備與試劑要求都比較高， 大大提升了血液檢測的成本， 但也加強(qiáng)了血液安全的保障。另外， NAT自身存在一定局限性， 一般如果病毒載量較低時，利用NAT檢測是很難獲得準(zhǔn)確的結(jié)果［7，8］。

綜上所述， 在血液篩查中應(yīng)用NAT檢測， 可顯著提升血液病毒檢出率， 為確保血液安全提供保證， 值得在臨床上推廣。NAT可以有效縮減“窗口期”， 同時減少通過輸血途徑傳播病毒的風(fēng)險性， 但是在臨床診斷中也會出現(xiàn)漏檢標(biāo)本。在實施NAT時， 應(yīng)對病毒核酸加以重點關(guān)注， 而ELISA則為抗原或抗體， 以上兩種檢測方法體現(xiàn)的檢測原理與方法上存在一定差異， 因此， 這兩種檢測方法在血液標(biāo)本檢測中不存在重復(fù)性， 體現(xiàn)為一定的互補(bǔ)性， 均為血液篩查中非常重要的檢測方法。