李 衛(wèi)，張 月，賈浩然，李保同

（江西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，南昌 330045）

四唑蟲酰胺（tetraniliprole）是拜耳公司研發(fā)的新型雙酰胺類殺蟲劑，結(jié)構(gòu)式見圖1，其用于防治鱗翅目、鞘翅目和雙翅目害蟲[1-2]。目前四唑蟲酰胺還處于田間試驗(yàn)階段，其制劑分析方法在國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少[3]。本文建立高效液相色譜法檢測(cè)四唑蟲酰胺有效成分分析方法，本法操作簡(jiǎn)便快速、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于四唑蟲酰胺制劑的定量分析。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

Agilent 1260型高效液相色譜儀（配自動(dòng)進(jìn)樣裝置）；色譜柱：Zorbax Eclipse XDB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；SB-5200DT超聲波清洗器；過濾器：0.22 μm過濾膜。

乙腈（色譜純），西隴科學(xué)股份有限公司；超純水；四唑蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品（≥99%）、18%四唑蟲酰胺懸浮劑，拜耳作物科學(xué)（中國(guó)）有限公司。

圖1 四唑蟲酰胺結(jié)構(gòu)式

1.2 色譜條件

梯度洗脫條件：以乙腈+水為流動(dòng)相，0～2.0 min，V乙腈∶V水=58∶42；2.1～3.0 min，V乙腈∶V水=95∶5；3.1～3.2 min，V乙腈∶V水=58∶42。流速：0.8 mL/min；進(jìn)樣體積：10 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：262 nm；四唑蟲酰胺保留時(shí)間約3.8 min。

1.3 測(cè)定步驟

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

稱取四唑蟲酰胺原藥0.01 g（精確至0.000 1 g），置于100 mL容量瓶中，用80 mL乙腈溶解，超聲波水浴10 min，冷卻至室溫，用乙腈定容并搖勻，得100 mg/L四唑蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液。溶液過濾膜，置于4℃冰箱備用。

1.3.2 試樣溶液配制

稱取18%四唑蟲酰胺懸浮劑0.056 g（精確至0.000 1 g），置于100 mL容量瓶中，用80 mL乙腈溶解，超聲波水浴10 min，冷卻至室溫，用乙腈定容并搖勻，得100 mg/L四唑蟲酰胺試樣溶液，溶液過濾膜，置于4℃冰箱備用。

1.3.3 測(cè)定

在上述色譜操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針的峰度變化小于1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序依次進(jìn)行測(cè)定。用外標(biāo)法分別計(jì)算四唑蟲酰胺的含量，四唑蟲酰胺標(biāo)溶液樣色譜圖見圖2，試樣溶液色譜圖見圖3。

圖2 四唑蟲酰胺標(biāo)樣色譜圖

圖3 18%四唑蟲酰胺懸浮劑試樣色譜圖

1.4 計(jì)算

經(jīng)上述方法測(cè)得標(biāo)樣溶液和試樣溶液中四唑蟲酰胺的峰面積，根據(jù)下列公式外標(biāo)法計(jì)算試樣中四唑蟲酰胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w（%）。

式中：A1為標(biāo)樣溶液中四唑蟲酰胺峰面積，A2為試樣溶液中四唑蟲酰胺峰面積，m1為四唑蟲酰胺標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2為四唑蟲酰胺試樣的質(zhì)量，g；P為標(biāo)樣中四唑蟲酰胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取100 mg/L四唑蟲酰胺標(biāo)樣溶液放入紫外分光光度計(jì)中，選擇200～400 nm波長(zhǎng)下掃描，獲得相應(yīng)的紫外吸收光譜圖見圖4。由圖4可知，四唑蟲酰胺最大吸收波長(zhǎng)在210 nm，262 nm波長(zhǎng)處吸收較好。由于溶劑乙腈在波長(zhǎng)小于220 nm時(shí)也有較強(qiáng)的吸收峰，為了避免其對(duì)樣品分析產(chǎn)生影響，所以最終選用262 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。且在262 nm條件下，四唑蟲酰胺與雜質(zhì)可有效分離。

圖4四唑蟲酰胺紫外吸收光譜圖

2.2 流動(dòng)相的選擇

分別選用乙腈+水、甲醇+水2種體系，按不同比例為流動(dòng)相，采用Zorbax Eclipse XDB-C18色譜柱進(jìn)行分析試驗(yàn)。結(jié)果顯示，選用甲醇+水為流動(dòng)相時(shí)，有效成分與雜質(zhì)不能較好分離。選用乙腈和水作為流動(dòng)相，當(dāng)乙腈比例較小時(shí)，保留時(shí)間長(zhǎng)，檢測(cè)效率降低，而當(dāng)乙腈比例較大，保留時(shí)間短且有雜質(zhì)峰干擾。經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)，梯度洗脫條件定為：以乙腈+水為流動(dòng)相，0～2.0 min，V乙腈∶V水=58∶42；2.1～3.0 min，V乙腈∶V水=95∶5；3.1～3.2 min，V乙腈∶V水=58∶42。在此梯度條件下，儀器基線平穩(wěn)，色譜峰保留時(shí)間合適，有效成分完全分離，峰形對(duì)稱。

2.3 方法的線性相關(guān)性測(cè)定

將四唑蟲酰胺配成一系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述色譜操作條件對(duì)樣品進(jìn)行峰面積的測(cè)定，每個(gè)質(zhì)量濃度重復(fù)2次，求其峰面積平均值。分別以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積作為縱坐標(biāo)繪圖，得到線性關(guān)系曲線。四唑蟲酰胺線性回歸方程為y=26.586x-0.953，R2=1.000。四唑蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖5所示。

圖5 四唑蟲酰胺線性關(guān)系圖

2.4 方法精密度測(cè)定

從同一18%四唑蟲酰胺懸浮劑中稱取6份試樣，按照上述方法測(cè)定四唑蟲酰胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，驗(yàn)證此分析方法的精密度，計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)偏差與變異系數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果表明，四唑蟲酰胺的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.12，變異系數(shù)為0.67%（見表1）。

2.5 方法準(zhǔn)確度測(cè)定

在已知含量的18%四唑蟲酰胺懸浮劑試樣中，分別加入一定量的四唑蟲酰胺標(biāo)樣溶液，按照上述色譜操作條件下進(jìn)行6次添加回收率測(cè)定。結(jié)果表明，四唑蟲酰胺的回收率為100.05%～100.91%，平均回收率為100.63%（見表2）。

表1 18%四唑蟲酰胺懸浮劑精密度測(cè)定結(jié)果

表2 18%四唑蟲酰胺懸浮劑準(zhǔn)確度測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

本試驗(yàn)建立了18%四唑蟲酰胺懸浮劑的高效液應(yīng)，得到2-[4-(4-氯苯氧基)-2-三氟甲基苯基] -1-[1,2,4] 三唑-1-基丙-2-醇[6]。相色譜分析方法。該方法精密度和準(zhǔn)確度良好，測(cè)量快速、簡(jiǎn)便，適用于四唑蟲酰胺的分析檢測(cè)。