陳曉祺

【摘要】目的：通過恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測(cè)杭州市第三人民醫(yī)院泌尿道感染患者沙眼衣原體RNA（CT-RNA）和解脲脲原體RNA（UU-RNA），分析其感染情況及特點(diǎn)。方法：采集2193例泌尿道感染患者尿液樣本，采用實(shí)時(shí)熒光恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)（SAT）檢測(cè)解脲脲原體RNA和沙眼衣原體RNA。結(jié)果：CT陽性率男性明顯高于女性（P

【關(guān)鍵詞】泌尿道感染;沙眼衣原體;解脲脲原體;RNA;實(shí)時(shí)熒光恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

沙眼衣原體（CT）和解脲脲原體（uu）是經(jīng)性接觸傳播引起的非淋菌性泌尿生殖道感染（NGU）的主要病原，兩者均可寄生于健康人的泌尿生殖道，當(dāng)機(jī)體免疫力下降時(shí)，這些菌群會(huì)變成致病菌，從而造成泌尿生殖道感染。以實(shí)時(shí)熒光恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)病原體RNA，避免了機(jī)體殘留病原體DNA核酸片段的干擾，具有較高的靈敏度和特異性。本文探究2193例泌尿道感染患者沙眼衣原體RNA和解脲脲原體RNA檢驗(yàn)結(jié)果，報(bào)告如下。

1材料與方法

2016年1月至2017年12月在杭州市第三人民醫(yī)院初診為泌尿道感染的患者2193例（男1608例，女585例），最小年齡15歲，最大年齡87歲，平均年齡37.0±12.6歲。

1.2標(biāo)本采集

取清晨首次尿，或長時(shí)間（至少l小時(shí)）不排尿后的首段尿2ml，于樣本保存液混合，待測(cè)。

1.3檢測(cè)方法

采用實(shí)時(shí)熒光恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)，分核酸提取和核酸檢測(cè)兩個(gè)步驟。在核酸提取過程中，CT、UU裂解釋放出的核酸與核酸提取液中的磁性顆粒特異性結(jié)合，通過清洗磁性顆粒而獲得純凈的靶標(biāo)核酸（RNA）。實(shí)時(shí)熒光核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)使用M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶、T7RNA多聚酶和優(yōu)化探針技術(shù)來同時(shí)實(shí)現(xiàn)。反轉(zhuǎn)錄酶用于產(chǎn)生靶標(biāo)核酸（RNA）的一個(gè)DNA拷貝，T7RNA多聚酶從DNA拷貝上產(chǎn)生多個(gè)RNA拷貝，帶有熒光標(biāo)記的優(yōu)化探針和這些RNA拷貝特異性結(jié)合，該熒光信號(hào)可由檢測(cè)儀器捕獲。根據(jù)實(shí)時(shí)熒光信號(hào)出現(xiàn)的時(shí)間與強(qiáng)度，結(jié)合陽性對(duì)照和陰性對(duì)照對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行判斷。

1.4儀器與試劑

Bio-Rad全自動(dòng)核酸擴(kuò)增儀。儀器型號(hào)Bio-Rad CFX96。試劑：上海仁度生物科技有限公司生產(chǎn)的沙眼衣原體（cT）核酸檢測(cè)試劑盒、解脲脲原體（UU）核酸檢測(cè)試劑盒。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)采用SPSS21.0軟件進(jìn)行處理，率的比較采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同性別泌尿道感染患者CT、UU、CT+UU感染情況

CT陽性率男性高于女性（P<0.001），UU陽性率女性高于男性（P<0.001），CT+UU混合感染陽性率男性高于女性（P<0.001）。詳見表1。

2.2不同年齡段泌尿道感染患者CT、UU、CT+UU感染情況

按照患者年齡進(jìn)行分組統(tǒng)計(jì)，≤25歲年齡組CT、UU、CT+UU陽性率均為最高，>55歲年齡組CT、UU、CT+UU陽性率均為最低。詳見表2。

3討論

（1）CT感染是男性尿道炎常見原因，未經(jīng)治療者多數(shù)轉(zhuǎn)變?yōu)槁裕芷谛约又?，可合并附睪炎、前列腺炎等。在女性可引起尿道炎、宮頸炎、輸卵管炎、盆腔炎等。UU可引起男性前列腺炎、附睪炎、不育癥，女性可引起泌尿生殖道炎癥、不孕癥，并可感染胎兒導(dǎo)致流產(chǎn)、早產(chǎn)及低體重胎兒。

（2）實(shí)時(shí)熒光恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)對(duì)于檢測(cè)CT、UU的敏感性、特異性均很高。樣本保存液中包括去垢劑，高離子濃度能夠抑制RNase活性，盡量保護(hù)新鮮樣本里的RNA免受降解。而尿液作為一種非侵入式取樣，可由患者自行取材，一方面減少了醫(yī)生的工作量，同時(shí)避免拭子取樣的尷尬和痛苦，且可減少醫(yī)源性感染。尤其對(duì)于男性患者，其優(yōu)勢(shì)更加明顯。

綜上所述，泌尿道感染患者中，CT和UU感染率較高，與性別、年齡因素有關(guān)。