唐云姣 霍秀龍 劉宏梅 黃百花

（1.百色市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西百色 533000；2.平果縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西平果 531400）

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒引起的高度接觸性、急性、熱性傳染病，常發(fā)生在牛、羊、豬等偶蹄類(lèi)動(dòng)物[1]。主要傳播途徑為接觸傳染。臨床癥狀為：蹄部、口腔黏膜、乳房皮膚發(fā)生水皰和潰爛，嚴(yán)重時(shí)口腔有條狀黏液流出[2]。我國(guó)的口蹄疫僅見(jiàn)O、A、亞洲I型血清型，其中O型感染最為廣泛。百色市地處廣西的西北部，北與貴州省接壤，西與云南省毗鄰，南與越南交界，是滇、黔出海大通道，日常途經(jīng)運(yùn)往沿海發(fā)達(dá)地區(qū)的畜禽比較多，加上走私畜禽及其產(chǎn)品違法行為時(shí)有發(fā)生，動(dòng)物疫病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)大，防控工作異常嚴(yán)峻。近年來(lái)，為貫徹落實(shí)《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》生豬O型口蹄疫防治目標(biāo)，百色市建立健全市、縣、鄉(xiāng)、村四級(jí)動(dòng)物防疫隊(duì)伍建設(shè)，完善強(qiáng)制免疫、監(jiān)測(cè)預(yù)警、應(yīng)急處置、區(qū)域化管理等工作機(jī)制，對(duì)內(nèi)狠抓生豬O型口蹄疫免疫密度和免疫質(zhì)量，對(duì)外嚴(yán)堵境外疫情轉(zhuǎn)入，有效地防止生豬O型口蹄疫疫情發(fā)生流行，確保生豬生產(chǎn)安全、產(chǎn)品質(zhì)量安全和公共衛(wèi)生安全。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗。政府采購(gòu)調(diào)撥豬口蹄疫O型滅活疫苗，毒株為 O/MYA98/BY/2010株，由中牧實(shí)業(yè)股份有限公司、中農(nóng)威特生物科技股份有限公司等生產(chǎn)提供。

1.1.2 樣品來(lái)源。2016-2018年百色市隨機(jī)采集種畜場(chǎng)、規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)、農(nóng)村散養(yǎng)戶(hù)、屠宰場(chǎng)、交易市場(chǎng)生豬血清樣品16849份。病原監(jiān)測(cè)用組織樣品采自本市規(guī)模豬場(chǎng)、農(nóng)村散養(yǎng)戶(hù)、屠宰場(chǎng)和生豬交易市場(chǎng)共2666份。

1.1.3 檢測(cè)試劑。口蹄疫病毒O型抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒及口蹄疫O型病毒抗原，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)；2016年使用北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司生產(chǎn)的RTPCR試劑盒，2017-2018年使用澳東生物科技有限公司的熒光RTPCR試劑盒。

1.2 方法

（1）免疫抗體使用液相阻斷ELISA檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)方法按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，結(jié)果抗體效價(jià)大于或等于1：64判為口蹄疫陽(yáng)性，即免疫抗體合格；小于1：64判為陰性，即免疫抗體不合格。病原核酸檢測(cè)操作方法按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，2016年使用北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司生產(chǎn)，檢測(cè)方法按《口蹄疫診斷技術(shù)》GB/T 18935-2003，采用RT-PCR方法，結(jié)果：在陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)131bp，陰性對(duì)照無(wú)此擴(kuò)增帶時(shí)試驗(yàn)結(jié)果成立；被檢樣品出現(xiàn)131bp擴(kuò)增片段時(shí)，判定為口蹄疫病毒陽(yáng)性，否則判為陰性。2017年～2018年使用澳東生物科技有限公司的熒光RT-PCR試劑盒，檢測(cè)方法為《口蹄疫病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)方法》GB/T 27528-2011，結(jié)果：Ct值≤30且出現(xiàn)典型的S形擴(kuò)增曲線的樣本為陽(yáng)性；Ct值＞35或無(wú)明顯的擴(kuò)增曲線，為陰性；30＜Ct值＜35有明顯的擴(kuò)增曲線為可疑。

（2）根據(jù)實(shí)驗(yàn)室免疫抗體檢測(cè)結(jié)果，統(tǒng)計(jì)、分析抗體陽(yáng)性率，利用excel 2007 單因素方差分析法對(duì)各數(shù)據(jù)進(jìn)行差異性分析，當(dāng)P＜0.05時(shí)為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 2016～2018年生豬O型口蹄疫免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果

2016～2018年生豬O型口蹄疫抗體平均合格率均達(dá)到80%以上，達(dá)到農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%以上要求；從樣品來(lái)源可以看出，種畜場(chǎng)生豬O型口蹄疫抗體平均合格率為90.4%顯著高于其他監(jiān)測(cè)場(chǎng)點(diǎn)，交易市場(chǎng)免疫抗體平均合格率48.7%為最低，規(guī)模場(chǎng)、散養(yǎng)戶(hù)、屠宰場(chǎng)的抗體平均合格率分別為81.5%、85.7%、85.1%，相差不大。規(guī)模場(chǎng)抗體合格率連續(xù)3年均低于散養(yǎng)戶(hù)。如表1所示。

2.2 2016～2018年豬O型口蹄疫抗體監(jiān)測(cè)群體合格率情況

從年度統(tǒng)計(jì)來(lái)看，生豬O型口蹄疫監(jiān)測(cè)群體抗體合格率均為80%以上；從樣品來(lái)源可以看出，種畜場(chǎng)生豬O型口蹄疫監(jiān)測(cè)群體抗體合格率為100%顯著高于其他場(chǎng)或戶(hù)，交易市場(chǎng)群體免疫抗體合格率33.3%為最低。如表2所示。

表1 2016～2018年豬O型口蹄疫免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果

表2 2016～2018年豬O型口蹄疫抗體監(jiān)測(cè)群體合格率統(tǒng)計(jì)結(jié)果

表3 2016-2018年豬O型口蹄疫病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果表

2.3 2016～2018年豬O型口蹄疫病原核酸檢測(cè)結(jié)果

2016～2018年共采自于規(guī)模豬場(chǎng)、農(nóng)村散養(yǎng)戶(hù)、屠宰場(chǎng)、交易市場(chǎng)生豬組織樣品2666份，病原核酸檢測(cè)結(jié)果全部呈陰性。如表3所示。

3 討論與小結(jié)

（1）建立健全基層動(dòng)物防疫隊(duì)伍，是提升生豬口蹄疫強(qiáng)制免疫能力的基礎(chǔ)。百色市12個(gè)縣（市、區(qū)）均建立有動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)，在職在編人員有157人，135個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)均建立水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站，在職在編人員有445人，1849個(gè)行政村均配備村級(jí)動(dòng)物防疫員1539人，構(gòu)建了基層動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫工作機(jī)構(gòu)網(wǎng)絡(luò)，保障免疫工作順利開(kāi)展。近幾年推行切合實(shí)際的科學(xué)免疫程序，選擇具有匹配性強(qiáng)的 O/MYA98/BY/2010疫苗毒株進(jìn)行免疫，加強(qiáng)對(duì)農(nóng)村散養(yǎng)戶(hù)豬O型口蹄疫的免疫力度，推行二次強(qiáng)化免疫，提高了生豬的抗體水平。2016～2018年全市開(kāi)展生豬O型口蹄疫免疫分別為 319.46萬(wàn)頭、339.12萬(wàn)頭、323.58萬(wàn)頭，免疫率分別為99.89%、98.54%、99.68%，生豬群體免疫維持在高密度狀態(tài)，建立了堅(jiān)強(qiáng)的免疫屏障。

（2）完善獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室體系建設(shè)，是提升生豬口蹄疫監(jiān)測(cè)預(yù)警能力的前提條件。百色市級(jí)和轄12個(gè)縣（市、區(qū)）均建設(shè)有獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室并全部通過(guò)自治區(qū)考核評(píng)審，百色市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室還通過(guò)計(jì)量認(rèn)證評(píng)審，所有實(shí)驗(yàn)室均建立了完善的質(zhì)量管理體系文件，實(shí)驗(yàn)室管理工作規(guī)范。2016～2018年全市共開(kāi)展生豬O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)16849份，免疫抗體合格率分別為83.6%、81.1%、89.3%，合格率均高于規(guī)定要求，其中種畜場(chǎng)生豬的免疫抗體合格率高于其他監(jiān)測(cè)場(chǎng)點(diǎn)，主要原因是種畜場(chǎng)的免疫程序更加科學(xué)、合理，能夠開(kāi)展二次及以上免疫。交易市場(chǎng)生豬免疫抗體合格率48.7%為最低，主要原因是百色市生豬交易市場(chǎng)主要販賣(mài)40-60d左右的仔豬，首免日齡大概在35d左右；項(xiàng)朝榮、王儒磊等人的實(shí)驗(yàn)顯示，仔豬首免后抗體下降明顯，提示首次免疫時(shí)疫苗免疫效果受母源抗體干擾較大[3]；韋顯凱、鄭敏等人的實(shí)驗(yàn)也顯示，仔豬首免后1個(gè)月采血檢測(cè)，抗體合格率只有40～50%，產(chǎn)生的抗體滴度較低[4]；黃寶學(xué)、蒙振畝、班雪花等人的實(shí)驗(yàn)也顯示，仔豬二次免疫后10d的抗體合格率為90%以上，為了使豬群獲得較好的免疫抗體水平，應(yīng)大力實(shí)施對(duì)豬群進(jìn)行 2 次以上的免疫[5]；因此，交易后的仔豬應(yīng)及時(shí)進(jìn)行二次免疫，縮短免疫空白期。同時(shí)對(duì)采自規(guī)模豬場(chǎng)、農(nóng)村散養(yǎng)戶(hù)、屠宰場(chǎng)和生豬交易市場(chǎng)組織樣品共2666份進(jìn)行病原核酸檢測(cè)全部呈陰性，表明百色市不存在免疫帶毒現(xiàn)象。從表1來(lái)看，交易市場(chǎng)生豬O型口蹄疫免疫抗體平均合格率為48.7%，低于規(guī)定要求，但從未檢測(cè)出病毒核酸陽(yáng)性也沒(méi)發(fā)生過(guò)疫情，這也表明百色市生豬O型口蹄疫感染流行風(fēng)險(xiǎn)比較低。

（3）狠抓基層動(dòng)物防疫物資規(guī)范化管理，完善冷鏈體系建設(shè)，為保證生豬口蹄疫疫苗質(zhì)量提供保障。百色市建設(shè)有足夠容量的疫苗保存冷庫(kù)，并配有專(zhuān)用冷藏運(yùn)輸車(chē)，12個(gè)縣（市、區(qū)）都配備了動(dòng)物疫苗運(yùn)輸溫度監(jiān)控儀，6個(gè)縣（區(qū)）分別建設(shè)和配置了動(dòng)物疫苗貯存冷庫(kù)和溫度遠(yuǎn)程監(jiān)控警報(bào)系統(tǒng)，其他6個(gè)縣（市）也配備了足量的冰柜用于貯存動(dòng)物疫苗；135個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)全部配備了總?cè)萘坎簧儆?50升的冰箱和冰柜；1539個(gè)村級(jí)動(dòng)物防疫員全部配備了動(dòng)物疫苗保溫箱，有70%配備了疫苗儲(chǔ)存冰箱。建立了一條包括市、縣、鄉(xiāng)、村四級(jí)的動(dòng)物疫苗冷鏈系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)了疫苗運(yùn)輸貯存溫度的全程監(jiān)控，確保了疫苗質(zhì)量。

（4）建立動(dòng)物防疫合作社，是推進(jìn)生豬口蹄疫防治社會(huì)化服務(wù)能力的重要抓手。截至2018年底，百色市轄12個(gè)縣（市、區(qū)）135個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（街道辦事處）正式注冊(cè)成立動(dòng)物防疫合作社136個(gè)，全市鄉(xiāng)鎮(zhèn)及街道辦事處建立合作社實(shí)現(xiàn)了全覆蓋。建立動(dòng)物防疫合作社，優(yōu)化了動(dòng)物防疫一線人員隊(duì)伍，并對(duì)全體合作社人員開(kāi)展全方位技術(shù)培訓(xùn)，為提高動(dòng)物防疫工作質(zhì)量打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。